李龙
- 作品数：12 被引量：15H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广西科技基础条件平台建设项目广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 巴马小型猪TNF-α基因的克隆与相关生物学信息分析被引量：5
- 2016年
- 本研究旨在分析巴马小型猪TNF-α(tumor necrosis factor-alpha)基因的遗传变异情况。实验采用RT-PCR和克隆的方法成功扩增TNF-α基因的编码区序列,同时对TNF-α基因和相应的蛋白序列进行生物信息学分析。结果表明,巴马小型猪TNF-α基因编码区全长为699 bp,编码232个氨基酸;与Gen Bank中已发表的猪TNF-α基因(登录号:NM_214022.1)序列进行比对,未发现核苷酸碱基突变;编码的232个氨基酸分子量为25 253.9,理论等电点为5.44,不存在信号肽,但存在跨膜螺旋结构。经过序列相似性分析,巴马小型猪的TNF-α基因与猪、人、马、牛、家犬、绵羊同源性比较结果表明其具有较强的保守性。巴马小型猪的TNF-α基因与野猪的亲缘关系一致。
- 李龙司景磊吴延军夏利龙开旭郭亚芬兰干球
- 关键词：巴马小型猪TNF-Α基因基因克隆蛋白结构预测同源性
- 豚鼠ESR2基因新的可变剪接体克隆及序列分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】对豚鼠雌激素受体2(ESR2)基因进行克隆及序列分析,并预测分析其编码的蛋白序列,为提高豚鼠产仔性能及其育种打下基础。【方法】根据Gen Bank已公布的豚鼠ESR2基因序列(登录号XM_003472337)设计引物,以豚鼠卵巢组织总RNA为模板,RT-PCR扩增ESR2基因编码区序列(CDS),利用生物信息学分析其编码蛋白氨基酸的组成及理化性质、二级结构及与相关物种的同源性。【结果】克隆获得的豚鼠ESR2基因CDS长度为1650 bp,编码549个氨基酸,比参照序列(XM_003472337)少54个碱基,是ESR2基因新的可变剪接体,且第7外显子缺失;蛋白质二级结构预测结果表明,豚鼠ESR2成熟肽包含α螺旋、β折叠和无规卷曲3种二级结构元件,由于缺失18个氨基酸导致蛋白质结构发生变异;同源性分析结果显示,豚鼠与长尾龙猫、奥氏更格卢鼠、马、达马拉鼹鼠、裸鼢鼠、鼠狐猴、八齿鼠、猪和人的ESR2基因序列同源性分别为91%、87%、86%、91%、92%、86%、88%、92%和86%。【结论】克隆获得的豚鼠ESR2基因为新的可变剪接体,可作为研究豚鼠产仔性能及豚鼠育种重要的候选基因之一。
- 司景磊李龙陈秋明郭晓萍郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：产仔性能克隆
- 广西巴马小型猪Neuritin基因克隆与生物信息学分析及真核表达载体的构建被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在通过克隆广西巴马小型猪的Neuritin基因并进行生物信息学分析,为后续对Neuritin的研究奠定基础。实验成功获得Neuritin基因的编码区序列,并对Neuritin基因编码区序列和预测蛋白序列进行分析。结果表明,广西巴马小型猪的Neuritin基因编码142个氨基酸,其中含有2个磷酸化位点和2个跨膜信号结构以及1个结构保守域。通过双酶切技术成功获得重组质粒pEGFP-N1-Neuritin并转染到N2a细胞中,在24 h拍照发现N2a细胞发出荧光,证明Neuritin真核表达载体构建成功。
- 李龙司景磊夏攀洁何剑雄吴延军程晓芳吴敏徐文文兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪
- 广西巴马小型猪miR-122慢病毒表达载体的构建及胚胎水平表达
- 2016年
- 本实验的目的在于构建PLV-miR-122慢病毒载体并在293T细胞和猪胚胎细胞中进行验证。以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,克隆miR-122前体及部分侧翼序列,利用T4连接酶将其连入PLV-CMV-MCS-EF1载体,构建PLV-miR-122慢病毒载体。在293T细胞中过表达PLV-miR-122,通过胞质注射生产转PLV-miR-122的猪胚胎。双酶切和测序结果证明成功构建了PLV-miR-122重组载体,将重组载体转染293T细胞,经胞质注射后观察到其在猪胚胎早期和囊胚期均有绿色荧光表达。本实验成功构建了猪miR-122慢病毒表达载体,在293T细胞中过表达同时生产出转miR-122的阳性胚胎,为后续研究miR-122的功能奠定基础。
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- 关键词：广西巴马小型猪慢病毒表达载体
- 广西巴马小型猪ANK1基因启动子克隆及其活性分析被引量：1
- 2017年
- 【目的】克隆广西巴马小型猪ANK1基因启动子,确定其活性核心区,为研究ANK1基因启动子与肉质性状的相关性及构建动物疾病模型打下基础。【方法】通过在线软件对ANK1基因启动子的转录因子结合位点进行预测,根据转录因子结合位点设计特异引物扩增不同长度的ANK1基因启动子片段,并利用双荧光素酶试剂盒检测其荧光值,以确定不同ANK1基因启动子片段的活性。【结果】发现ANK1基因启动子存在1个转录起始位点(TSS)、2个Cp G岛和多个转录因子结合位点,并以此作为ANK1基因启动子的分段依据,将其分割为P638、P791、P1113、P1163、P1648、P1694、P1796和P2074等8个不同长度的目的片段。成功克隆获得的8个ANK1基因启动子片段经KpnⅠ和HindⅢ双酶切、T4真核表达载体连接、细胞转染等方法构建8个双荧光素酶重组报告基因,双荧光素酶试剂盒检测结果显示,广西巴马小型猪ANK1基因启动子在P1796片段活性最强,与其他片段存在显著差异(P<0.05)。【结论】成功克隆获得广西巴马小型猪ANK1基因启动子的8个片段,且利用双荧光素酶试剂盒检测确定其核心启动子区域出现在P1796片段。
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- 关键词：广西巴马小型猪启动子活性分析
- 猪ANK1新的可变剪接体功能预测、组织表达谱分析与真核表达载体构建
- 2017年
- 为进一步了解猪ANK1基因,本研究以广西巴马猪作为实验对象,分析ANK1基因结构与功能,并利用实时荧光定量PCR方法,分析ANK1基因在广西巴马小型猪11个不同组织(心脏,肝脏,脾脏,肺脏,肾脏,大肠,小肠,胰腺,皮下脂,胃,背最长肌)中的表达水平。组织表达谱分析结果表明ANK1基因在11个组织中均有表达,mRNA表达量表现为:胰腺>心脏>背最长肌>胃>大肠>肝脏>肾脏>小肠>脾脏>肺脏>脂肪。ANK1基因编码的蛋白通过生物信息学分析表明,编码156个氨基酸,存在跨膜结构和跨膜信号肽,分子量为17 799.27,理论等电点6.31,α螺旋和无规则卷曲所占比例比较大。通过酶切技术成功获得p EGFP-ANK1重组质粒并转染到C2C12细胞中,于48 h拍照发现细胞发出荧光,说明ANK1基因真核表达载体构建成功。
- 李龙夏攀洁吴延军綦文晶朱思然张广杰龙开旭夏利兰干球
- 关键词：真核表达载体生物信息学表达谱
- 不同浓度牛磺酸对高糖诱导的猪PK15细胞凋亡的影响及作用机制的研究
- 本研究的目的是探索牛磺酸(Tau)在细胞凋亡过程中的抗凋亡作用机制,筛选最佳保护浓度。通过在高糖诱导猪PK15 细胞凋亡的基础上,添加不同浓度的Tau,培养48h 后收集细胞。
- 李龙吴延军司景磊陈秋明吴敏兰干球郭亚芬
- 关键词：牛磺酸细胞凋亡荧光定量PCR糖尿病
- 蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响
- 2016年
- 为了研究猪卵母细胞成熟过程中在成熟液中添加蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响,试验采用在成熟液中添加不同浓度的E-64进行体外培养44 h后统计成熟率,计算卵母细胞的成熟率,确定最佳浓度为10μmol/L。将10μmol/L组、未添加组的卵母细胞进行固定、染色,鉴定卵母细胞核成熟情况。结果表明:在猪卵母细胞成熟液中添加10μmol/L的E-64,成熟率和核成熟率显著高于未添加组,并能显著提高猪孤雌卵母细胞的分裂率和囊胚发育率。
- 司景磊张笠黄玥萌程晓芳李龙龙开旭夏利郭亚芬蒋钦杨
- 关键词：卵母细胞体外成熟蛋白酶抑制剂
- 猪ANK1基因单核苷酸多态性与启动子区域活性分析
- 2017年
- 本实验旨在通过构建猪ANK1基因启动子序列的双荧光素酶报告基因系统,分析ANK1基因启动子活性,寻找ANK1基因启动子的核心区域,为下一步研究猪ANK1基因启动子序列SNP与活性之间的关系提供依据。利用Methprimer和Ali Baba2.1软件预测分析ANK1基因启动子区序列,预测其转录结合位点和Cp G岛。利用直接测序法,对广西巴马小型猪和长白猪共64个样品的ANK1基因启动子核心区域的单核苷酸多态性进行研究。双荧光素酶实验结果表明所预测的序列具有启动子活性,并寻找到启动子的核心区域;同时发现了16个SNP位点,它们分别是:-19、-133、-147、-187、-228、-246、-332、-360、-369、-468、-549、-550、-615、-696、-725和-798。
- 李龙夏攀洁綦文晶申玉建朱思燃张广杰何剑雄严雪瑜杨祝良方程邹辉兰干球
- 关键词：启动子活性分析SNP
- 广西巴马小型猪PAQR3基因克隆及表达谱分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆广西巴马小型猪孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)基因,并研究该基因在广西巴马小型猪不同组织中的表达特性,为揭示PAQR3的功能及其在疾病模型中的作用打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增广西巴马小型猪PAQR3基因,应用在线预测软件对其功能和结构进行生物信息学分析,并以q RT-PCR分析PAQR3基因在不同组织中的表达特性及高脂高糖诱导后的表达水平。【结果】广西巴马小型猪PAQR3基因编码区(CDS)序列全长936 bp,编码312个氨基酸,与人类(XM_006714106.2)、猕猴(NM_001257693.1)、牛(XM_010806259.1)、家犬(XM_014109889.1)、家鼠(XM_006534874.2)、羊(XM_012180242.1)、鸡(XM_001233720.3)PAQR3氨基酸序列的一致性在81%以上,其中与猕猴的亲缘关系最近,与牛的亲缘关系相对较远。PAQR3蛋白氨基酸序列包含保守的Hly IⅡ结构域,为亲水性蛋白,有7个跨膜螺旋结构;其二级结构主要是延伸链,占31.83%;该蛋白不存在信号肽,不属于分泌蛋白。q RT-PCR分析结果表明,PAQR3基因在广西巴马小型猪的不同组织中均有表达,以在肺脏中的表达量最高、脂肪中的表达量最低;经高脂高糖诱导后,PAQR3基因在广西巴马小型猪肝脏组织中的表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】PAQR3基因在广西巴马小型猪不同组织中广泛表达,在胆固醇和甘油三脂充裕的条件下,机体可通过下调PAQR3基因的表达量来平衡胆固醇含量。
- 司景磊黄玥萌李龙陈秋明严雪瑜吴延军张笠蒋钦杨兰干球郭亚芬
- 关键词：广西巴马小型猪克隆表达谱分析
