刘文华
- 作品数：31 被引量：91H指数：5
- 供职机构：肇庆学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金肇庆市科技创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 何首乌提取物对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用被引量：9
- 2016年
- 目的研究何首乌提取物对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为对照组、MPP+损伤模型组、何首乌提取物干预组。干预组在MPP+损伤的基础上,给予不同浓度何首乌提取物(终质量浓度5、25、100 mg/L)。MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色和白光下观察细胞形态变化,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;通过荧光强度观察活性氧(ROS)的含量和线粒体膜电位的变化。结果与对照组相比,模型组中细胞活性显著降低,Hoechst33258染色和白光下可见细胞胞体变小、核皱缩、碎裂有明显的颗粒状和固缩状荧光,并且细胞上清液中LDH泄漏明显增多、细胞中MDA含量和ROS显著升高而线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。与模型组比较,预先4 h给予不同浓度的何首乌提取物(5、25、100 mg/L)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性,降低细胞产生的LDH、MDA含量,并恢复线粒体膜高能电位,且对ROS有明显的抑制效果(P<0.01)。结论何首乌提取物对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其保护作用与其抗氧化应激作用有关。
- 杨旭赵海洲徐大德罗展远朱晶刘文华贝伟剑
- 关键词：何首乌提取物SH-SY5Y细胞
- 沼蛙的两性异形和雌性繁殖特征被引量：5
- 2016年
- [目的]研究沼蛙的两性异形状况。[方法]从肇庆地区采集67头沼蛙,测量其形态指标,统计雌性沼蛙的怀卵量,研究沼蛙的两性异形和雌性繁殖特征。[结果]雄性成体沼蛙的平均体长为(75.07±1.21)mm,雌性的平均体长为(78.67±1.23)mm。雌性沼蛙在体长和体重上与雄蛙存在显著差异,说明沼蛙体长和体重均存在显著的两性异形。两性异形程度指数为0.05。沼蛙的局部形态指标皆与体长呈正相关。雌蛙的平均怀卵量为4 916粒/只。雌性沼蛙的怀卵量与体长和体重皆呈正相关。[结论]肇庆地区沼蛙存在明显的两性异形。
- 叶志强刘文华姜玉霞徐大德
- 关键词：沼蛙两性异形繁殖特征怀卵量
- 斜纹夜蛾核多角体病毒Splt75基因的生物信息学分析
- 2020年
- 斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)ORF75(Splt75)是杆状病毒核心基因。通过PCR方法、克隆、测序技术和生物信息学分析工具对Splt75基因及其编码蛋白Splt75进行了研究。结果表明,PCR扩增序列大小为363 bp,与Genbank登录的SpltMNPV G2株基因组全序列(AF325155)中的ORF75基因全长序列同源性100%;Splt75基因编码120个氨基酸,编码蛋白分子量为13137.16 Da,蛋白理论等电点为7.86,是稳定的疏水蛋白,存在跨膜结构区,属于ORF78(Ac78)超家族成员;Splt75蛋白中可能含有1个cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、1个N-糖基化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个N-豆蔻酰化位点、1个蛋白激酶C磷酸化位点以及1个酰胺化位点;Splt75的二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主要构成元件。Splt75基因及其编码蛋白Splt75的生物信息学分析结果为进一步研究其功能和作用机制提供了理论依据。
- 李赛男吕怡娜甘田刘文华
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒生物信息学分析蛋白质结构
- 杆状病毒Ac78 C末端保守区域的功能初步分析被引量：1
- 2015年
- 杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）的orf78（即Ac78）是最近被发现的杆状病毒核心基因，在杆状病毒的生活周期中具有重要功能．氨基酸序列分析表明，Ac78的C末端105～108位氨基酸区域在GroupINPVs旁系同源物中高度保守．为研究该保守区域在Ac78功能中的作用，利用Bac—to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域，并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒（vAe78：del105．108）．荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明，在vAc78：del105．108转染的Sf9细胞中，感染性的芽生型病毒粒子（buddedvirion，BV）产生量与Ac78全长补回型重组病毒（vAc78：HA）基本一致；电镜观察发现，在vAc78：del105．108转染的细胞中，呈现与vAc78：HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征，多粒包埋型病毒粒子（multiple nucleocapsid—enveloped occlusion-derived virion，M—ODV）以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成；免疫荧光实验表明，在vAc78：del105．108感染的Sf9细胞中，从病毒感染细胞24h时开始，Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近，与vAc78：HA的现象一致．上述结果表明，Ac78的C末端105-108位氨基酸保守区域对于BV和M—ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需．
- 李赛男杨凯刘文华赵海洲
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒
- 基于TAIL-PCR分析外源基因在小鼠精原细胞中的整合位点
- 2022年
- 外源基因在哺乳动物细胞的整合位点会影响宿主细胞的生殖发育,在基因功能研究中常常会先确定其整合的染色体位置.为研究外源基因在小鼠精原细胞中的整合位点,以转入Cas9基因的小鼠精原细胞为研究材料,通过TAIL-PCR克隆Cas9整合到基因组的旁侧序列,结合T载体连接和碱基测序技术在有限的基因组中检测Cas9整合到小鼠基因组的具体位置.结果表明,转入外源基因的小鼠精原细胞折光性好,生长良好,PCR扩增发现Cas9基因成功转入到小鼠精原细胞的基因组上;结合上游特异性引物和简并引物可扩增出2条特异性条带,测序发现均为载体序列;结合下游特异性引物和简并引物可扩增出4条特异性条带,其中有2条扩增片段属于载体序列,2条扩增片段为小鼠基因组12号染色体中的序列.这表明外源基因整合到小鼠精原细胞12号染色体上.
- 冯美莹曾梓凡邝乃诵温淑桦刘文华王瑛华
- 关键词：整合位点TAIL-PCR小鼠外源基因
- 丁氟螨酯对SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制被引量：3
- 2017年
- 目的研究丁氟螨酯对人经神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制。方法加入丁氟螨酯0.03,0.06,0.125,0.25,0.5,1,2,2.6,4,6,8和16 mmol·L^(-1)处理SH-SY5Y细胞48 h,MTT法测定细胞存活;DCFH-DA荧光探针标记法检测细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1标记法检测细胞线粒体膜电位;Hoechst 33258染色观察细胞核形态;碘化丙啶(PI)染色和流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测磷酸化P38蛋白(p-P38)和磷酸化Jun激酶(p-JNK)表达水平。结果与溶剂(DMSO)对照组相比,共孵育48 h后,丁氟螨酯≥0.06 mmol·L^(-1)时可降低细胞存活率(P<0.05),且随浓度增高细胞存活率有降低趋势,IC_(50)为2.6 mmol·L^(-1);丁氟螨酯1,2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞ROS水平升高(P<0.01),线粒体膜电位下降(P<0.01)。Hoechst 33258染色结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组SH-SY5Y细胞出现颗粒状荧光,细胞核固缩和崩解;流式细胞仪检测结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞凋亡率由DMSO对照组的(0.7±0.1)%分别上升至(6.7±0.1)%,(72.4±8.6)%和(90.7±3.2)%(P<0.01);丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组G_1期细胞较DMSO对照组明显增加(P<0.01);Western蛋白印迹结果表明,丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组p-JNK表达均升高(P<0.01),丁氟螨酯6 mmol·L^(-1)组p-P38表达水平增加(P<0.01)。结论丁氟螨酯可能通过氧化损伤、激活P38蛋白和JNK蛋白诱导SH-SY5Y细胞G_1期阻滞和凋亡。
- 赵海洲陈永星李楠杨旭李赛男刘文华
- 关键词：SH-SY5Y细胞细胞凋亡活性氧应激反应
- 小茴香挥发油提取工艺优化及抗氧化研究被引量：15
- 2020年
- 以小茴香为试验对象,以水蒸气蒸馏法提取小茴香精油。采用正交试验法对工艺进行优化,以挥发油提取率为指标,对料液比、粉碎粒度、浸泡时间和蒸馏时间4个因素进行考察,并初步评价小茴香挥发油的体外抗氧化活性。结果表明:最佳提取工艺参数为料液比1∶25,粉碎粒度100目,浸泡时间1h,蒸馏时间6h,在此蒸馏条件下小茴香的出油率为3.64%。体外抗氧化活性试验结果表明:小茴香挥发油的总还原能力、羟自由基清除率和DDPH·清除率与浓度呈正相关,抗氧化活性效果良好。
- 马延红孙侨生段志芳刘文华
- 关键词：水蒸气蒸馏法抗氧化活性
- 西江肉桂挥发油提取工艺优化及抗氧化研究被引量：15
- 2019年
- 目的:优化肉桂挥发油的提取工艺,增加提取率,并对挥发油的体外抗氧化活性进行研究。方法:该实验以广东肇庆西江肉桂为试验对象,采用水蒸气蒸馏法提取肉桂精油。利用正交试验设计对提取工艺进行优化,以挥发油提取率为指标,对料液比、粉碎粒度、浸泡时间和蒸馏时间4个因素进行考察,并初步评价肉桂挥发油的体外抗氧化活性。结果:最佳提取工艺参数为料液比1∶12,粉碎粒度60目,浸泡时间1h,蒸馏时间6h,在此蒸馏条件下肉桂的出油率为4.37%。结论:体外抗氧化活性试验结果表明,肉桂精油的总还原能力、羟自由基清除率和DPPH清除率与浓度呈正相关,抗氧化活性效果良好。
- 马延红李赛男刘文华
- 关键词：肉桂挥发油水蒸气蒸馏法抗氧化活性
- 3种橙皮素酯类化合物的合成、鉴定与抗氧化性研究被引量：3
- 2018年
- 分别以食品添加剂苯甲酸、山梨酸和肉桂酸为原料,经过酰氯化与天然二氢黄酮化合物橙皮素反应得到3种橙皮素酯类衍生物,并鉴定了它们的结构。体外比较测定了它们在多个浓度下清除羟自由基(·OH)、2,2-二苯基-1-苦味酰基自由基(DPPH)和2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)自由基的活性,并研究了它们对亚油酸自氧化、脂质体过氧化的抑制作用及抗植物油氧化能力。实验结果表明,此3种橙皮素酯类衍生物在体外自由基测试模型中均具有清除活性,并且与浓度呈正相关性,橙皮素-7-苯甲酸酯(化合物2)和橙皮素-7-山梨酸酯(化合物3)对亚油酸自氧化、脂质体过氧化的抑制作用及抗植物油氧化能力均强于橙皮素,可作为食品抗氧化剂进一步研究。
- 段志芳马延红刘文华程碧露
- 关键词：橙皮素食品抗氧化剂
- 酸性水与碱性水中Mg^(2+)浓度对黑眶蟾蜍蝌蚪存活率的影响
- 2016年
- [目的]研究野外黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus)蝌蚪的生存状况。[方法]研究分别在碱性水(p H 7.5~8.0)以及酸性水(p H 5.5~6.0)2种模拟环境条件下,通过急性毒性试验方法以不同的浓度梯度Mg^(2+)对黑眶蟾蜍蝌蚪进行24和48 h的胁迫试验。[结果]在相同浓度梯度和相同观察时间下,黑眶蟾蜍蝌蚪在碱性水中的存活率低于酸性水;不同p H的水环境与Mg^(2+)的协同作用显著影响黑眶蟾蜍蝌蚪的48 h存活率(F7,32=3.373,P<0.05);黑眶蟾蜍蝌蚪在酸性水环境下适宜生存的Mg^(2+)浓度范围为1 418.41~1 590.54 mg/L,半致死浓度(LC_(50))为2 357.32 mg/L,安全浓度为521.51 mg/L;在碱性水环境下适宜生存的Mg^(2+)浓度范围为1 264.91~1 418.41 mg/L,LC_(50)为1 879.81 mg/L,安全浓度为533.99 mg/L。[结论]该研究可为今后黑眶蟾蜍的保护提供理论依据。
- 叶志强刘文华罗斯特徐大德赵健荣
- 关键词：黑眶蟾蜍蝌蚪存活率MG^2+急性毒性试验
