李赛男
- 作品数：32 被引量：44H指数：4
- 供职机构：肇庆学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 丁氟螨酯对SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制被引量：3
- 2017年
- 目的研究丁氟螨酯对人经神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制。方法加入丁氟螨酯0.03,0.06,0.125,0.25,0.5,1,2,2.6,4,6,8和16 mmol·L^(-1)处理SH-SY5Y细胞48 h,MTT法测定细胞存活;DCFH-DA荧光探针标记法检测细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1标记法检测细胞线粒体膜电位;Hoechst 33258染色观察细胞核形态;碘化丙啶(PI)染色和流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测磷酸化P38蛋白(p-P38)和磷酸化Jun激酶(p-JNK)表达水平。结果与溶剂(DMSO)对照组相比,共孵育48 h后,丁氟螨酯≥0.06 mmol·L^(-1)时可降低细胞存活率(P<0.05),且随浓度增高细胞存活率有降低趋势,IC_(50)为2.6 mmol·L^(-1);丁氟螨酯1,2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞ROS水平升高(P<0.01),线粒体膜电位下降(P<0.01)。Hoechst 33258染色结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组SH-SY5Y细胞出现颗粒状荧光,细胞核固缩和崩解;流式细胞仪检测结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞凋亡率由DMSO对照组的(0.7±0.1)%分别上升至(6.7±0.1)%,(72.4±8.6)%和(90.7±3.2)%(P<0.01);丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组G_1期细胞较DMSO对照组明显增加(P<0.01);Western蛋白印迹结果表明,丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组p-JNK表达均升高(P<0.01),丁氟螨酯6 mmol·L^(-1)组p-P38表达水平增加(P<0.01)。结论丁氟螨酯可能通过氧化损伤、激活P38蛋白和JNK蛋白诱导SH-SY5Y细胞G_1期阻滞和凋亡。
- 赵海洲陈永星李楠杨旭李赛男刘文华
- 关键词：SH-SY5Y细胞细胞凋亡活性氧应激反应
- 抗流感病毒特异性转移因子对试验小鼠的抗流感效果被引量：1
- 2012年
- [目的]探讨免疫增强剂抗流感特异性转移因子(STF)对试验性小鼠发热的预防效果。[方法]用蛋白胨致热法建立发热病理模型;以毛色及活泼度评价小鼠体征的变化;以体温(直肠温度)、免疫学指标(胸腺指数及脾指数)、血清学指标为依据。[结果]与对照组相比较,预防组体温稳定(P<0.01),毛色光泽,活泼度高,胸、脾指数明显高于对照组(P<0.01),血清检测中测出有抗流感抗体的产生。[结论]抗流感特异性转移因子对试验性发热小鼠有预防作用。
- 黄丽华江泽鸿李赛男李充璧
- 关键词：免疫增强剂发热
- 重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂及其制备方法
- 本发明涉及一种改良的生物杀虫剂及其制备工艺。本发明所述的重组甜菜夜蛾核多角体病毒制剂，包括以下组分，按重量比为：核多角体病毒混合悬液1-10；载体74-94.5；分散剂1-4；润湿剂1-4；光保护剂0.5-4；以及展着剂...
- 李充璧李广宏李赛男李芸瑛
- 利用CRISPR/Cas9双质粒系统构建Nissle 1917ΔcheZ基因缺失株
- 2023年
- 为研究趋化性基因cheZ对大肠杆菌益生菌Nissle1917的影响,研究以敲除大肠杆菌Nissle1917的cheZ基因为目的.首先,利用诺唯赞ClonExpress®MultiS一步克隆试剂盒构建pTargetTΔcheZ重组质粒,随后将pTargetTΔcheZ重组质粒电转入含pCas质粒的Nissle1917感受态中,以实现对大肠杆菌益生菌Nissle1917染色体中cheZ基因进行靶向敲除,经PCR鉴定和基因测序双重证实,Nissle1917基因组中的cheZ基因已敲除.最后,经IPTG诱导和高温培养,消除缺失株中的pTargetTΔcheZ和pCas2个质粒,最终获得趋化性基因cheZ缺失株Nissle1917ΔcheZ.本试验为验证cheZ基因在益生菌Nissle1917中的生物活性及其扮演的基因功能的后续相关研究打下了前期基础.
- 区炳明林鑫吕海慧葛桦朱惠敏黄丽华刘文华李赛男张敏瑜
- 关键词：基因缺失
- 杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备
- 2011年
- 目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMN-PV)ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下超量表达了SE29蛋白.采用割胶回收的方法纯化SE29蛋白,以纯化的SE29蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗SE29蛋白的抗体.结果:构建了Se29基因原核表达质粒,在大肠杆菌中实现了SE29蛋白的原核表达,获得了SE29蛋白的多克隆抗体,West-ern blot分析表明该抗体能与SeMNPV感染的细胞蛋白样品发生特异性反应.结论:SE29蛋白的多克隆抗体的获得为进一步研究SE29蛋白的功能奠定了基础.
- 李赛男李朝飞庞义杨凯
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆原核表达抗体
- 斜纹夜蛾核多角体病毒Splt75基因的生物信息学分析
- 2020年
- 斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)ORF75(Splt75)是杆状病毒核心基因。通过PCR方法、克隆、测序技术和生物信息学分析工具对Splt75基因及其编码蛋白Splt75进行了研究。结果表明,PCR扩增序列大小为363 bp,与Genbank登录的SpltMNPV G2株基因组全序列(AF325155)中的ORF75基因全长序列同源性100%;Splt75基因编码120个氨基酸,编码蛋白分子量为13137.16 Da,蛋白理论等电点为7.86,是稳定的疏水蛋白,存在跨膜结构区,属于ORF78(Ac78)超家族成员;Splt75蛋白中可能含有1个cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、1个N-糖基化位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个N-豆蔻酰化位点、1个蛋白激酶C磷酸化位点以及1个酰胺化位点;Splt75的二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主要构成元件。Splt75基因及其编码蛋白Splt75的生物信息学分析结果为进一步研究其功能和作用机制提供了理论依据。
- 李赛男吕怡娜甘田刘文华
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒生物信息学分析蛋白质结构
- 杆状病毒核心基因ac78的克隆、表达与活性研究被引量：1
- 2020年
- 杆状病毒核心基因ac78在杆状病毒的生活周期中具有重要作用。生物信息学分析发现,Ac78与斯氏假单胞菌的细胞色素C氧化酶cbb3-型亚基III具有一定的序列一致性,表明Ac78可能具有氧化酶活性,并在氧化还原反应中具有一定功能。用PCR的方法成功扩增得到ac78基因,该基因序列与GenBank上的苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV) ac78基因的核苷酸同源性100%,将其克隆至原核表达载体p QE30,构建了ac78基因原核表达质粒,转化大肠杆菌M15[pREP4],在1 mmol/L IPTG和低温诱导下超量表达了可溶性的目的蛋白。使用Ni-NTA Resin蛋白纯化树脂获得了较纯的含有6×His接头的Ac78蛋白,使用纯化细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定其细胞色素C氧化酶活性,结果为阴性,表明Ac78可能不具有细胞色素C氧化酶活性。上述研究结果为深入探究Ac78的作用机理打下了坚实的基础。
- 李赛男刘文华钟佩桥赵海洲杨永盼
- 关键词：杆状病毒克隆原核表达活性测定
- 昆虫抗菌肽的研究进展被引量：2
- 2006年
- 昆虫抗菌肽是昆虫免疫后存在于血淋巴中的一类肽类活性物质.具有相对分子质量小、热稳定性强、无免疫原性、抗菌谱广等特点.结合昆虫抗菌肽的研究现状和发展前景,对昆虫抗菌肽的分类、作用机理、基因工程等方面进行了综述.
- 李赛男
- 关键词：昆虫抗菌肽基因工程
- 甜菜夜蛾核多角体病毒Se62基因的克隆与结构分析
- 2011年
- [目的]克隆并分析甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopoledrovirus,SeMNPV)ORF62全长基因(Se62)。[方法]采用PCR的方法扩增Se62基因,将其克隆至pMD18-T载体上,获得了重组质粒T-Se62,进行序列测定和分析。[结果]获得大小为1 128 bp左右的序列,扩增序列与GenBank登录序列(No.NC_002169)核苷酸同源性100%。序列分析表明,Se62基因编码蛋白(SE62)存在明显的跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点。蛋白序列比对结果表明,SE62属于杆状病毒P48蛋白超级家族成员,与苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa califorica multicapsid nucleopoledrovirus,AcMNPV)P48蛋白的同源性为52%,其在病毒复制中的作用值得关注。[结论]成功克隆出Se62基因,为研究其在病毒复制中的功能奠定了基础。
- 李赛男李充璧
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆
- 重组和野生型甜菜夜蛾核多角体病毒对不同虫龄幼虫的毒力测定
- 甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeMNPV)对甜菜夜蛾幼虫具有很强的感染力,是一种可以利用的生物农药资源,利用不同浓度的重组甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)和野生型病毒,对甜菜夜蛾各龄幼虫不同实验种群进行饲毒,以研究不同龄...
- 李充璧李广宏张燕李赛男
