陈俊英
- 作品数：73 被引量：127H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家自然科学基金云南省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 一株引起无菌性脑膜脑炎柯萨奇B组3型病毒的分离和VP1基因分析被引量：1
- 2011年
- 摘要目的对一株从无菌性脑膜脑炎患者中分离到的柯萨奇B组3型病毒（coxsackievirusB3，CVB3）分离株KMA103-09进行VP1区的基因特征分析。方法采用Hep-2、RD细胞对患者粪便标本进行病毒分离，肠道病毒组合血清进行鉴别，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增病毒目的片段，测序后进行VP1基因分析，用Mega4．1等软件分析处理。结果肠道病毒组合血清鉴别为柯萨奇病毒B组3型（Cox．B3），从病毒性脑膜脑炎患者粪便标本中，分离到CVB3，其VPl区的核苷酸长度为849bp，未发现核苷酸插入与丢失。与山东04433／SD／CHN／2004／CB3株、山东05280／SD／CHN／2005／CB3株及山东YZ127／SD／CHN／2005／CB3株氨基酸同源，与其余国内分离株同源性高于为99．29％，与国外毒株的同源性为95．41％-96．47％。在进化树上与AM06HZ／SD／CHN／2006／CB3株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组3型（Cox．B3），分离株（KMA103—09）VP1区变异较小。
- 李华杨卉娟柯华昕陈俊英施海晶孙强明马绍辉
- 关键词：无菌性脑膜脑炎VP1基因
- Ⅲ型登革病毒在C6/36及Vero细胞中复制对其毒力的影响
- 2019年
- 目的探讨Ⅲ型登革病毒(dengue virus,DENV)在C6/36和Vero细胞中复制对其毒力的影响。方法将DV3-1及DV3-2两株Ⅲ型DENV在C6/36细胞上接种传代培养,待其毒力稳定再接种至Vero细胞连续传代培养。用Ⅲ型DENV标准质粒检测不同代次病毒拷贝数,PCR扩增获得传代毒种全长基因序列,并与原代病毒基因序列进行比对。结果DV3-1在C6/36细胞上传代至第17代次(P17-C6/36)时毒力保持稳定,DV3-2在盲传过程中均未见明显的细胞病变;将DV3-1和DV3-2第17代次病毒在Vero细胞上继续传代,DV3-1传至第10代次(P10-Vero)CPE为40%,DV3-2传至第4代次CPE达30%。DV3-1在P17-C6/36时具有较高的病毒拷贝数,在P0(原代病毒)及P10-Vero时病毒拷贝数偏低。与P0比较,P17-C6/36及P10-Vero全长碱基共16处发生突变,导致12个氨基酸的非同义突变,其中P0和P10-Vero在第5826、6251、7907位点碱基相同,P17-C6/36相应的氨基酸位点(第1942、2084、2636位点)均发生非同义突变。结论传代细胞更换可对Ⅲ型DENV的毒力造成影响,多次传代及更换细胞传代后仍可能发生回复突变。本研究为后续DENV减毒策略的研究提供了实验依据。
- 林垚洪珊王晓丹陈俊英潘玥孙强明
- 关键词：C6/36细胞VERO细胞毒力
- CpG ODN佐剂序列IMB-AC5的体外免疫刺激活性分析被引量：1
- 2017年
- 目的对CpG ODN候选佐剂IMB-AC5进行体外免疫刺激活性分析。方法以目前国外进入临床研究的两种CpG ODN佐剂序列(Coley 7909和Dynavax ISS1018)为对照,采用~3H-TDR法检测IMB-AC5刺激人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)的增殖活性;流式细胞术分析CD19+B活化细胞表面CD69表达水平;ELISA法检测刺激后GEN细胞产生的IL-6和IFNα水平。结果 3种CpG ODN佐剂均能明显刺激人PBLs的增生,IMB-AC5刺激增生能力优于Dynavax ISS1018,略低于Coley 7909;IMB-AC5活化CD19+B细胞表面CD69表达水平与Coley7909相似,Dynavax ISS1018活化效果略低于前二者;3种CpG ODN佐剂体外活化树突状细胞水平差异较大,且呈明显的剂量依赖,IMB-AC5的最佳活化浓度范围为0.15~1.5μmol/L,Coley 7909的最佳活化浓度范围为<0.25μmol/L,活化效果均优于Dynavax ISS1018。结论 IMB-AC5可作为有效的疫苗候选佐剂,且不低于国外同类佐剂的体外免疫刺激活性。
- 赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明
- 关键词：CPGODN佐剂
- 2008年柯萨奇病毒A组16型昆明分离株KMM08全基因组序列分析被引量：5
- 2012年
- 目的分析柯萨奇病毒A组16型（CA16）昆明分离株KMM08全基因序列，了解其遗传特性。方法设计针对CA16引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1，RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果获得KMM08全基因组核苷酸序列长度为7409bp，编码含2193个氨基酸残基的多聚蛋白；与其他CA16参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为79．0％～98．2％和94．5％～99．3％，其中SZ—HK08-3与国际标准株G10核苷酸和氨基酸同源性分别79．1％和94．8％；而与肠道病毒71型（EV71）标准株BrCr同源性分别为78．7％和89．0％。在各个区段上，KMM08与SZ．HK08—3的核苷酸和氨基酸同源性分别为97．0％～99．0％和98．0％-100．0％，同源性最高；与G10的核苷酸和氨基酸同源性分别为74．2％～86．9％和90．9％～97．0％；与Ev71BrCr核苷酸和氨基酸同源性分别在65．0％～84．9％和71．0％。95．2％。进化分析发现KMM08属于B基因型的一个分支。RDP3和SimPlot3．5．1软件分析发现Tainan．5079—98序列发现重组信号，而KMM08未发现。结论KMM08分离株为B基因型；CA16与EV71在非结构区发生重组。
- 马绍辉潘玥何春艳陈俊英施海晶孙强明李琦涵
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型全基因组
- 二乙烯亚胺灭活流感病毒的效果观察被引量：7
- 2008年
- 目的观察二乙烯亚胺(BEI)对流感病毒的灭活效果。方法分别使用甲醛和BEI对流感病毒进行灭活试验,通过血凝试验检测二者灭活效果,并确定各自最佳灭活时间。用灭活的病毒液免疫小鼠,检测其抗原性,并用RT-PCR方法分析灭活病毒基因组的完整性。以裂解剂TritonX-100裂解病毒后,分别加入甲醛和BEI灭活,采用单向免疫扩散法检测灭活不同时间病毒液的HA含量。结果BEI灭活36h可将病毒完全灭活;BEI灭活的病毒免疫小鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体;BEI灭活病毒液经RT-PCR,不能扩增出病毒基因;BEI灭活病毒的HA平均含量比甲醛灭活病毒的HA平均含量略高。结论BEI在灭活流感病毒感染性的同时,能够灭活病毒基因,并较好地保持病毒的抗原性。
- 魏晓露刘婧高菁霞张新文陈俊英黄秋香何香莲张云昆余磊姜述德廖国阳李映波
- 关键词：流感病毒灭活抗原性
- 人Semaphorin 4D慢病毒载体的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建并制备能够有效表达Semaphorin 4D的重组慢病毒。方法:从人急性T细胞白血病Jurkat细胞DNA扩增人Semaphorin 4D基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒,将纯化后的重组病毒直接感染293T和HUVEC细胞,通过免疫印迹、免疫荧光染色和血管内皮细胞迁移分析等方法检测Semaphorin 4D的表达和诱导血管内皮细胞迁移的作用。结果:重组慢病毒介导Semaphorin 4D在293T和HUVEC内获得表达,能介导血管内皮细胞迁移。结论:成功构建了表达Semaphorin 4D的重组慢病毒载体。
- 孙强明潘玥赵玉娇陈俊英施海晶马绍辉
- 关键词：SEMAPHORIN慢病毒血管新生基因治疗
- 人埃可病毒20型KM／EV20／2010分离株的全基因组序列分析
- 2015年
- 目的对人埃可病毒20型（EcH020）KM／EV20／2010分离株全基因组进行序列测定，并分析其分子变异和进化特点。方法设计针对KM／EV20／2010引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和序列测定获得全基因序列。利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果KM／EV20／2010病毒株基因组全长7395bp个核苷酸（nt），5’端和3’端分别为744nt和96nt的非编码区，5’和3’非编码区间为一个6549rlt长的开放阅读框，编码一个含2183个氨基酸的多聚蛋白，编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank中现有唯-1株ECH020JVl-1原型株全基因组序列相比对，核苷酸同源性为80．1％，氨基酸同源性为96．7％；构建基于全长VP1基因序列的进化树图并进行基因分型分析，ECH020可分为6个基因型，中国分离株分属Ⅲ和Ⅳ基因型，其中KM／EV20／2010属于基因型Ⅳ，且6个基因型之间核苷酸的差异为9．4％-21．7％。基于全基因组序列的种系进化分析提示KM／EV20／2010分离株与ECH020原型株JV-1遗传距离很远，未与原型株JV-1聚簇分布，而与ECH030病毒株遗传距离较近。分析发现KM／EV20／2010序列在非结构区可能存在重组。结论中国ECH020可分为6个基因型，KM／EV20／2010分离株属于Ⅳ基因型。
- 潘玥邵聪文王晓辉朱艳菊陈俊英陈伟马绍辉刘建生
- 关键词：埃可病毒全基因组
- 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)的研制
- 褚嘉祐姜述德瘳国阳孙明波李卫东谢忠平张丽旌俞泳霆杨卉娟陈俊英张新文
- 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV）的研制项目已获得临床批件，估计2009年可进行生产和销售。目前，全国每年OPV疫苗的需求约1.2亿剂量。随着全球消灭脊灰的进展，IPV将逐步取代OPV，估计2009年后每年需求为6000...
- 关键词：
- 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗
- Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法
- 本发明提供一种Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，通过Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒的接种培养，再构建Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒标准品质粒，参照所得Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒前膜蛋白区目的基因序列设计下列Ⅱ型、Ⅲ型登革病毒荧光定量PCR...
- 孙强明黄新伟席珏敏赵玉娇潘玥陈俊英王晓丹李多邱丽娟姜黎明
- 文献传递
- 登革病毒四型联合重组包膜蛋白Ⅲ区的表达和免疫原性鉴定被引量：1
- 2016年
- 登革热在全球范围内广泛流行,但是目前为止却仍然没有疫苗上市,疫苗的开发迫在眉睫。抗体依赖增强感染效应是登革病毒疫苗开发中遇到的一个瓶颈问题。研究表明登革病毒的包膜蛋白Ⅲ区能够介导中和抗体产生,且诱导产生较少的交叉抗体或无交叉抗体,能够大大减弱抗体依赖增强感染效应,因而是登革热重组蛋白疫苗的首选靶标。通过酵母密码子优化后合成同时包含4种血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区的四价联合DV EDⅢ蛋白序列,随后构建酵母表达质粒,并获得酵母表达菌株,经诱导后四联DV EDⅢ蛋白获得高效表达。通过Western blot、ELISA检测及蛋白质免疫原性鉴定,结果表明登革病毒四联DV EDⅢ蛋白表达质粒构建成功,重组蛋白在毕赤酵母获得高效表达,免疫小鼠后能够介导产生较高水平的血清效价。这表明已获得了能引起有效免疫反应的四型登革病毒EDⅢ蛋白,为登革病毒疫苗的研究提供了良好的基础。
- 邱丽娟赵玉娇李多黄新伟王晓丹席珏敏潘玥陈俊英孙强明
- 关键词：登革病毒疫苗重组蛋白
