张海浩
- 作品数：12 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省科技计划项目云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一株Vero细胞适应的柯萨奇病毒A组10型毒株遗传稳定性研究被引量：2
- 2019年
- 目的探讨一株手足口病相关柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)毒株R6-19/XY/CHN/2017在Vero细胞中的适应性,及其连续传代的遗传稳定性。方法对R6-19/XY/CHN/2017毒株在Vero细胞上进行连续适应传代培养后,对适应前病毒及适应后的第1、5、10、15代次毒株的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、病毒感染性滴度、全基因组核苷酸序列及氨基酸序列等进行比较分析。结果该毒株能较好地在Vero细胞上适应,不同代次的感染性滴度在7.85 lgCCID50/ml^8.17 lgCCID50/ml。与适应前毒株比较,其5′UTR及编码区共有7个碱基发生改变,VP4和VP1编码区分别有1、3个氨基酸发生改变;而适应后病毒各代次在CPE、病毒感染力特点等无明显区别,且各代次全基因核酸序列中,只有第15代的VP1蛋白编码区发生一个碱基突变。结论 CV-A10株R6-19/XY/CHN/2017能在Vero细胞较好地适应,并具有良好的遗传稳定性,这将为后续CV-A10疫苗的研发和相关机制研究提供参考。
- 张捷刘红波丛山日张名张海浩孙浩杨昭庆马绍辉
- 关键词：连续传代
- 一株2013年云南省Ⅲ型疫苗相关脊髓灰质炎病毒全基因组分析被引量：3
- 2019年
- 目的分析一株疫苗相关脊髓灰质炎病毒(vaccine-related poliovirus,VRPV)云南分离株R1351/YN/CHN/2013的全基因组序列和遗传特性。方法采用RD细胞分离获得病毒,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增全基因组序列并测序。利用BioEdit 7.09、MEGA7.0、SimPlot3.5.1等软件对全基因序列进行分析。结果 R1351/YN/CHN/2013全基因序列由7 430个核苷酸构成,编码含2 206个氨基酸残基的多聚蛋白,5′UTR和3′UTR核苷酸长分别为742 nt和70 nt;与Sabin3疫苗株全基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.7%和99.6%;在5′UTR的减毒位点(nt472)发生回复突变,在VP3减毒位点(nt2034)未发生改变;与Sabin3疫苗株的VP1序列比对,共发生3个碱基突变,变异率为0.33%。进化分析显示73株Ⅲ型脊髓灰质炎病毒株分为A、B和C三个分支,R1351/YN/CHN/2013属于C分支,Sabin1/2疫苗株独立形成两个分支。重组分析表明R1351/YN/CHN/2013基因组各区域并未与Sabin1/2疫苗株及其他肠道病毒发生重组。结论 R1351/YN/CHN/2013为Ⅲ型VRPV,并且在减毒位点nt472处发生了回复突变。
- 刘红波张捷赵义林张海浩张名黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉
- 关键词：进化分析
- 手足口病混合感染中柯萨奇A组10型病毒的检测方法
- 本发明公开了一种手足口病感染或混合感染中柯萨奇A组10型病毒(CV‑A10)的检测方法，该方法通过提取病毒RNA，用肠道病毒通用引物224和222进行RT‑PCR扩增，然后用引物AN89和AN88进行巢式PCR扩增，若经...
- 马绍辉张捷杨昭庆刘红波赵义林张海浩黄小琴孙浩
- 文献传递
- 手足口病混合感染中肠道病毒71型的检测方法
- 本发明公开了一种手足口病混合感染中肠道病毒71型的检测方法，该方法通过提取病毒RNA，用肠道病毒A组通用引物EntAF和EntARo进行RT‑PCR扩增，然后用引物EntAF和EntARi进行半巢式PCR扩增，再根据肠道...
- 马绍辉杨昭庆赵义林黄小琴孙浩刘洪波张海浩
- 文献传递
- 一种CV-A6病毒毒种及其人用灭活疫苗
- 本发明公开一种CV‑A6病毒毒种及其人用灭活疫苗；毒种的分类命名为柯萨奇病毒A组6型，保藏编号为CGMCC No.16217，所制成的人用CV‑A6灭活疫苗的组成为：CV‑A6灭活纯化抗原100μg/ml，氢氧化铝1mg...
- 马绍辉刘红波张名张捷赵义林张海浩杨昭庆黄小琴
- 文献传递
- 一株柯萨奇病毒A9分离株的VP1基因遗传特征分析被引量：3
- 2016年
- 目的 分析引起病毒性脑炎（viral encephalitis,VE）的一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）A9分离株（CVA9）的VP1基因遗传特征。方法 采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采用Mega 6.1和Geneious 5.6.5等软件分析其序列,并构建系统进化树。结果 从5份VE患儿粪便中分离到一株人CVA9,命名为A108/YN/CHN/2009,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVA9一致,均为906 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%～98.2%和96.4%～99.3%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%～96.0%和92.7%～99.0%。在进化树上与其他中国分离株属同一分支中不同两个亚分支,与JB141230009亲缘关系较近。结论 A108/YN/CHN/2009分离株为肠道病毒CVA9血清型,与其他中国分离株同属一个基因簇。
- 王晓辉张海浩俞泽煦杨舜乔朱艳菊白巍邵聪文马绍辉
- 关键词：VP1基因
- 牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：1
- 2021年
- 目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。
- 牛步青胡术然高有张海浩陈蕾西常亚军易力姚宇峰任芳芳
- 关键词：聚合酶链反应细胞培养上清液
- 一种CV-A10病毒毒种及其人用灭活疫苗
- 本发明公开一种CV‑A10病毒毒种及其人用灭活疫苗；毒种的分类命名为柯萨奇病毒A组10型，保藏编号为CGMCC No.16218，所制成的人用CV‑A10灭活疫苗的组成为：CV‑A10灭活纯化抗原100μg/ml，氢氧化...
- 马绍辉张捷刘红波张名张海浩赵义林杨昭庆黄小琴孙浩
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- 不同肠道病毒血清型全基因组的扩增方法
- 本发明公开了一种不同肠道病毒血清型全基因组的扩增方法，该方法通过提取病毒RNA，利用肠道病毒通用引物222－224对病毒RNA的VP1区进行RT-PCR、测序、比对，通过分子生物学实验技术对病毒株进行血清型定型；并设计相...
- 马绍辉张婕刘建生张海浩
- 文献传递
- 手足口病混合感染中柯萨奇A组16型病毒的检测方法
- 本发明公开了一种手足口病混合感染中柯萨奇A组16型病毒的检测方法，该方法通过提取病毒RNA，用肠道病毒A组通用引物EntAF和 EntARo进行RT‑PCR扩增，然后用引物EntAF和EntARi进行半巢式PCR扩增，再...
- 马绍辉杨昭庆赵义林黄小琴孙浩刘洪波张海浩
- 文献传递
