肖利佳
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因沉默孤儿核受体ERRα抑制前列腺癌细胞的体内转移被引量：2
- 2015年
- 目的:研究孤儿核受体ERRα对前列腺癌细胞E-cadherin(上皮细胞钙粘蛋白)的表达水平和体内转移能力的影响。方法:利用慢病毒介导的sh RNA构建稳定下调ERRα表达的DU145-sh ERRα和PC-3M-sh ERRα前列腺癌细胞模型,同时用ERRα特异性抑制剂XCT790抑制其活性,并利用Western Blotting(免疫印迹)检测上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平。将PC-3M-sh ERRα细胞和PC-3M-scramble对照细胞用荧光素酶标记后原位注射小鼠前列腺,8周以后通过体内成像系统检测原位瘤的形成及其体内转移情况。结果:基因沉默ERRα表达水平和用其特异性抑制剂XCT790处理DU145后,E-cadherin的表达水平明显降低。在PC-3M-sh ERRα细胞中,E-cadherin的表达水平明显低于对照组,同时由其构建的6只原位前列腺癌小鼠模型中没有发生转移,而由对照组细胞构建的7只原位前列腺癌小鼠模型中有4只发生了转移。结论:在前列腺癌细胞中下调ERRα的表达水平抑制其E-cadherin的表达和体内转移能力。
- 肖利佳郝建华李江李钢王娟邹畅
- 关键词：E-CADHERIN前列腺癌
- 磷酸化Tau-181蛋白在阿尔茨海默病患者临床诊断中的应用价值被引量：1
- 2016年
- 探讨血清中磷酸化Tau-181蛋白(p-tau-181)水平在AD患者和健康老年人血清中的变化规律及临床应用价值。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测77例AD患者和214例健康老年人血清中p-tau-181蛋白的含量,并分析其与AD的关系。结果:AD组与健康对照组不同性别间血清中p-tau-181蛋白水平均无统计学意义(P>0.05);健康对照A组、轻度AD、中度及以上AD血清中p-tau-181蛋白的水平依次升高,中度及以上AD组血清中p-tau-181蛋白的水平相对轻度AD组和健康对照A组有极显著差异(P<0.01),轻度AD组血清中p-tau-181蛋白相对健康对照A组有显著差异(P<0.05);以健康老年组血清中p-tau-181蛋白的含量建立参考区间,p-tau-181蛋白检测对AD诊断的特异性为89.7%,敏感性为67.5%。结论:血清中p-tau-181蛋白的浓度异常情况与阿尔茨海默病的严重程度相关并且具有重要的临床意义。
- 郝建华肖利佳靳亮王田园陈莹莹张然蓉
- 关键词：阿尔茨海默病神经纤维缠结TAU蛋白
- 起始Met对增强型绿色荧光蛋白功能的影响
- 2010年
- 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中起始Met为例,初步探索组成EGFP的不同氨基酸对EGFP发光功能的影响,为绿色荧光蛋白的变体改造提供理论基础。方法运用分子生物学技术去掉质粒pEGFP-N1中编码EGFP的起始氨基酸Met的密码子,将beta-actin的上游的435bp序列引入突变型EGFP阅读框的上游,将此融合型质粒转染A549细胞后,运用一系列检测方法检测融合蛋白的表达水平及转染细胞的的发光强度。结果突变掉起始Met后,EGFP丧失了发光功能。结论起始Met对保持EGFP的发光功能有重要作用,提示Met作为绝大多数蛋白质的生物合成起始氨基酸,可能是维持某些蛋白质的正确的空间结构所必须的氨基酸。
- 肖利佳王丹李昌龙翟芬
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白
- 人源核受体hLRH-1的表达纯化及多克隆抗体制备
- 2015年
- 目的:制备抗人源核受体h LRH-1的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础。方法:构建含有h LRH-1基因全长克隆的原核表达载体p ET507a-h LRH-1并用IPTG诱导其在Rosseta2菌株中表达重组蛋白His-h LRH-1,经亲和层析纯化后按常规方法免疫新西兰兔制备多克隆抗体,并用Western Blot对其特异性进行鉴定。结果:原核表达载体p ET507a-h LRH-1经测序证实构建成功,将其转化大肠杆菌Rosseta2菌株后成功诱导表达重组蛋白His-h LRH-1,经纯化免疫新西兰兔后得到抗h LRH-1多克隆抗体,Western blot证实抗体具有高度特异性。结论:成功表达His-h LRH-1重组蛋白并制备出多克隆抗体,为进一步用于h LRH-1的免疫学检测及其功能研究奠定了基础。
- 肖利佳张然蓉张竞文王田园郝建华
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体
- CRISPR/Cas9技术在HepG2基因组中进行定点基因突变的探索
- 2015年
- 目的探索利用CRISPR/Cas9技术在细胞株Hep G2基因组中进行定点突变。方法设计并构建靶向核受体LRH-1和ERRα基因组序列的g RNA质粒。将构建好的g RNA质粒和h Cas9质粒转染Hep G2细胞后,PCR扩增Hep G2基因组中LRH-1和ERRα基因的突变位点,并用SURVEYOR法检测突变情况。结果靶向核受体LRH-1和ERRα基因组序列的g RNA质粒构建成功。Hep G2细胞经g RNA-LRH-1/g RNA-ERRα和h Cas9转染后,针对LRH-1和ERRα的突变位点基因组序列的PCR产物经SURVEYOR法检测结果显示出现两条与预计大小相符的电泳条带。结论在Hep G2细胞中成功利用CRISPR/Cas9技术介导的基因组编辑对LRH-1和ERRα特定基因组序列产生突变,为构建其细胞株敲除模型奠定了基础。
- 肖利佳龙寿斌罗历沈化清郝建华
- 关键词：CRISPRHEPG2定点突变
- 转基因的完全沉默可能与逆转录病毒载体重组有关被引量：2
- 2011年
- 转基因沉默是转基因基础研究和临床基因治疗应用研究中的两大障碍之一,本文以转导单拷贝逆转录病毒载体MGPN2的HT1080细胞克隆为研究模型,利用一系列分子生物学技术探索转基因沉默的机制,为构建高效表达转基因的载体提供帮助。结果显示:在无GFP蛋白生成的115号细胞克隆中,载体的表观遗传修饰与其它克隆比没有明显变化,载体启动子能有效启动报告基因GFP的转录,但是转录本的大小和序列发生了显著改变,导致转录本阅读框改变。因此,除染色体位置效应引起转基因载体表观遗传修饰改变而导致转基因的沉默以外,逆转录病毒载体转录本阅读框的改变也可以引起转基因的完全沉默,这可能与载体自身重组有关。
- 王丹肖利佳马庆鑫翟芬任思冲李昌龙
- 关键词：逆转录病毒载体转基因基因沉默基因治疗
