吴煜
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 发酵罐培养重组乳酸乳球菌表达犬γ-干扰素条件研究
- 2015年
- 为探讨发酵罐培养重组乳酸乳球菌表达犬γ-干扰素最佳条件,研究测定重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565静置培养时生长曲线及p H,与添加不同浓度β甘油磷酸二钠的生长曲线及p H进行比较。结果表明,β-甘油磷酸二钠作为缓冲溶液,能使培养细菌p H保持稳定,促进重组菌生长。对重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565在发酵罐中的培养条件优化,并对不同p H条件下培养重组乳酸乳球菌OD600及重组p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565表达的蛋白量进行Western-blot检测。发酵结果显示,32℃培养,搅拌子转速为52r·min-1,6 h后以0.25 m L·min-1速率补充50%葡萄糖,明显提高菌群数量,p H在5.5和5.75时检测重组菌OD600值达到6.87和7.0。p H为5.5和5.75时培养诱导重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFN-γ/PSM565的蛋白表达量均比p H 6和p H 6.25时高,但与静止培养诱导结果相比,重组菌表达量增长不明显。研究可为工业化生产重组犬γ-干扰素提供技术支持。
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- 关键词：发酵罐乳酸乳球菌
- 重组犬γ干扰素的分泌表达及抗病毒活性鉴定被引量：2
- 2015年
- 为了研究犬γ干扰素在抗病毒方面的应用价值,依据乳酸菌密码子的偏好性和原核表达载体p AMJ399的特点,在不改变编码蛋白的基础上,将原有的犬γ干扰素序列重新优化,构建重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565,获得了分泌表达的犬γ干扰素蛋白,将培养p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565的培养上清液进行5倍浓缩后与MDCK细胞进行作用24 h后,接种VSV病毒,通过观察病变、MTT法检测活细胞数及荧光定量PCR检测方法,均证实该蛋白能够抑制VSV的复制,具有明显的抗病毒活性。为进一步研究犬γ干扰素在临床上的抗病毒应用和作为细胞因子佐剂的研究奠定了基础。
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- 关键词：分泌表达活性检测
