翟芬
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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- 起始Met对增强型绿色荧光蛋白功能的影响
- 2010年
- 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中起始Met为例,初步探索组成EGFP的不同氨基酸对EGFP发光功能的影响,为绿色荧光蛋白的变体改造提供理论基础。方法运用分子生物学技术去掉质粒pEGFP-N1中编码EGFP的起始氨基酸Met的密码子,将beta-actin的上游的435bp序列引入突变型EGFP阅读框的上游,将此融合型质粒转染A549细胞后,运用一系列检测方法检测融合蛋白的表达水平及转染细胞的的发光强度。结果突变掉起始Met后,EGFP丧失了发光功能。结论起始Met对保持EGFP的发光功能有重要作用,提示Met作为绝大多数蛋白质的生物合成起始氨基酸,可能是维持某些蛋白质的正确的空间结构所必须的氨基酸。
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- 关键词：增强型绿色荧光蛋白
- 转基因的完全沉默可能与逆转录病毒载体重组有关被引量：2
- 2011年
- 转基因沉默是转基因基础研究和临床基因治疗应用研究中的两大障碍之一,本文以转导单拷贝逆转录病毒载体MGPN2的HT1080细胞克隆为研究模型,利用一系列分子生物学技术探索转基因沉默的机制,为构建高效表达转基因的载体提供帮助。结果显示:在无GFP蛋白生成的115号细胞克隆中,载体的表观遗传修饰与其它克隆比没有明显变化,载体启动子能有效启动报告基因GFP的转录,但是转录本的大小和序列发生了显著改变,导致转录本阅读框改变。因此,除染色体位置效应引起转基因载体表观遗传修饰改变而导致转基因的沉默以外,逆转录病毒载体转录本阅读框的改变也可以引起转基因的完全沉默,这可能与载体自身重组有关。
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- 关键词：逆转录病毒载体转基因基因沉默基因治疗
