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表达PEDV-S1蛋白的重组枯草芽孢杆菌构建及鉴定被引量：1: 2018年; 猪流行性腹泻病毒(PEDV)可引起新生仔猪严重腹泻和死亡,给养猪业造成巨大经济损失。根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)调节动物胃肠道菌群平衡的功能和结构特征,选择其作为PEDV S1蛋白表达的宿主菌,构建重组基因工程枯草芽孢杆菌。实验将重组质粒p LA-PEDV-S1电转至枯草芽孢杆菌,提取枯草芽孢杆菌的重组质粒,采用PCR、Western blot和免疫荧光方法鉴定阳性质粒DNA。获得了重组pLA-PEDV-S1/B.Subtilis,S1蛋白成功展示表达在菌体表面,重组PEDV S1蛋白能够和猪源PEDV阳性血清结合,具有反应原性。该重组菌可能成为预防PEDV感染的口服疫苗候选菌株。; 刘伟刘卫贞窦速林侯喜林余丽芸; 关键词：枯草芽孢杆菌猪流行性腹泻病毒

重组干酪乳杆菌发酵生产工艺的研究被引量：1: 2015年; 将乳清浓缩蛋白80为培养基,对TGEV-BC重组干酪乳杆菌进行发酵生产,优化其生产工艺参数,制备有利于TGEV-BC重组干酪乳杆菌存活的液体制剂。将TGEV-BC重组干酪乳杆菌(p LA-TGEV-BC/L.casei)接种于MRS培养基,转种WPC培养基,收集菌液,通过对通过乳清蛋白浓度、发酵时间、培养方式和半连续培养等生产工艺参数的优化,利用平板计数法检测其对活菌数的影响;最终确定最佳的生产工艺参数为乳清蛋白培养基的浓度为4%、发酵时间16 h、转速80 r·min-1震荡培养、半连续培养。乳清蛋白是重组菌的良好发酵载体,优化的工艺可以保障活菌数达到109,减少生产成本。; 徐超高寒苏小明刘伟刘卫贞余丽芸; 关键词：乳清蛋白活菌数

Red重组介导大肠杆菌外膜蛋白A缺失突变菌株的构建及生物学特性初步研究被引量：1: 2017年; 目的利用Red同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白A(outer membrane protein-A,Omp A)基因缺失株,为后续研究奠定一定的基础。方法以已知大肠杆菌Omp A为靶点在其两端设计同源臂引物,以质粒p KD3为模板利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出氯霉素筛选标记序列,然后采用Red重组技术利用质粒p KD46诱导表达的重组酶通过电击的方法把外源构建打靶片段导入大肠杆菌,构建大肠杆菌Omp A基因缺失突变株。以菌落PCR方法检测基因大小,以蛋白质印迹法检测蛋白表达情况,以重组菌株培养过程的吸光度(A600)值来反映重组子的生长情况。结果成功构建了大肠杆菌Omp A基因缺失突变株,通过蛋白质印迹法检测和细菌生长曲线测定,发现Omp A基因成功完全丢失,突变株的生长曲线与野生型的差异不显著。结论Omp A基因缺失对大肠杆菌的生长无显著影响,为进一步研究疫苗活载体提供了一定基础。; 杨汐静陈晓婷于思淼刘伟; 关键词：外膜蛋白A 基因敲除

应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌被引量：1: 2015年; 目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。; 杨汐静张建新陈晓亭汤炜于思淼刘伟姚笛吴志军于立权朱战波崔玉东; 关键词：链球菌大肠埃希菌 RED同源重组

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刘伟