李玉静
- 作品数：15 被引量：67H指数：4
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金江苏省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜蛋白CD81增强滋养细胞的黏附能力及机制研究
- 2023年
- 目的探讨CD81对滋养细胞黏附能力的影响及可能机制,以便阐明CD81参与子痫前期发病的具体机制。方法体外培养永生化的人孕早期绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,并感染高表达CD81的腺病毒(Ad-CD81)或转染抑制内源性CD81的干扰RNA(si-CD81)。采用细胞黏附实验检测HTR-8/SVneo细胞的黏附能力,采用免疫印迹法检测HTR-8/SVneo细胞中黏着斑激酶(FAK)的表达情况。结果与感染Ad-CTL的细胞相比,感染Ad-CD81的HTR-8/SVneo细胞黏附能力增强,570 nm处的光密度值显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与转染si-CTL的细胞相比,转染si-CD81的HTR-8/SVneo细胞黏附能力减弱,570 nm处的光密度值显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。随着Ad-CD81浓度的增加,感染Ad-CD81的HTR-8/SVneo细胞中FAK的蛋白表达较Ad-CTL感染细胞逐渐下降(P<0.05或P<0.01)。随着si-CD81浓度的增加,转染si-CD81的HTR-8/SVneo细胞中FAK的蛋白表达较si-CTL转染细胞逐渐增加(P<0.05或P<0.01)。结论膜蛋白CD81可增强滋养细胞的黏附能力,其分子机制可能与CD81抑制滋养细胞中FAK的蛋白表达有关。
- 沈莉李玉静丁锦红李强
- 关键词：子痫前期CD81滋养细胞黏着斑激酶
- 胎盘外泌体的生物学功能及分离纯化的研究进展被引量：5
- 2015年
- 妊娠时母体多个系统和器官的功能会发生改变,以适应胎儿及胎盘发育的需要,但这些改变的具体发生机制仍不明确.近年来研究显示,胎盘分泌的特异性外泌体（exosomes）在维持妊娠过程中发挥重要作用.胎盘外泌体是一种直径30～100 nm的膜性微小囊泡,可由多种细胞经过＂内吞-融合-外排＂等一系列加工过程分泌到细胞外环境.胎盘外泌体可以携带蛋白和RNA,在细胞间传递信息及运输物质,参与胎盘相关的妊娠生理和病理过程.故高效提取胎盘外泌体,研究其组成及生物学功能,尤其是在妊娠并发症中的改变,对于阐释妊娠并发症发生机制及寻找新的治疗方法具有重要临床意义.本文将对胎盘外泌体生物学功能及分离纯化方法进行综述。
- 李玉静刁振宇胡娅莉
- 关键词：分离纯化方法生物学功能胎盘发育外泌体妊娠并发症妊娠过程
- 缺氧通过微小RNA-155和cyclin D1抑制滋养细胞迁移被引量：3
- 2015年
- 目的探讨缺氧对人绒毛外滋养细胞微小RNA（microRNA，miRNA）-155表达的影响及其对滋养细胞迁移的影响。方法（1）采用100μmol／L氯化钴（cobaltchloride，CoCI2）诱导HTR-8／SVneo细胞缺氧，实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达，蛋白质印迹技术检测JunB和FosB蛋白的表达，划痕实验评估细胞迁移能力。（2）采用SP600125和PDTC分别抑制激活蛋白-1（activeprotein-1，AP-1）和／或核因子（nuclearfactor）-KB通路，实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达变化。（3）HTR-8／SVneo细胞瞬时转染pEGFP—miRNA—155、pEGFP—C1和pGL3-pro～cyclinD13-UTR，荧光素酶报告基因系统检测miRNA—155对cyclinD13＇非编码区的调控。（4）HTR-8／SVneo细胞瞬时转染pEGFP—miRNA-155和／或pFLAG—CMV—cyclinD1以过表达miRNA-155和／或cyclinD1，划痕实验评估细胞迁移能力的改变。采用两独立样本t检验，方差分析及LSD检验进行统计学分析。结果（1）100μmol／LCoCl2培养HTR-8／SVneo细胞24和48h，miRNA-155的相对表达量分别是0h的（1．40±0．28）倍（t=3．302，P=0．030）和（1．74±0．14）倍（t=8．578，P=0．001），随CoCl，（100μmol／L）作用于HTR-8／SVneo细胞的时间延长，JunB和FosB蛋白表达均升高。细胞迁移率在培养12、24和48h较0μmol／LCoC12时下降，尤以48h降低明显[（52．98±3．77）％与（64．68±3．92）％，t=5．259，P=0．000]。（2）抑制AP-1亚组、抑制NF—KB亚组及同时抑制AP—1和NF—KB亚组miRNA-155的相对表达量分别降低至无抑制情况下的（50．45±3．53）％、（47，18±2．14）％和（66．79±3．92）％（t值分别为3．630、4．100和3．392，P值均〈0．05）。（3）过表达miRNA-155亚组的cyclinD13’非编码区荧光素酶活性较无过表达时降低（t=46．682，P=0．000）。（4）过表达miRNA-155亚组的HTR-8／SVneo细胞迁移率较无过表达时明显降低[48h，（
- 薛平平李玉静戴毅敏邱智华沈莉刁振宇颜桂军胡娅莉
- 关键词：缺氧微RNAS细胞周期蛋白D1滋养层先兆子痫
- 血清中胎盘源性外泌体miR-155抑制血管内皮细胞中eNOS的表达
- 沈莉李玉静刁振宇郑明明戴毅敏李洁胡娅莉
- Toll样受体4介导的胎盘炎症激活在子痫前期发病中的作用研究
- 目的 正常妊娠的进行依赖于母胎界面可控的、适度激活的炎症免疫反应,Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)在这个过程中起着关键作用;而这种炎症免疫的调控失衡将会导致子痫前期(preeclam...
- 薛平平李玉静沈莉刁振宇颜桂军胡娅莉
- 血清中胎盘来源外泌体的分离与鉴定被引量：21
- 2015年
- 目的妊娠期间,胎盘可释放外泌体到母体循环,在正常妊娠或胎盘相关妊娠并发症中发挥重要作用。文中旨在建立简便、高效、低耗的母血清胎盘来源外泌体的分离纯化方法,为妊娠疾病研究奠定基础。方法蔗糖梯度离心联合2次8%PEG6000沉淀,分离纯化正常孕妇血清中胎盘来源外泌体,Western blot检测胎盘来源外泌体标记蛋白分子（CD63、CD81、PLAP）,银染法分析各密度层中所有蛋白质条带,透射电镜鉴定胎盘来源外泌体形态,动态光散射测定外泌体粒径及分布。结果通过蔗糖密度梯度离心后得到的各分层液经蛋白质SDS-PAGE胶电泳,银染后可见各蛋白分子条带清晰可见,Western blot结果显示CD63、CD81和PLAP同时表达于21%～34%蔗糖密度层,证明血清胎盘外泌体主要存在于1.09～1.16g/m L蔗糖密度层。透射电镜鉴定获得的胎盘来源外泌体形态符合一般外泌体特征,且特异表达PLAP。动态光散射测定获得的胎盘外泌体直径分布于28～91 nm,且大小均一。结论成功建立了一种简便、快捷、高效分离血清中胎盘来源外泌体的改良方法,为研究胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘相关并发症中的作用奠定实验基础。
- 李玉静刁振宇薛平平沈莉龚萍颜桂军胡娅莉
- 关键词：外泌体胎盘
- MiR-155靶向调节膜蛋白CD81抑制滋养细胞的迁移
- 沈莉刁振宇薛平平龚萍刘沫李玉静胡娅莉
- 关键词：MIR-155CD81滋养细胞迁移子痫前期
- 高表达miR-155外泌体抑制HTR-8/SVneo细胞增殖
- 目的:关于炎症在子痫前期发生中的重要作用已经得到了广泛认可.miR-155是一种炎症相关miRNA,它可以调控多种炎症相关的信号分子(如AP-1,NF-κB等),并且与子痫前期发生明显相关.miRNAs也存在于细胞外,但...
- 李玉静刁振宇薛平平沈莉龚萍刘沫胡娅莉
- PE血清胎盘来源外泌体抑制人绒毛外HTR-8/SVneo滋养细胞的增殖
- 目的 子痫前期(PE)是妊娠期特有疾病,子宫螺旋动脉重塑不全是其发病的重要因素.外泌体是稳定存在于细胞外的一种微型囊泡,可将miRNA等生物活性分子包裹在内,运送到靶细胞影响靶细胞生物学功能.本研究通过PEG6000沉淀...
- 李玉静刁振宇薛平平沈莉龚萍胡娅莉
- PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究被引量：13
- 2017年
- 目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制。方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照。采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达。结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.01)。与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高。结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移。提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用。
- 薛平平王慧艳樊文强刁振宇李玉静熊佳丽陈莉
- 关键词：PTEN子痫前期滋养细胞
