邱丽娟
- 作品数：13 被引量：8H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家自然科学基金云南省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CpG ODN佐剂序列IMB-AC5的体外免疫刺激活性分析被引量：1
- 2017年
- 目的对CpG ODN候选佐剂IMB-AC5进行体外免疫刺激活性分析。方法以目前国外进入临床研究的两种CpG ODN佐剂序列(Coley 7909和Dynavax ISS1018)为对照,采用~3H-TDR法检测IMB-AC5刺激人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)的增殖活性;流式细胞术分析CD19+B活化细胞表面CD69表达水平;ELISA法检测刺激后GEN细胞产生的IL-6和IFNα水平。结果 3种CpG ODN佐剂均能明显刺激人PBLs的增生,IMB-AC5刺激增生能力优于Dynavax ISS1018,略低于Coley 7909;IMB-AC5活化CD19+B细胞表面CD69表达水平与Coley7909相似,Dynavax ISS1018活化效果略低于前二者;3种CpG ODN佐剂体外活化树突状细胞水平差异较大,且呈明显的剂量依赖,IMB-AC5的最佳活化浓度范围为0.15~1.5μmol/L,Coley 7909的最佳活化浓度范围为<0.25μmol/L,活化效果均优于Dynavax ISS1018。结论 IMB-AC5可作为有效的疫苗候选佐剂,且不低于国外同类佐剂的体外免疫刺激活性。
- 赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明
- 关键词：CPGODN佐剂
- Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法
- 本发明提供一种Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，通过Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒的接种培养，再构建Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒标准品质粒，参照所得Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒前膜蛋白区目的基因序列设计下列Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒荧光定量PCR...
- 孙强明黄新伟席珏敏赵玉娇潘玥陈俊英王晓丹李多邱丽娟姜黎明
- 文献传递
- 登革病毒四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区的表达和免疫原性鉴定被引量：1
- 2016年
- 登革热在全球范围内广泛流行,但是目前为止却仍然没有疫苗上市,疫苗的开发迫在眉睫。抗体依赖增强感染效应是登革病毒疫苗开发中遇到的一个瓶颈问题。研究表明登革病毒的包膜蛋白Ⅲ区能够介导中和抗体产生,且诱导产生较少的交叉抗体或无交叉抗体,能够大大减弱抗体依赖增强感染效应,因而是登革热重组蛋白疫苗的首选靶标。通过酵母密码子优化后合成同时包含4种血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区的四价联合DV EDⅢ蛋白序列,随后构建酵母表达质粒,并获得酵母表达菌株,经诱导后四联DV EDⅢ蛋白获得高效表达。通过Western blot、ELISA检测及蛋白质免疫原性鉴定,结果表明登革病毒四联DV EDⅢ蛋白表达质粒构建成功,重组蛋白在毕赤酵母获得高效表达,免疫小鼠后能够介导产生较高水平的血清效价。这表明已获得了能引起有效免疫反应的四型登革病毒EDⅢ蛋白,为登革病毒疫苗的研究提供了良好的基础。
- 邱丽娟赵玉娇李多黄新伟王晓丹席珏敏潘玥陈俊英孙强明
- 关键词：登革病毒疫苗重组蛋白
- 一种Vero细胞适应性登革病毒减毒株及其应用
- 本发明提供一种Vero细胞适应性登革病毒减毒株及其应用，属于生物技术领域。Vero细胞适应性登革病毒减毒株毒株DV‑V28的保藏编号为CCTCC NO：V202355。本发明提供的登革病毒株DV‑V28在登革病毒减毒活疫...
- 孙强明邱丽娟潘玥陈俊英
- CpG ODN佐剂序列IMB-AC5联合乙型肝炎疫苗的免疫原性分析
- 2016年
- 目的评价Cp G ODN佐剂序列IMB-AC5联合乙型肝炎疫苗的免疫原性,以评估IMB-AC5佐剂的应用前景。方法利用市售的单铝佐剂乙型肝炎疫苗,根据相同配比加入3种Cp G ODN（IMB-AC5及Coley 7909和Dynavax 1018）,作为实验组（V-AC5、V-7909和V-1018）,并以乙型肝炎疫苗为对照组,分别免疫BALB/c小鼠,于免疫后2、4、6、8周,经尾静脉采血,第10周处死小鼠采集全血,分离血清,采用乙肝表面抗体试剂盒检测anti-HBs抗体水平,ELISA法检测Ig G1/2a亚型抗体比例;ELISPOT法检测小鼠脾细胞IFNγ表达水平。结果免疫后0~4周内,各组小鼠血清抗体水平均无明显变化,第6周开始呈明显上升趋势,至第8周后趋于平缓;各实验组抗体水平均明显高于对照组（P〈0.05）,V-AC5显示出与V-7909同样良好的体液免疫效果,略优于V-1018。免疫后各实验组小鼠血清中Ig G2a/Ig G1比例明显高于对照组。各实验组小鼠脾细胞斑点数明显高于对照组（P〈0.05）;V-AC5斑点数介于其他两个实验组之间。结论 IMB-AC5佐剂能显著活化B细胞产生抗体并具有刺激细胞免疫的效果,可增强疫苗的免疫原性。
- 赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明
- 关键词：CPGODN佐剂乙型肝炎疫苗免疫原性
- 一种I-IV型登革热病毒的通用检测试剂盒
- 本发明涉及一种I-IV型登革热病毒的通用检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。该试剂盒包括酶标记板、阴性对照血清、阳性对照NS1重组蛋白、检测抗体、显色底物和终止液。所述酶标记板上的包被抗体为DV14抗体，检测抗体为连接了生...
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- 文献传递
- 埃博拉病毒包膜糖蛋白二级结构及B细胞表位的预测
- 2015年
- 目的预测并分析从2014年西非埃博拉出血热暴发地区感染患者分离的扎伊尔型病毒株包膜糖蛋白（glycoprotein,GP）的二级结构及B细胞表位。方法通过Gen Bank搜索近期公布的分离自西非地区的扎伊尔型埃博拉病毒株基因组,获得GP1、GP2和s GP 3种包膜糖蛋白的基因及氨基酸序列,采用互联网服务器在线预测其二级结构及B细胞表位,并分析蛋白的各种氨基酸组成比例及可能的蛋白结合位点,通过亲/疏水性等参数判断氨基酸序列中可能暴露在蛋白结构表面或隐藏在内部的区段。结果在编码GP1、GP2和s GP的氨基酸中,占组成比例最多的均为苏氨酸。GP1和s GP可能的蛋白结合位点较多,且整个蛋白暴露于表面的区域和隐藏区域呈均匀相间分布;GP2结构较前二者特殊,存在一个暴露在蛋白结构表面的大片段的无序结构区域。GP1 N-末端第20～37和166～186区段,GP2 N-末端第361～379区段,s GP N-末端第20～37和166～185区段,可能为跨膜螺旋结构。s GP可能存在4个含有二硫键的区域。B细胞表位分析结果显示,GP1和GP2中疏水区域主要集中在N-末端第1～325位氨基酸之间;亲水区域主要集中在N-末端第326～676位氨基酸之间;亲水与疏水区域分界明显,几乎无交叉;可能存在2个线性表位,分别位于N-末端第324～450、461～676区段;预测共存在25个可能形成构象表位的氨基酸位点或序列,其中可能性在90%以上的位点或序列有6个。结论通过对此次流行于西非的埃博拉病毒包膜糖蛋白的二级结构及可能性B细胞表位的预测,为实验确定埃博拉病毒包膜糖蛋白的结构与功能、B细胞表位免疫识别以及埃博拉病毒预防、治疗和诊断制品的研发提供了参考。
- 赵玉娇黄新伟李多邱丽娟孙强明
- 关键词：埃博拉病毒糖蛋白蛋白质二级结构B细胞表位
- 埃博拉病毒包膜糖蛋白的密码子偏爱性分析被引量：4
- 2015年
- 目的对从2014年西非埃博拉暴发地区感染者分离的4个埃博拉病毒株基因组包膜糖蛋白编码基因进行密码子偏爱性分析,为埃博拉病毒包膜蛋白基因表达中宿主系统选择和密码子优化提供参考。方法通过Gene Bank搜索近期公布的分离自西非地区的4个埃博拉病毒株全基因组序列,获得编码包膜糖蛋白GP1和GP2的基因序列及蛋白编码序列。采用EMBOSS在线预测埃博拉病毒包膜糖蛋白的密码子偏爱性,并通过与Codon Usage Database中大肠杆菌、酵母及人的密码子使用频率进行比较,筛选最适埃博拉病毒GP蛋白体外表达的宿主物种,并提供相应密码子优化方案。结果埃博拉病毒基因组、GP1和GP2的Nc值均在57左右,CAI值均在0.7左右,表明其密码子偏爱性较均一,且基因的表达水平相对较高;编码GP1蛋白F、H、M、N、W等氨基酸和GP2蛋白D、K、N、Q、Y等氨基酸中不同密码子使用频率有较大差异;GP1和GP2蛋白密码子偏爱性有共同之处也存在明显差异。计算σGP/E.coli、σGP/Yeast、σGP/Human的比值,结果显示GP1中>2.0或<0.5的数量分别为24、20和19个;GP2中的数量分别为26、30和19,表明埃博拉病毒GP1和GP2蛋白与人的密码子使用频率较为接近。结论以密码子偏爱性分析作为辅助手段,分析出此次流行于西非的埃博拉病毒包膜糖蛋白的密码子偏爱性及最适表达物种及密码子优化方案,为体外表达GP1和GP2蛋白,从而研发埃博拉病毒检测试剂、亚单位疫苗及基因工程抗体提供参考。
- 赵玉娇黄新伟李多邱丽娟孙强明
- 关键词：埃博拉病毒包膜糖蛋白密码子偏爱性
- CpG ODN佐剂序列的筛选及其免疫刺激活性研究被引量：1
- 2016年
- 目的设计和筛选对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpGODN序列，研发能用于人用疫苗的有效核酸佐剂。方法根据具有免疫刺激活性的CpGODN序列结构特点，设计并合成出15条候选序列，分别合成并进行非硫代和硫代修饰。分选健康人PBMC细胞及Balb／c小鼠脾细胞，以不同CpGODN进行体外刺激，MTT法检测CpGODN诱导细胞增殖水平。随后将筛选出的有效CpGODN序列与人类基因组序列进行同源性比较，以评估其安全性。结果在刺激人PBMC和小鼠脾细胞72h后，硫代和非硫代修饰的15条序列A值均高于阴性对照组，其中IMB—AC5序列刺激人PBMC后A值分别达到0．377和0．334，与阳性对照ISS1018序列A值（0．387和0．338）接近；刺激小鼠脾细胞72h后，A值同样高于其他序列，达到0．571和0．486，与阳性对照ISS1018序列A值（0．588和0．464）接近。综合上述结果，选择5号非硫代序列作为候选佐剂。同源性比较结果显示，该序列与人类基因组序列没有同源性，与部分蛋白编码基因的同源性只有50％～65％，此外其部分序列与人18号染色体上的一些重复序列有同源性，最高同源性达62％。证明筛选出的新型CpGODN佐剂IMB—AC5安全性较高。结论设计筛选出对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpGODN序列IMB—AC5，与人类基因组序列具有较低同源性，为进一步研发人用疫苗佐剂奠定基础。
- 赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明
- 关键词：CPGODN佐剂同源性
- 信号素4D在结直肠癌中的作用机制研究
- 信号素4D（Semaphorin4D，Sema4D）能在肿瘤缺氧情况下，与其受体神经丛素-B1(Plexin-B1)相互作用继而诱导肿瘤内血管新生，因而可能是VEGF途径受阻时的补救途径，维持肿瘤生长。在前期研究中发现，...
- 邱丽娟
- 关键词：结直肠癌发病机制缺氧诱导因子
- 文献传递
