杜长智
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 供职机构：内蒙古民族大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 奶牛乳腺炎无乳链球菌菌体蛋白抗原研究进展被引量：7
- 2016年
- 奶牛乳腺炎是影响奶牛产奶的重要疾病之一,其病因复杂,但主要以无乳链球菌等致病菌感染所致.无乳链球菌不仅引起奶牛乳腺炎,同时也是重要的人畜共患性致病菌,因此具有重要的公共卫生意义.对于奶牛乳腺炎的防治技术研究一直未能够获得有效突破,常规疫苗经临床使用效果不佳,因此探索其新型有效抗原靶位抗原成为目前研究的"热点".根据国内外研究报道,无乳链球菌具有多种重要的菌体蛋白,表现出良好的抗原性,可作为研究新型疫苗的候选抗原蛋白.本文重点概述其5种菌体蛋白,即菌毛岛屿PI、表面免疫相关蛋白sip、磷酸甘油激酶Pgk、纤维蛋白原结合蛋白Fbs A/B、黏附蛋白Bi BA的研究进展,为相关研究人员提供具有价值的研究信息.
- 于辰龙锡林高娃吴金花杜长智白文丽布日额
- 关键词：牛乳腺炎无乳链球菌菌体蛋白抗原性
- 内蒙古东部区牛乳中金黄色葡萄球菌和无乳链球菌耐药性分析被引量：13
- 2015年
- 目的掌握内蒙古自治区东部区通辽市主要产奶地区的牛乳中致病性金黄色葡萄球菌和无乳链球菌流行情况及其对常用抗生素药物的敏感性,为奶牛乳房炎的治疗提供参考依据。方法从通辽市周边奶牛场采集患乳腺炎的奶牛乳样19份,进行细菌培养和分离鉴定,对分离出的金黄色葡萄球菌和无乳链球菌菌株进行药物敏感性试验。结果19份奶样中共分离出24株金黄色葡萄球菌和22株无乳链球菌。药敏试验显示,分离的24株金黄色葡萄球菌菌株对氯霉素、氨苄青霉素的耐药率分别为95.8%和54.2%,而对链霉素等大多数抗生素均表现高度敏感或中度敏感;分离的22株链球菌对链霉素等7种抗生素的耐药率在50.0%～95.5%之间。结论内蒙古通辽市周边地区牛乳中分离的金黄色葡萄球菌对氯霉素、氨苄青霉素表现较高耐药性,分离的无乳链球菌对链霉素等抗生素普遍耐药,可能与抗生素滥用有关。
- 锡林高娃吴金花孙立杰杜长智白文丽于辰龙布日额
- 关键词：牛乳腺炎金黄色葡萄球菌无乳链球菌耐药性分析
- 牛乳腺炎无乳链球菌PI-2A菌毛岛屿AP2亚基基因B细胞表位序列的克隆与原核表达产物的抗原性研究
- 奶牛乳房炎是奶牛的常见的高发病之一，因其病因多样复杂，难以防治，给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失同时因其病原菌为人畜共患致病菌，因而还危害到人类健康。利用疫苗来预防和控制奶牛乳房炎是一种安全、经济、有效的方法。本实验克隆...
- 杜长智
- 关键词：B细胞抗原性
- 科尔沁牛乳腺炎临床分离无乳链球菌菌毛岛屿PI-2A辅助蛋白2基因的克隆及序列分析
- 目的克隆内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2A辅助蛋白2(AP2)基因片段,并进行序列分析。方法根据Gen Bank中登录的牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2基因序列,使用生物信息学软件Pr...
- 锡林高娃杜长智吴金花于辰龙布日额
- 关键词：乳腺炎无乳链球菌
- 文献传递
- 牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2015年
- 目的克隆牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白AP2基因,并进行序列分析。方法根据GenBank公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段。结果扩增的AP2基因经克隆测序,长度为699bp,其序列与GenBank上公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因(EU930008)相似性为99.57%,编码233个氨基酸残基,有2个核苷酸出现突变,但是氨基酸序列没有发生改变,属于无意义突变。结论成功克隆出内蒙古东部地区牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础。
- 杜长智吴金花锡林高娃王华白文丽于辰龙布日额
- 科尔沁牛乳腺炎临床分离无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2015年
- 目的克隆内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a辅助蛋白2(ancillary protein 2,AP2)基因片段,并进行序列分析。方法根据Gen Bank中登录的牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer 5.0设计1对特异性引物,以内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段,与p MD18-T Vector连接,转化至感受态E.coli JM109中,提取质粒,进行PCR及单、双酶切鉴定;将质粒p MD18-T-AP2转化感受态E.coli JM109后,利用DNAStar分析测序结果,并对其推导的氨基酸序列进行抗原可及性分析,Prot Scale在线程序分析其疏(亲)水性。结果质粒p MD18-T-AP2经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;扩增的AP2基因序列长度为699 bp,编码233个氨基酸残基,与Gen Bank中登录的无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因核苷酸序列相似性达99%,有3个碱基出现变异(402:C→A;563:C→T;467:A→T),氨基酸序列有两处出现变异,分别为178氨基酸(V→A)和216氨基酸(E→V);该序列二级结构α螺旋分布C-末端较多,β折叠较丰富,分布较均匀,无规则卷曲分布在两端,亲水性指数相对较高,抗原性较好。结论成功克隆出内蒙古东部地区科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a AP2基因,为进一步研究AP2基因编码蛋白的抗原性奠定了基础。
- 锡林高娃杜长智吴金花于辰龙布日额
- 关键词：乳腺炎无乳链球菌
- 牛源无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立
- 2019年
- 目的构建牛源无乳链球菌AP2蛋白原核表达质粒,表达AP2蛋白,并以此为包被抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法。方法取pMD18-T-AP2和pET-30a(+)分别进双酶切,酶切片段连接后转染BL21(DE3)细胞,进行AP2的诱导表达及鉴定。以重组AP2为抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法,并用无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清进行检测。结果双酶切及PCR鉴定重组质粒构建正确。Western blot分析表明重组AP2蛋白具有反应原性,建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度为25μg/ml,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶70。抗体滴度检测显示重组AP2具有良好的免疫原性,3次免疫(56 d)的兔血清抗体滴度达1∶10 000。用该方法检测化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清,均未出现交叉阳性反应。结论成功表达了重组无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白,建立的间接ELISA方法稳定性高,特异性良好,可用于无乳链球菌感染检测。
- 锡林高娃韩甫鑫杜长智布日额
- 关键词：无乳链球菌原核表达间接ELISA
- 奶牛乳腺炎无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原区域的融合表达及抗原性鉴定被引量：9
- 2017年
- 为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar软件对蛋白的抗原表位序列进行分析并设计合成包括重叠PCR引物共4对引物,通过重叠PCR技术将前2个基因主要抗原区域进行拼接后插入pET30a(+)载体,再将第3个基因插入。为减少三重基因串联表达过程中3个蛋白之间空间构象的干扰,在3个基因连接处各引入1段45bp的柔性linker,结果重组基因在BL21感受态中实现了可溶性表达,表达的蛋白约62 000;Western blot试验表明多亚单位融合蛋白可被无乳链球菌多抗识别,且由此融合蛋白制备小鼠多抗能够识别sip、pgk及FbsA等3个蛋白;这表明构建的多亚单位融合蛋白可能具备sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保护性试验中,重组多亚单位融合抗原对攻毒小鼠的保护优于单个蛋白。本试验为牛无乳链球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的参考数据。
- 吴金花布日额王金良陈金龙锡林高娃孙立杰王华杜长智白文丽
- 关键词：无乳链球菌
- 科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因部分片段克隆及其抗原性预测被引量：3
- 2015年
- 【目的】克隆分析科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因片段,为深入研究奶牛乳腺炎无乳链球菌免疫机制及制备新型免疫抗原提供理论依据。【方法】根据Gen Bank已公布牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿的AP2基因序列,采用Primer 5.0软件设计1对特异性引物,以内蒙古通辽地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,扩增AP2基因片段,并分析其编码序列及免疫活性。【结果】科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因片段大小为699 bp,共编码233个氨基酸残基,其基因序列与Gen Bank已公布牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP2基因序列(EU930008)的相似性达99.6%,仅有3个碱基出现变异(402C→A、563C→T和467A→T)。菌毛岛屿辅助蛋白AP2二级结构的α螺旋在C端分布较多;β折叠较丰富,且分布均匀;而无规则卷曲分布在两端。菌毛岛屿辅助蛋白AP2的亲水区分布较广,几乎遍布于整个蛋白区,属于亲水性蛋白;其抗原指数较高的区段较丰富,抗原性良好;蛋白质分子表面可及性也较高,其区域占比达54.0%。【结论】科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿AP2基因具有高度保守性,其编码蛋白具有良好的抗原性,可作为阻止无乳链球菌感染的候选疫苗靶标抗原。
- 锡林高娃杜长智吴金花王华白文丽于辰龙布日额
- 关键词：科尔沁牛无乳链球菌抗原性
- 基于奶牛乳腺炎无乳链球菌rSip-PGK-FbsA融合蛋白的间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间接ELISA方法。该方法与化脓性链球菌阳性血清、大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、表皮葡萄球菌阳性血清均无交叉反应,特异性良好;阳性血清稀释至1颐12 800仍检测为阳性,具有较高的敏感性;批内和批间试验变异系数均小于10%,重复性好。利用该方法与以SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法对160份已知样品进行检测,结果显示,该方法的阳性符合率达到98.6%,高于SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法的阳性符合率。对389份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,其阳性检出率为46.53%。本研究建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种更加准确、可靠的血清学方法。
- 吴金花布日额王金良陈金龙锡林高娃孙立杰王华王学理刘燕杜长智朝洛蒙于辰龙白文丽
- 关键词：无乳链球菌
