林楚文
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- 沉默小窝蛋白1对棕榈酸作用下的胰岛β细胞存活的影响
- 2020年
- 目的探讨小窝蛋白1(Cav1)对棕榈酸作用下的胰岛β细胞存活的影响。方法通过慢病毒载体构建Cav1沉默的小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞株和小鼠原代胰岛(Cav1-shRNA组),以空载体病毒组作为对照组(Ctrl-shRNA),并设空白对照组,各组均分别加入脱脂牛血清白蛋白和棕榈酸(0.5 mmol/L)处理24 h及48 h,通过四甲基偶氮唑蓝比色法及Hoechst33342/碘化丙啶(PI)双染色法检测细胞活性及细胞凋亡,实时荧光定量PCR、Western blot检测凋亡相关的mRNA及蛋白表达水平。结果采用t检验和单因素方差分析法进行统计学分析。结果与对照组比较,棕榈酸处理组的细胞存活率显著下降(0.89±0.10比0.24±0.04,t=13.49,P<0.01),P18、P19的mRNA和蛋白表达均上调(1.00±0.09比1.30±0.04、1.00±0.04比1.37±0.13,t=5.28、4.71,均P<0.05;0.87±0.04比1.48±0.05、1.02±0.06比1.41±0.07,t=16.50、7.33,均P<0.01);含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-6、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平明显上调(1.00±0.04比1.57±0.08、1.01±0.15比1.57±0.20、1.02±0.19比1.57±0.09,t=11.04、3.88、4.53,均P<0.05),蛋白表达也明显上调(0.86±0.10比1.28±0.11、0.69±0.01比0.86±0.06、0.70±0.02比1.18±0.01,t=4.89、4.84、37.18,均P<0.01)。而Cav1-shRNA+棕榈酸组细胞存活率较Ctrl-shRNA+棕榈酸组显著上升(0.53±0.10比0.26±0.08,t=4.71,P<0.01),P19的mRNA和蛋白表达均下调(1.53±0.18比0.66±0.04、1.48±0.05比0.70±0.02,t=8.17、25.09,均P<0.01);Caspase-6、Caspase-7、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平下调(1.82±0.11比1.03±0.07、1.43±0.24比0.42±0.15、1.41±0.22比0.51±0.18、1.45±0.18比0.42±0.13,t=5.48~10.49,均P<0.01),蛋白表达也下调(0.99±0.14比0.63±0.11、0.90±0.14比0.62±0.04、0.90±0.02比0.60±0.04、1.30±0.01比0.65±0.04,t=3.50~27.31,均P<0.01)。结论Cav1沉默可以通过影响胰岛β细胞Caspase家族,促进其增殖、减少棕榈酸作用下的β细胞凋亡,保护脂毒性下胰岛β细胞活性。
- 刘坤莹曾文林硕林楚文彭航娅李海成曾龙驿
- 关键词：小窝蛋白1细胞增殖胰岛Β细胞
- Caveolin-1在甘精胰岛素改善2型糖尿病小鼠糖代谢及骨骼肌炎症中的作用被引量：4
- 2017年
- 目的:观察Caveolin-1下调的2型糖尿病小鼠接受甘精胰岛素治疗后糖代谢及骨骼肌炎症的改善情况。方法:C57BL/6J小鼠随机分为2组:对照组(NC组)和2型糖尿病模型组(T组)。T组采用高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素腹腔注射方法成模。T组根据胰岛素治疗及尾静脉接受病毒注射情况再分为4组:无干预组(T2DM组),接受胰岛素治疗组(insulin组),注射sh RNA沉默Caveolin-1表达并胰岛素治疗组(LV-sh RNACav1组),注射阴性病毒并胰岛素治疗组(LV-GFP),治疗组均皮下注射甘精胰岛素3周,记录小鼠随机血糖及胰岛素剂量,取小鼠骨骼肌用Western blot检测Caveolin-1及TNF-α的表达。结果:与insulin组及LV-GFP组小鼠相比,LV-sh RNACav1组小鼠控制血糖需要的甘精胰岛素量最大(P<0.05),骨骼肌中炎症因子TNF-α表达量最多(P<0.05)。结论:Caveolin-1与机体胰岛素敏感性相关,并可能参与了胰岛素对骨骼肌炎症的改善作用。
- 彭航娅李海成林硕曾文林楚文林可意曾龙驿
- 关键词：CAVEOLIN-1骨骼肌2型糖尿病TNF-Α甘精胰岛素
- 小凹蛋白1在棕榈酸酯诱导肝细胞脂质沉积中的作用被引量：1
- 2019年
- 目的探讨小凹蛋白1(CAV1)在棕榈酸酯(PA)诱导HepG2细胞脂质沉积中的作用及其机制。方法通过慢病毒载体构建过表达CAV1的HepG2细胞株,以空载体病毒转染组作为阴性对照组,每组细胞分别加入10%脱脂BSA和0.3mMPA处理24 h后,用油红染色观察各组细胞内脂质沉积,GPO-PAP酶法检测甘油三酯(TG)含量,qPCR检测PGC1α,sirt3的mRNA表达水平。结果 PA处理可以显著增加HepG2细胞内脂质沉积(P<0.01);与对照组相比,过表达CAV1可以显著减少细胞内脂质沉积(P<0.05),显著上调PGC1α,sirt3的mRNA表达水平(P<0.05)。结论 CAV1可能通过上调PGC1α-sirt3通路抑制PA诱导的HepG2细胞脂质沉积。
- 林楚文曾文林硕刘坤莹徐芬梁华曾龙驿
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病小凹蛋白1
- Caveolin-1在胰岛素激活2型糖尿病小鼠内脏脂肪PI3K/AKT通路中的作用
- 彭航娅李海成林硕曾文林楚文林可意曾龙驿
- 小鼠胰岛提取方法改良的实验研究
- 2020年
- 目的探讨小鼠胰岛提取方法的改良及效果。方法根据胰岛提取方法不同,将小鼠随机分为胆总管穿刺组和胆总管穿刺联合胰腺原位注射组(联合注射组),每组各100只。胰岛提取的改良方法采用胆总管穿刺联合胰腺原位注射法灌注胰腺,体视显微镜下挑选并纯化胰岛。鉴定胰岛的形态和纯化情况,统计两组的胰岛产量及胰岛提取成功率。分析胰岛在体外培养1周内的存活情况,并评估体外培养24 h和4 d后胰岛的胰岛素分泌功能。结果与胆总管穿刺组比较,联合注射组提取胰岛的产量显著增高(P<0.001)。两组胰岛提取成功率均为83%,差异无统计学意义(P>0.05)。胆总管穿刺联合胰腺原位注射法所提取的胰岛形态完好、纯度高、活性好。新鲜分离的胰岛体外培养24 h后胰岛存活率接近100%;体外培养1~5 d,胰岛细胞存活情况良好;体外培养6 d开始,胰岛出现中心性死亡。体外培养24 h和4 d后,给予高葡萄糖刺激胰岛后,小鼠胰岛功能均正常。结论胆总管穿刺联合胰腺原位注射法可以提高胰岛的产量,且获取的胰岛细胞活性和功能良好。
- 曾文刘坤莹林楚文林楚文彭航娅林硕曾龙驿
- 关键词：胰岛胰岛移植胰岛素胰高血糖素双硫腙
