- 犬源贾第虫基因分型及Real-time PCR检测方法的建立
- 蓝氏贾第虫是一种重要的人兽共患寄生原虫，其分子特性较为复杂，至少包含7个(A～G)有效集聚体。基于传统的分类鉴定方法无法准确鉴定贾第虫种类及其基因型，分子生物学方法是揭示贾第虫病分子流行病学及其人兽互传机制的重要手段。本...
- 张萍
- 关键词：人畜共患实时荧光定量PCR
- 环介导等温扩增技术及其在动物疫病检测中的应用被引量：1
- 2012年
- 环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术,具有灵敏度高、特异性强及快速检测等优点,现已经广泛应用于动物疫病的快速检测。文章对LAMP的反应原理、技术特点及其近年来在动物疫病检测中的应用作一综述,旨在为该技术的深入研究和应用提供参考。
- 李结王培园张萍李金平蔺智宾李国清
- 关键词：环介导等温扩增动物疫病
- 用于检测蓝氏贾第虫人畜共患基因型的HRM引物及其应用
- 本发明公开了一种用于检测蓝氏贾第虫人畜共患基因型的HRM引物及其应用。HRM引物的核苷酸序列为：TPI1：5'-CTTCATCGGYGGTAACTT-3'，TPI3：5'-GGCACGCTTMGCCTTCTT-3'；TP...
- 李国清张萍李结刘远佳李雅文朱海波米多
- 犬源贾第虫EF1α基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 以广州某宠物医院临床犬源贾第虫为研究对象,根据GenBank TM中登录的贾第虫EF1α基因序列(AF069575),设计1对引物EF/ER,采用PCR方法从贾第虫基因组DNA中扩增出目的片段,纯化后克隆至pGEM-T Easy载体,重组质粒通过菌液PCR鉴定后,对其进行序列测定及分析,旨在对广州犬源贾第虫进行分子鉴定。结果显示,该犬源贾第虫EF1α序列长为288bp,与预期目的片段一致,该序列构建的分子进化树表明该犬源贾第虫分离株为蓝氏贾第虫D型。说明EF1α适合做分子标记,可准确地对贾第虫进行基因分型,为贾第虫分子分类学及分子遗传学研究奠定了基础。
- 李结王培园张萍刘远佳郭建超孟祥龙李国清
- 关键词：克隆PCR技术
- 猫源贾第虫16S rRNA与β-贾第素基因双位点的基因型鉴定被引量：2
- 2012年
- 为了对流浪猫粪便中分离的贾第虫滋养体进行基因型鉴定,提取虫体基因组DNA,以16SrRNA和β-贾第素基因为遗传标记,通过PCR扩增、克隆、测序、NCBI比对以及相关软件分析,建立系统进化树,确定了其基因型。结果显示,成功扩增出291bp的16SrRNA和511bp的β-贾第素基因片段,测定了2个基因片段的序列,并经NCBI比对以及DNAStar中MegAlign软件分析确定该株贾第虫为十二指肠贾第虫F型。本研究首次对我国猫源贾第虫进行了基因型鉴定,为猫源贾第虫分子生物学和分子流行病学研究奠定了基础。
- 刘远佳张萍李结郭建超孟祥龙LOUTOU H M李国清
- 关键词：基因型16SRRNA基因
- 两株犬源贾第虫tpi基因的基因型分析被引量：2
- 2011年
- 采用巢式PCR鉴定广东两株犬源贾第虫(GD1和GD2)的基因型。运用碘液染色对犬粪便中贾第虫进行鉴定,提取DNA后经巢式PCR扩增tpi基因,扩增产物测序后用BLAST和DNAStar软件进行同源性和系统发育分析。结果表明,通过tpi基因分析,GD1与L02120的同源性为100%,种系发育树上位于同一分支;GD2与DQ220289的同源性为99.1%,种系发育树上两者在同一分支。广东犬源贾第虫GD1为人畜共患的A1型,GD2为犬的D型。
- 张萍朱海波李结李金平刘远佳郭建超孟祥龙李国清
- 关键词：贾第虫巢式PCR
- 广东首株犬源贾第虫的基因型鉴定被引量：7
- 2011年
- 为了对广东首株犬源贾第虫进行分离鉴定,采用常规方法分离犬粪便中的贾第虫包囊,通过显微镜观察对其进行形态学鉴定,并以小亚基核糖体RNA(16SrRNA)基因和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因作为遗传标记,采用PCR方法对其进行了扩增、克隆、序列测定和分析。将扩增序列与GenBank中登录的参考序列进行比对,并用DNAStar软件建立系统进化树,以确定该贾第虫的基因型。结果显示,显微镜观察的结果与所报道的蓝氏贾第虫的形态一致;PCR扩增产物经10g/L琼脂糖凝胶电泳检测,出现299和432bp的片段,与预期结果一致;16SrRNA基因的序列分析结果显示该犬源贾第虫的基因型为A型,对gdh基因序列的进一步分析显示该基因型为A1亚型。结果表明本次分离的犬源贾第虫属于蓝氏贾第虫人兽共患的基因型。关键词:犬;蓝氏贾第虫;
- 朱海波李国清张萍李结李金平蔺智兵
- 关键词：蓝氏贾第虫基因型
- 犬源环孢子虫PCR检测方法的建立
- 2010年
- 为了建立犬源环孢子虫的PCR检测方法,根据该环孢子虫18SrDNA基因序列,设计1对特异性引物;通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行了特异性和敏感性试验;并对临床样品进行了检测。结果显示,该PCR检测方法能特异性地扩增出犬源环孢子虫18SrDNA中379bp的片段,与牛源环孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、人隐孢子虫、蓝氏贾第虫、刚第弓形虫、毛首线虫、大片吸虫、犬弓首蛔虫等8种虫体基因组DNA无交叉反应;最低能检测到84fg的阳性参照DNA,检测的157份临床样品中8份为阳性,比传统镜检方法多出3份。结果表明,建立的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬环孢子虫的临床检测。
- 岳彩玲李国清程家林高振永刘霞朱海波张萍
- 关键词：特异PCR
- 犬源贾第虫β-贾第素基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2011年
- 为了鉴定犬源贾第虫佛山分离株的基因型,根据GenBank中登录的贾第虫β-贾第素(bg)基因序列(X85958),设计2对引物GF1/GR、GF2/GR,采用套式PCR方法从贾第虫基因组DNA中扩增出目的片段;将扩增产物纯化并连接到质粒载体pMD18-T,克隆转入感受态细胞JM109,挑选阳性克隆测序,然后进行序列分析。结果显示,犬源贾第虫bg序列长为384 bp,与预期目的片段一致;分子进化树表明该犬源贾第虫分离株为蓝氏贾第虫D型。该基因型在我国为首次报道,为贾第虫的分子鉴定以及分子遗传学研究奠定了基础。
- 李结王培园张萍朱海波郭建超李国清
- 关键词：克隆
- 用于检测蓝氏贾第虫人畜共患基因型的HRM引物及其应用
- 本发明公开了一种用于检测蓝氏贾第虫人畜共患基因型的HRM引物及其应用。HRM引物的核苷酸序列为：TPI1：5'-CTTCATCGGYGGTAACTT-3'，TPI3：5'-GGCACGCTTMGCCTTCTT-3'；TP...
- 李国清张萍李结刘远佳李雅文朱海波米多
- 文献传递
