毕克维
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：河北大学药学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省教育厅项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 负调控变态反应融合分子设计及其作用机制研究
- 刘中成毕克维张艳芬管立时海浪赵丽君解瑶
- 根据变态反应中肥大细胞和嗜碱粒细胞同时表达IgE高亲和力受体FcεRI和免疫负调节受体FcγRIIB的特点，利用噬菌体肽库展示技术筛选IgE结合肽与抑制性受体FcγRIIB结合肽，并通过构建融合分子的形式偶联FcεRI与...
- 关键词：
- 关键词：变态反应性疾病基因工程
- 大鼠sFcγRIIb基因原核表达及活性鉴定
- 2016年
- 旨在克隆大鼠FcγRIIb基因,构建s FcγRIIb原核表达体系,制备重组大鼠s FcγRIIb蛋白。采用RT-PCR技术从RBL-2H3细胞中克隆FcγRIIb胞外区基因,构建重组表达质粒转化大肠杆菌诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,复性后利用Western blotting、ELISA进行鉴定。结果显示,成功克隆大鼠s FcγRIIb基因,构建原核表达载体s FcγRIIb-p ET17b,转化大肠杆菌BL21(DE3)。通过对表达体系进行优化,确定IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为4 h时蛋白表达效率最高,重组蛋白主要以包涵体形式存在。包涵体经8 mol/L尿素溶解,利用Ni-NTA柱亲和层析获得了较高纯度的重组蛋白。采用梯度透析复性法对s FcγRIIb进行复性后,经Western blotting、ELISA与竞争性ELISA鉴定,重组蛋白s FcγRIIb可被特异性抗体所识别且与Ig G具有结合能力。成功建立了大鼠FcγRIIb基因原核表达体系,制备了具有生物学功能的重组蛋白。
- 张艳芬刘利鹏陈瑶崔哲毕克维王南南刘中成
- 关键词：抑制性受体原核表达重组蛋白
- sFcγRⅡb蛋白结合肽的筛选与鉴定
- 2019年
- FcγRⅡb是免疫球蛋白G受体(FcγR)中唯一的抑制型受体,在免疫反应的负性调节方面发挥重要作用.为了筛选sFcγRⅡb的蛋白结合肽,以重组sFcγRⅡb蛋白为靶分子,采用噬菌体肽库展示技术对sFcγRⅡb结合肽进行筛选.利用ELISA鉴定每轮洗脱噬菌体与sFcγRⅡb蛋白亲和力,经过4轮筛选,挑取40个噬菌体克隆进行序列测定,获得28种不同的12肽序列.经ELISA法鉴定噬菌体与sFcγRⅡb蛋白结合活性,得到sFcγRⅡb蛋白高特异性、高亲和力结合肽FHKMPWYMSMYY,为进一步研究FcγRⅡb的作用机制和探索结合肽的功能提供实验基础.
- 徐臻臻刘利鹏张艳芬崔哲崔哲刘中成
- 关键词：结合肽
