吴文芳
- 作品数：73 被引量：205H指数：8
- 供职机构：中国科学院沈阳应用生态研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院重点实验室基金沈阳市科技局资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- SEA突变基因及其与ScFv基因的融合蛋白的应用
- 2005年
- 该发明专利涉及SEA突变基因及其与ScFv基因融合蛋白的应用，属于制药技术领域。
- 吴文芳孙静时成波吕安国
- 关键词：SEA突变基因融合蛋白制药技术
- IL2与抗GD2单链抗体融合蛋白及编码基因和应用
- 本发明涉及生物制药，具体的说是一种新型的IL2－抗GD2单链抗体融合基因在大肠杆菌中的表达和应用；选择经过突变改变其稀有密码子的IL－2，与黑色素瘤单链抗体连接，形成有抗肿瘤作用的融合蛋白具有序列表SEQ ID No：4...
- 吴文芳倪剑锋杨立泉吕安国
- 文献传递
- 长白蝮蛇类凝血酶基因的克隆及分析(英文)被引量：2
- 2001年
- 从长白蝮蛇 ( Agkistrodon halys Ussurin)毒腺中抽提总 RNA,采用 RT-PCR扩增其类凝血酶基因 ,经全序列测定 ,获得 2个类凝血酶基因 ,ussurin和 ussurase,它们全长分别为 70 8和 699个核苷酸 ,即分别编码 2 36和2 33个氨基酸 ;根据同源性 ,推测它们的活性中心分别为His43 ,Asp88和 Ser1 82 与 His40 ,Asp85和 Ser1 79;二硫键分别为 Cys7-Cys1 4 1 ,Cys2 8-Cys44 ,Cys76 -Cys2 3 4,Cys1 2 0 -Cys1 88,Cys1 52 -Cys1 6 7和 Cys1 78-Cys2 0 3 ;与 Cys7-Cys1 3 8,Cys2 5-Cys41 ,Cys73 -Cys2 3 1 ,Cys1 1 7-Cys1 85,Cys1 4 9-Cys1 6 4 和 Cys1 75-Cys2 0 0 。该蛇毒类凝血酶 c
- 杜道林邓晓东吴文芳吕国安徐梅
- 关键词：类凝血酶基因基因克隆
- IL-2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :IL - 2与金黄色葡萄球菌肠毒素A和B融合基因的克隆及表达。方法 :分别在金黄色葡萄球菌肠毒素A2 2 7Ala、B基因的两端克隆上两个酶切位点HindⅢ ,KpnⅠ。将IL - 2基因突变 ,设计一段linker使之分别与SEA2 2 7Ala和SEB相连并克隆到PET表达载体中 ,在大肠杆菌DH5α(DE3) -Pass中表达。结果 :表达的蛋白占总蛋白 15 %。结论 :IL -
- 杨立泉吴文芳时成波吕安国冯家勋柏学亮
- 关键词：融合蛋白IL-2
- 金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆
- 随着抗肿瘤药物研究的进展,肠毒素逐渐成为人们注意的焦点.利用PCR方法从金葡菌基因组DNA中扩增出约720bp的DNA片段,将之克隆到pGEM-7Zf载体上并转化E.coli DH5α菌株.重组质粒的洌序结果表明,我们克...
- 杨立泉吴文芳时成波吕安国
- 关键词：大肠杆菌金黄色葡萄球菌基因克隆抗肿瘤药物核苷酸序列
- 文献传递
- 一种改进的重叠延伸PCR方法及其所获得的突变基因
- 本发明涉及基因定点突变的方法，具体的说是一种改进的重叠延伸PCR方法及其所获得的突变基因，本方法分为如下步骤：片段合成；双混合；预延伸；全长DNA合成；后延伸。以来自于酿酒酵母(Saccharomycescerevisi...
- 吴文芳安迎锋吕安国
- 文献传递
- 杀伤血管内皮生长因子受体1阳性细胞的靶向毒素被引量：4
- 2005年
- 白喉毒素(diphtheria toxin DT) 是棒状白喉杆菌被茁噬菌体感染后分泌的一种外毒素. 它可以阻断真核细胞的蛋白质合成,杀死细胞. 血管内皮生长因子(VEGF) 的R82A,K84A,H86A突变体可以和肿瘤血管上高表达的VEGF受体1 (VEGFR-1) 特异性结合. 首先从白喉杆菌中提取基因组DNA,扩增出白喉毒素C区、T区基因. 并运用点突变技术,制成VEGF的R82A,K84A,H86A突变体. 利用这个可以和肿瘤血管上特异性受体相结合的VEGF的突变体,代替白喉毒素上的受体结合区,制成了针对VEGFR-1的靶向融合毒素——DT391-mVEGF. 以去除了受体结合区的DT391为阴性对照,细胞实验表明,融合毒素对VEGFR-1阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.
- 白向阳倪剑锋吕安国吴文芳牛瑞芳
- 关键词：白喉毒素融合蛋白
- 重组铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL的克隆、表达与活性检测被引量：6
- 2004年
- 目的对铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列进行改造,以获得相对分子质量小、活性强的重组毒素PE38KDEL。方法基于铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列的高GC含量,通过PCR反应和酶切技术,构建重组毒素PE38KDEL基因,并于大肠杆菌表达,用Westernblot分析表达产物。为检测其生物活性,将其与靶向分子IL4突变体cpIL4(13D)融合,构建融合蛋白表达载体,并于大肠杆菌表达,表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,用MTT法检测其对表达IL4受体的黑色素瘤细胞LiBr的细胞毒性。结果成功构建了PE38KDEL基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的21%左右;构建了融合蛋白cpIL4(13D)PE38KDEL,并于大肠杆菌AD494(DE3)中得到高效表达,纯化后融合蛋白的纯度达95%以上,细胞毒实验证明其对黑色素瘤细胞LiBr具有良好的杀伤作用,这说明改造后的PE38KDEL是具有细胞毒效应的。结论重组毒素PE38KDEL的构建,为各种导向药物的构建奠定了基础。
- 崔京霞纪剑飞倪剑锋吴文芳
- 关键词：PE38外毒素A重组毒素GC含量
- 抗HER2/neu单链抗体增强TNF-α对卵巢癌细胞的抗肿瘤活性
- 2006年
- 为了探索抗HER2/neu单链抗体与TNF-α联合应用对表面过度表达HER2/neu卵巢癌细胞的生物效应,同时构建了抗HER2/neu单链抗体scFvC6.5的原核表达载体和人TNF-α的原核表达载体,将上述两种重组子分别转化入感受态宿主菌BL21(DE3),得到稳定表达.表达产物主要以包含体形式存在;包含体经过溶解、变性、复性和纯化,得到了分纯的产物.SDS-PAGE和Western-blot检测结果证实,蛋白表达正确.ELISA法验证了scFvC6.5和人TNF-α具有与卵巢癌细胞SKOV-3的结合活性.MTT细胞毒活性试验进一步表明,相对于单独使用TNF-α,联合应用上述两个重组蛋白细胞毒效应明显提高,SKOV-3细胞对TNF-α的敏感性增强.这将为抗HER2/neu抗体的联合抗肿瘤疗法提供一种新的途径,具有潜在的临床应用价值.
- 蒋琳纪剑飞阎锡蕴吕安国吴文芳
- 关键词：肿瘤坏死因子基因表达
- 攻击VEGFR1阳性细胞的杂合毒素及其编码基因
- 本发明涉及基因重组技术，具体地说是两种血管内皮生长因子突变基因与白喉毒素C区T区的融合基因和其编码的杂合蛋白，其为VEGFR1阳性细胞的杂合毒素及其编码基因。融合基因mV8D具有序列表SEQ ID NO：1中的碱基序列；...
- 吕安国白向阳吴文芳
- 文献传递
