黄勇
- 作品数：14 被引量：60H指数：5
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金四川省教育厅自然科学科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 基于iTRAQ技术的牦牛体外成熟卵母细胞差异蛋白质组学研究
- 体外受精、胚胎移植及体细胞核移植等现代生物繁殖技术能够推动优良牦牛资源快速扩繁,而卵母细胞体外成熟培养是现代繁殖生物技术的基础及关键环节,且MⅡ期卵母细胞的质量直接影响了卵母细胞的受精及后续受精卵卵裂。因此,鉴定和研究牦...
- 黄勇
- 关键词：牦牛卵母细胞蛋白质组学
- 16S rRNA高通量测序技术筛选牦牛瘤胃细菌基因组DNA提取方法及菌群结构被引量：20
- 2017年
- 【目的】确定理想的牦牛瘤胃细菌基因组DNA提取方法及初步分析牦牛瘤胃细菌的群体结构。【方法】采用物理法(珠磨法、反复冻融法)、化学法(CTAB、SDS)及酶解法(溶菌酶、蛋白酶K)三者与瘤胃细菌特点相结合的方法,组合生成9种不同方法,即方法 1(CTAB+SDS+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 2(CTAB+SDS+Lysozyme+反复冻融法)、方法 3(CTAB+SDS+Lysozyme+珠磨法)、方法 4(CTAB+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 5(CTAB+Lysozyme+反复冻融法)、方法 6(CTAB+Lysozyme+珠磨法)、方法 7(SDS+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 8(SDS+Lysozyme+反复冻融法)、方法 9(SDS+Lysozyme+珠磨法),同时以QIA amp DNA Stool Mini Kit(方法 10)为对照,以这10种方法来提取瘤胃微生物基因组DNA,并通过DNA浓度、纯度、DNA电泳图等基本性质及16S r RNA高通量测序结果对其进行分析比较,同时通过测序结果初步分析牦牛瘤胃细菌群体结构。【结果】不同DNA提取方法效率比对结果显示,同样的化学及生物酶裂解条件下,结合珠磨法及反复冻融法能够显著地增强细胞裂解效率,提高DNA产量。其中方法 3及方法 6提取的DNA具有较高的浓度及纯度,方法 7—10缺乏CTAB阳离子去污剂,提取的DNA量显著低于其他方法(P<0.05),除方法 2和8所提取的样品经多次试验,PCR产物目的条带太弱或未检测到外,其余8种方法提取的样品PCR产物目的条带大小正确,浓度合适,符合高通量测序的要求。16S r RNA高通量测序共生成了191 349条原始数据,质控后得到有效序列171 231条。稀释性曲线分析表明,数据量合理并达到饱和,能够完整反映样品的菌群种类。OTU聚类数据统计、分类学和多样性指数分析显示方法 6和10包含的细菌较丰富。不同提取方法对革兰氏阳性菌提取效果比对结果表明方法 6裂解革兰氏阳性菌细胞壁的能力比其他方法相对较高。综上,方法 6(CTAB-Lysozyme-珠磨)�
- 杨琦玥黄勇陈亚冰刘洛川李键兰道亮
- 关键词：牦牛瘤胃微生物菌群结构
- 牦牛TLR2和TLR4基因mRNA在不同组织中的表达分布研究被引量：14
- 2014年
- 为检测牦牛TLR2和TLR4基因m RNA在不同组织中的表达分布,本研究根据Gen Bank中牛TLR2和TLR4序列设计特异性引物,以β-actin为参照基因,建立了检测牦牛天然免疫受体TLRs家族TLR2和TLR4基因的荧光定量PCR方法,并对TLR2和TLR4基因在牦牛各组织中的表达分布进行了研究。结果表明,TLR2和TLR4基因在牦牛所有组织中均有表达,其中TLR2基因在小肠表达量最高,在卵巢表达量最低,在肾、肺、肝、心、脾、乳腺、大肠、肌肉等组织依次有较高的表达;TLR4基因在乳腺表达量最高,在肌肉表达量最低,在脾、肝、小肠、肾、卵巢、肺、心、大肠等组织依次有较高水平的表达。该研究结果提示TLR2和TLR4基因可能在牦牛抗病免疫分子机制中发挥重要的作用,对研究高原动物免疫机制和应对牦牛及其他高原动物重大疫病具有重要意义。
- 林宝山兰道亮黄偲陈亚冰黄勇李键
- 关键词：牦牛荧光定量PCR
- 牦牛Toll样受体8和9基因克隆及组织表达分析被引量：2
- 2015年
- 为了解牦牛Toll样受体8(TLR8)和9(TLR9)蛋白的结构特征及其基因的组织表达规律,丰富牦牛TLRs基因研究的理论数据,应用RT-PCR方法克隆牦牛TLR8、TLR9基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术构建组织表达谱。结果显示,两个基因cDNA全长分别为3 102bp和3 090bp。牦牛TLR8和TLR9基因与野牦牛、黄牛和绵羊之间的同源性都很高,均在95%以上。牦牛TLR8和TLR9蛋白都具有胞外LRRs功能域、胞内区TIR结构域、低复杂度区;另外,TLR8还具有1个C端富集亮氨酸重复序列(LRRCT)和跨膜结构域。两个基因在10个组织中均有不同程度的表达,在肾脏中表达量最高,而在大肠中表达量最低。本研究成功克隆了牦牛TLR8和TLR9基因的完整编码区,并揭示了它们在各组织器官的表达规律,为进一步研究TLRs在牦牛体内的免疫机制奠定了基础。
- 黄勇兰道亮陈亚冰林宝山黄偲李键
- 关键词：牦牛TOLL样受体9克隆
- 牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2014年
- 根据GenBank中已公布牛Toll样受体5(toll-like receptors 5,TLR5)基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582bp,开放阅读框2577bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：牦牛克隆
- 麦洼牦牛TLR3基因编码区的克隆及生物信息学分析
- 2014年
- 利用分子克隆技术成功获得麦洼牦牛TLR3编码区基因序列,采用相关分析及预测软件对基因及其编码的蛋白质进行基本理化性质、二级结构及结构域等分析预测。结果表明该基因包含了1个2 715 bp的开放阅读框,编码904个氨基酸;所编码的蛋白质二级结构主要由α螺旋及无规则卷曲为主;TLR3基因进化树及基因同源性比对结果表明TLR3基因及其保守,牦牛TLR3基因与黄牛、绵羊和马等哺乳动物遗传距离很近。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：麦洼牦牛克隆生物信息学分析
- 猪NLRC5基因克隆及序列特征分析被引量：7
- 2016年
- 为了解猪天然免疫受体NLRC5基因特征,用人类、小鼠等物种NLRC5基因已知片段设计分段扩增的引物,同时运用RACE技术,克隆该序列并进行序列生物信息学分析.基因序列分析表明,克隆得到猪NLRC5基因c DNA全长为6638bp,基因开放阅读框为5538bp,共编码1846个氨基酸.蛋白质预测结果显示,NLRC5编码蛋白质整体表现为亲水性,蛋白质结构域分析结果显示,NLRC5具有典型的NACHT区及20个LRRs.同源性分析表明猪与牛、绵羊、猕猴、人等物种具有较高同源性,达到了80%左右,遗传进化树分析表明与牛和绵羊进化关系最近.进一步组织表达分析表明NLRC5基因除在淋巴结、脾脏等系统免疫器官中具有较高表达量,在肠淋巴结、胃、肺等黏膜器官中也有较高的转录水平.本研究结果说明猪NLRC5基因在长期进化中较为保守,尤其在哺乳动物间具有较高的保守性,在免疫反应中可能扮演着重要的角色.猪NLRC5基因序列的成功克隆为后续NLRC5在机体内免疫系统中的功能研究奠定了理论基础.
- 杨琦玥陈通李键黄勇兰道亮
- 关键词：基因克隆
- 麦洼牦牛TLR1基因组织表达分析被引量：6
- 2015年
- 【目的】建立一种牦牛TLR1基因表达量的荧光定量PCR检测方法,并分析TLR1基因在牦牛不同组织中的表达差异。【方法】参考牦牛TLR1基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以牦牛β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法;基于该荧光定量方法分析TLR1基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、乳腺、肌肉、卵巢11种组织中的表达水平。【结果】TLR1基因和β-actin基因扩增产物电泳结果呈现单一条带,其产物熔解曲线均为特异的单峰,表明引物具有较高的特异性。组织表达结果显示,TLR1基因在所检测的牦牛11个组织样本中均有表达,其中在肾、肝、脾、肺、卵巢、小肠中表达量较高,在胃、乳腺、心、大肠、肌肉组织中表达量较低。【结论】TLR1基因在牦牛各组织中转录水平差异较大,这可能与各组织对病原体的识别和抵抗能力有关。
- 陈亚冰兰道亮黄勇林宝山黄偲李键
- 关键词：麦洼牦牛荧光定量PCR组织表达谱
- 牦牛不同组织TLR3、TLR5 mRNA转录水平相对定量研究被引量：1
- 2014年
- 参考牦牛TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性引物,建立检测牦牛TLRs相对表达量的荧光定量PCR方法,分析TLR3及TLR5基因在牦牛不同器官组织中的转录水平。结果显示两基因具有不同的表达谱及表达量,其中TLR3基因除在乳腺组织外,在其它组织器官中均有转录,其中在心、大肠、胃和肌肉组织中表达量较高;TLR5基因则在心、肺、大肠、小肠、胃、肌肉、卵巢组织中具有较高的表达量。该试验结果表明,TLRs在不同组织器官转录水平差异较大,可能与其对病原体的识别有关;同一个基因在不同组织中存在差异性,这可能与基因作用机理相关。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：牦牛转录水平TLRS
- 牦牛TLR4基因的克隆测序及序列分析被引量：6
- 2014年
- 旨在了解牦牛天然免疫受体TLR4基因特点。根据GenBank已公布的牛TLR4基因序列,分3段设计引物,测序、拼接克隆序列,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析表明,克隆得到牦牛TLR4基因编码区全长2 807bp,开放阅读框2 526bp,编码氨基酸841个,N端含有27个氨基酸组成的信号肽,分子质量96.009 8ku,理论等电点为6.35。蛋白预测结果表明,TLR4编码蛋白整体表现为亲水性。同源性分析表明,10条序列当中牦牛与野牦牛、普通牛、绵羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近。说明TLR4基因序列具有较高的保守性。
- 林宝山兰道亮黄偲陈亚冰黄勇李键
- 关键词：牦牛克隆
