刘浠
- 作品数：6 被引量：44H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响被引量：24
- 2017年
- 目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kapp B(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系。方法体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS(500μg/m L)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500μg/m L)刺激组。ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达。结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P<0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P<0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P<0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P<0.05)。结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达。
- 易威威温亚枫刘浠叶禾刘渤
- 关键词：脂多糖髓核细胞炎症
- 椎体次全切结合长节段内固定治疗Denis D、E型胸腰椎爆裂骨折被引量：6
- 2015年
- 目的 评价采用Ⅰ期后路椎体次全切、钛网支撑植骨结合长节段椎弓根螺钉内固定治疗Denis D、E型严重不稳定胸腰椎爆裂骨折的可行性及临床疗效.方法 回顾性分析14例采用后路椎体次全切、钛网支撑植骨结合长节段椎弓根螺钉内固定治疗的Denis D、E型胸腰椎爆裂骨折患者,统计手术时间、术中出血量,观察复位、植骨融合、术后并发症、腰痛、神经功能恢复、伤椎前缘高度比、后凸角矫正、丢失及椎管占位率.结果 14例平均手术时间为207.1 min（148 ～ 306 min）,平均失血量为585 ml（300～1 500 ml）,术中所有骨折均获得满意复位.所有患者随访18 ～54个月（平均28个月）.术后6个月时CT示植骨界面均达到骨性融合.随访期内无感染、钉棒断裂及内固定松动、移位,无钛网下沉和假关节形成等并发症,尚未发现邻近节段退变征象.末次随访时,Denis疼痛评分明显改善,12例疼痛完全缓解（P1）,2例轻微疼痛（P2）,不需要服用止痛药.所有患者神经功能均有1～3级改善.伤椎前缘高度比术前为（41.2±8.9）％,术后l周为（8.3±4.8）％,末次随访时为（8.9±5.1）％,平均丢失0.6％.矢状位后凸角术前为（36.9±4.9）°,术后1周为（8.1±3.4）°,末次随访时为（8.5±3.8）°,平均丢失0.9°.术前与术后比较、术前与末次随访比较差异均有统计学意义（P＜0.01）,末次随访与术后1周比较差异无统计学意义.而伤椎椎管占位率方面,术前为（74.9±11.3）％,术后1周为（4.1±1.6）％,末次随访时为（1.8±1.4）％,术前与术后椎管占位率比较,术前与末次随访比较以及末次随访与术后1周比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 对于Denis D、E型严重不稳定胸腰椎爆裂骨折,采用后路椎体次全切、钛网支撑植骨结合长节段椎弓根螺钉内固定,可Ⅰ期达到椎管减压、骨折复位、三柱重建和坚强融合,有效缓解患者腰痛,�
- 谭富强刘渤欧云生蒋电明刘浠欧东
- 关键词：胸椎腰椎
- 内毒素诱导退变人椎间盘髓核细胞凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kapp B(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系。方法体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下(100、200、500和1 000μg/m L)对髓核细胞增殖影响,并筛选合适的刺激浓度;设立空白对照组,单纯LPS(500μg/m L)刺激组,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500μg/m L)刺激组,以Hochest33258染色以及Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达。结果 CCK-8实验结果显示当LPS浓度为500μg/m L能明显降低细胞的活力。与空白对照组相比,单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升(P<0.05),P-P65表达明显增加,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也增高(P<0.05)。而与单纯LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降(P<0.05),P-P65表达明显降低,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也降低(P<0.05)。结论 NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关,值得进一步研究。
- 易威威刘浠温亚枫叶禾陈滔刘渤
- 关键词：核因子-ΚB脂多糖髓核细胞
- NF-κB抑制剂减低LPS致兔腰椎间盘髓核细胞锌指蛋白A20表达升高被引量：1
- 2017年
- 目的观察脂多糖(LPS)刺激退变兔椎间盘髓核细胞前后,锌指蛋白A20(A20)、NF-κB及相关炎性因子的表达及其相互关系。方法获取正常和退变兔腰椎间盘髓核细胞,分为正常组、退变组、LPS刺激组和NF-κB抑制剂组,HE染色观察椎间盘髓核及纤维环的形态,免疫组化检测椎间盘A20、NF-κB p65蛋白及Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)的表达。Real-time PCR分别检测各组A20、IL-1β、TNF-α、NF-κB和COL-ⅡmRNA的表达。Western blot观察A20、p65和COL-Ⅱ的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α的表达。结果退变组髓核细胞数量明显减少,髓核细胞聚集成团,COL-Ⅱ表达下降,A20和p65蛋白表达升高;与正常组相比,退变组A20、TNF-α、IL-1β和p65表达在mRNA及蛋白水平均明显升高,COL-Ⅱ表达降低(P<0.05);LPS刺激组中A20、TNF-α、IL-1β和p65表达较退变组更显著,COL-Ⅱ降低明显(P<0.05);NF-κB抑制剂组较LPS刺激组A20、TNF-α、IL-1β和p65表达回降,COL-Ⅱ表达回升(P<0.05)。结论髓核细胞炎性反应与兔椎间盘退变的发生和发展密切相关,其中A20可能发挥了重要作用。
- 温亚枫易威威刘浠叶禾刘渤
- 关键词：椎间盘退变锌指蛋白A20NF-ΚB
- 锌指蛋白A20及其相关炎症因子在椎间盘髓核细胞退变前后的表达变化被引量：11
- 2016年
- 目的检测椎间盘髓核细胞退变前后锌指蛋白A20及其相关炎症因子的表达变化。方法获取我院骨科患者术中切除的椎间盘组织,分为正常组和退变组,采用阿辛蓝染色观察人椎间盘髓核细胞的退变情况,免疫组化观察人椎间盘髓核细胞A20、TNF-α、IL-1β及NF-κB p65蛋白的表达。体外培养胚胎小鼠髓核细胞,分为对照组(只加入等量的PBS)、内毒素(LPS)刺激组和NF-κB抑制组,分别以Real-time PCR检测LPS刺激细胞和加入NF-κB抑制剂后,A20、TNF-α、IL-1β、I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMST-4)、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMST-5)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达变化;Western blot检测A20、TNF-α、IL-1β、ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、磷酸化p65(p-p65)的表达变化。结果退变组髓核细胞数量显著少于正常组,并有明显的聚集现象;退变组髓核细胞中A20、TNF-α、IL-1β、p65蛋白表达明显高于正常组;LPS刺激胚胎小鼠髓核细胞后,LPS刺激组A20、TNF-α、IL-1β、ADAMST-4、ADAMST-5、MMP-13mRNA与蛋白的表达均高于NF-κB抑制组与对照组(P<0.05),A20、TNF-α、IL-1β、ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、p-p65蛋白含量也较NF-κB抑制组与对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论髓核细胞炎症反应与椎间盘退变的发生、发展密切相关,A20可能通过NF-κB信号通路对抑制髓核细胞退变时炎症反应起到关键作用。
- 刘浠易威威温亚枫叶禾谭富强刘渤
- 关键词：椎间盘退变髓核细胞锌指蛋白A20炎症反应
- 骨形态发生蛋白-9对兔骨髓间充质干细胞诱导分化作用被引量：4
- 2015年
- 目的 分离、培养并鉴定新西兰兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）,观察BMSCs经腺病毒重组人骨形态发生蛋白-9（AdBMP-9）诱导后的成骨分化及其在明胶海绵上的生长.方法 采用全骨髓培养分离提取兔BMSCs,噻唑蓝（MTT）检测第2、3、4、5代细胞的增殖.流式细胞仪检测兔BMSCs表面抗原CD44和CD34.利用AdBMP-9转染第3代BMSCs,分别于诱导后7、14 d行碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红S染色和免疫荧光染色检测早期和晚期成骨标志物碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素（OC）的表达.同时在14 d行油红O染色观察其成脂分化能力,荧光显微镜下观察BMSCs与明胶海绵复合生长.结果 成功分离提取兔BMSCs,经传代,细胞由长梭形变为短梭形,第3代形态、大小趋于稳定.MTT检测发现第2、3、4、5代细胞均呈对数生长,生长曲线近似“S”型,第2代细胞生长最慢,第4代生长最快（P＜0.05）.流式细胞仪检测显示,CD44和CD34的阳性率分别为94.38％和2.63％.AdBMP-9诱导后,可检测到早期和晚期成骨标志物及脂滴的生成,转染后的BMSCs可较好地与明胶海绵复合生长.结论 采用全骨髓培养法可分离得到较纯的兔BMSCs,在AdBMP-9诱导下,其可向成骨、成脂分化,且能较好地与明胶海绵复合生长.
- 谭富强刘渤刘浠欧东易威威温亚枫
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨分化
