何友华
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
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- 甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡被引量：2
- 2016年
- 目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路(PTH/non PLC/PKC)是否会对成骨细胞(MC3T3-E1)的凋亡以及细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状态,随机分为5组:按100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-28);100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-34);100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+1μmol/L Go6983,1μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Caspase-Glo®3/7试剂盒(caspase-3)检测细胞的细胞数量与凋亡。结果 CCK-8检测结果显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异,48 h[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-28)组相比,可以明显提高细胞的数量(P<0.05)。进一步的研究发现在[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组添加抑制剂Go6983后,细胞数量增多的效应消失(P<0.05)。Caspase-3检测凋亡结果显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡(细胞凋亡受到抑制),但是差异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-28)组相比,前者可以明显抑制细胞凋亡(P<0.05),给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论 PTH的non PLC/PKC信号转导通路可能在长时间(48 h)作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。
- 胡少宇童国军孟越郝松李威许伏龙何友华陈建庭杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺激素凋亡信号转导通路
- 一种新的具有促骨合成作用的多肽设计和临床前研究
- 目的 合成具有非PLC/PKC单一信号激活作用的PTH模拟肽(MY-1肽),通过体外细胞培养和去势雌性小鼠体内研究,探讨该肽的促骨合成、促骨吸收功能以及抗骨质疏松作用。方法 检测MY-1肽的cAMP/PKA,PLC和PK...
- 杨德鸿童国军何友华孟越郝松胡少宇
- 关键词：骨质疏松临床前研究药物
- 磷脂酶C非依赖的PKC信号通路PTH模拟肽对去势小鼠腰椎骨骼的作用及其机制研究
- 目的 观察NonPLC/PKC通路 PTH模拟肽MY-1、MY-2对去势小鼠腰椎骨骼的影响，并初步研究其成骨作用机制.方法 80只8周龄C57BL/6雌性小鼠，体重(19.0±0.5)g分为假手术组(SHAW)、模型组(...
- 何友华李明翰童国军杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺素腰椎退变
- 连续应用特立帕肽对正常和去势小鼠骨代谢的影响被引量：2
- 2019年
- 目的探讨连续泵入特立帕肽(TPTD)对去势和正常小鼠骨代谢的影响,为研究TPTD及其相关肽破骨作用的动物模型选择提供实验依据。方法6周龄雌性C57BL小鼠24只,分别接受去势(OVX)或者假手术(SHAM),1周后用微量泵泵入TPTD或者等量的溶剂(VEH),分成SHAM-VEH,SHAM-TPTD,OVX-VEH,OVX-TPTD四组。2周后,获取胫骨组织经显微CT测量胫骨和皮质骨相关参数。并对胫骨组织行进行组织切片HE染色和TRAP染色,统计破骨细胞数目及生长板厚度。测量小鼠血清中的钙离子浓度。取部分颅骨原代成骨细胞加雌二醇(E2)和TPTD刺激培养48h后提取细胞总蛋白,分析β-catenin和RANKL蛋白的表达。结果OVX小鼠的骨小梁骨量较SHAM小鼠的骨量显著减少(P<0.05)。TPTD泵入显著减低SHAM小鼠松质骨骨量股骨中段皮质骨面积,与此相反,TPTD泵入增加OVX小鼠松质骨骨量,不改变皮质骨面积。TRAP染色结果发现,OVX较SHAM小鼠胫骨骨松质破骨细胞明显增多,SHAM-TPTD较SHAM小鼠增多(P<0.05)。细胞学蛋白分析结果显示,E2和TPTD持续刺激48h后,β-catenin表达量较TPTD单纯刺激降低,RANKL表达相对升高。结论TPTD的连续应用促进正常小鼠的骨吸收,但对去势小鼠不具有明显的促骨吸收作用,去势小鼠不适用于研究TPTD及相关肽的促破骨作用。
- 李明翰何友华童国军杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺素骨质疏松
- 破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析被引量：1
- 2018年
- 目的寻求合适的溶剂,溶解破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色产物,筛选溶液的最适检测波长,检测溶液吸光度值。比较该方法与TRAP活性检测试剂盒法相关性,并评价该快速半定量分析法的稳定性与可靠性。方法提取C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs),以1×10~4·mL^(-1)均匀种入胶原I包被处理24孔板,随机分为4组:10 nmoL/L PTH(1-34),100 nmoL/L PTH(1-34),1μmoL/L PTH(1-34),10μmoL/L PTH(1-34),给予甲状旁腺素[PTH(1-34)]刺激4 h后换成含10%胎牛血清完全培养基培养44 h,以4 h/44 h为1个周期,培养8 d后,进行常规破骨细胞TRAP染色,筛选合适的溶剂溶解,最终使用冰醋酸溶解TRAP原位染色产物,超声粉碎取上清,选取合适的波长检测吸光度(OD)值,此为冰醋酸溶解定量法。另一检测手段为目前常规使用的酶活性检测试剂盒法,试比较冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法两者的相关性。结果常规破骨细胞原位TRAP染色后,筛选出冰醋酸的溶解效果最优。溶解后测定波长在550 nm左右吸收峰理想,并排除溶剂冰醋酸本身的干扰。随着PTH(1-34)浓度增高,表现出破骨效应的增加,TRAP的活性增加,两者的OD值相应增加。冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法存在显著正相关,Pearson相关系数r=0.986(P<0.05)。结论采用冰醋酸溶解定量法,并用550 nm波长测定OD值,可实现破骨细胞TRAP染色后的快速半定量分析。
- 何友华童国军李明翰李威许伏龙杨德鸿
- 关键词：冰醋酸半定量分析破骨细胞甲状旁腺素
