王栋
- 作品数：18 被引量：68H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：全军“十五”指令性课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 激发机体对鼠疫产生免疫力的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了可激发机体对鼠疫产生免疫力的融合蛋白及其编码基因与应用。其目的是提供一种可激发机体对鼠疫产生免疫力的融合蛋白及其编码基因与其在制备鼠疫疫苗中的应用。该融合蛋白是下述氨基酸残基序列之一：1)序列表中的SEQ I...
- 王栋邢丽王希良
- 文献传递
- 鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V安全性初步研究被引量：2
- 2006年
- 为了研究鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的安全性,试验运用SDS-PAGE电泳和琼脂糖电泳等方法检测了鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的纯度,并以小鼠为动物模型进行了质粒pVAX1／F1-V的急性毒性和长期毒性试验,用PCR方法检测外源基因在小鼠组织中的分布情况,用ELISA、EIISPOT方法检测了其自身的免疫反应。结果表明,提取的质粒pVAX1/F1-V未检测到核酸及菌体蛋白污染;注射初期质粒pVAX1/F1-V 主要分布于注射部位的肌肉组织,其他组织有散在分布;小鼠接种4周后,质粒pVAX1/F1-V仅分布于注射部位。小鼠注射pVAX1/F1-V质粒后未产生明显的毒副反应及自身免疫损伤,也未检测到自身抗体。初步证明鼠疫DNA 疫苗pVAX1/F1-V安全性良好,为鼠疫菌新型DNA疫苗的应用奠定了基础。
- 郭习勤王栋王希良蒋会婷黄顺军韩岳何维明
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌毒性试验DNA疫苗安全性
- 疫苗蛋白体佐剂的研制被引量：2
- 2006年
- 蛋白体（proteosmes）是由B群2b型脑膜炎双球菌外膜蛋白中3个孔道蛋白形成的囊泡样大小不同的毫微粒结构体，具有疫苗投递载体和佐剂的特征。近几年，国外蛋白体佐剂应用在很多疫苗的研制中，并且具有突破性的进展，主要用于鼻内接种疫苗。本研究选用B群2b型脑膜炎奈瑟双球菌29353菌株，以不同培养条件优化蛋白体的提取，从稳定性和安全性的某方面检测蛋白体作为疫苗佐剂的可能性，为研制黏膜疫苗提供安全可靠的佐剂。
- 吴秀芳王栋邢丽于三科王希良
- 关键词：外膜蛋白疫苗佐剂脑膜炎双球菌培养条件优化接种疫苗
- 凝血因子Ⅶ基因表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达被引量：6
- 2005年
- 凝血因子Ⅶ是凝血块形成的起始关键分子之一,它对外源性凝血途径的启动具有重要的作用。为表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ,通过PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中,构建重组表达载体pIRES-FⅦ,测序正确后用脂质体介导的方法转染BHK-21细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株,收集无皿清培养上清,进行SDS-PAGE、Western blot和活性鉴定。结果成功构建了重组表达载体pIRES-FⅦ,实现了其在BHK-21细胞中的表达,且表达产物具有促凝活性。重组人凝血因子Ⅶ在哺乳动物细胞中的成功表达,为整体止血剂的研究奠定了基础。
- 吕茂民王娜王栋于群章金刚
- 关键词：BHK细胞基因表达止血剂
- F1-V重组亚单位疫苗对鼠疫耶尔森氏菌141强毒株皮下攻毒保护性的研究被引量：2
- 2007年
- 在此实验中，设计了一种包含2种成分的重组融合蛋白作为疫苗成分来防护鼠疫耶尔森氏菌（Yersinia）可能产生的生物威胁．重组F1-V蛋白与铝佐剂结合，分别以10，20，50μg剂量免疫BALB／C小鼠，周期为2个月．检测小鼠血清抗体水平和T辅助细胞的亚型．免疫后小鼠以25～600LD50剂量的鼠疫耶尔森氏菌141强毒株进行皮下攻毒实验．结果证明，F1—V重组蛋白在小鼠体内诱导产生足够保护的免疫应答．血清IgG水平是产生最终保护力的一个重要因素．20μg的免疫剂量可以诱导血清抗体效价高达51200，使小鼠对400LD50的鼠疫耶尔森氏菌产生100％的保护．F1—V重组蛋白引发的抗体亚型主要为IgG1类，说明抗体反应趋向Th2型反应．流式细胞分析表明，铝佐剂主要帮助F1—V重组融合蛋白诱导强烈的体液免疫而不是CTL细胞免疫应答．表明F1—V重组亚单位疫苗株有希望成为一种新型的鼠疫疫苗候选株．
- 王栋贾暖李鹏邢丽王希良
- 关键词：攻毒亚单位疫苗
- 凝血因子Ⅶ基因表达载体的构建及在BHK细胞中的表达
- 目的探索重组人凝血因子Ⅷ(rhFⅧ)在哺乳动物细胞表达系统中的表达效果。方法用PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子Ⅶ cDNA,并将其定向克隆入真核表达载体pIRLSneo中,构建重组表达载体pIRES-FⅧ,...
- 吕茂民王娜王栋于群章金刚
- 文献传递
- 胶原蛋白在临床医学中的应用被引量：36
- 2005年
- 胶原蛋白是一种天然存在的具有很高利用价值的生物物质,其特有的极低的抗原性、可生物降解性、生物吸收性、止血性能和促进细胞生长的功能,使得近年来在医药工业和医学临床的研究和应用日益广泛。本文在简述胶原蛋白特性与制备工艺的基础上,较为详细地介绍了胶原蛋白在烧伤、烫伤、止血和眼科治疗及其组织工程中的应用和进展。
- 刘慧玲王栋章金刚
- 关键词：胶原蛋白烧伤创伤眼科
- 口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究被引量：3
- 2007年
- 目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达。以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平。结果构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生。结论构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础。
- 郭习勤焦新安王栋董梅邢丽颜艳何维明王希良
- 关键词：鼠疫耶尔森菌鼠疫DNA疫苗伤寒沙门菌
- 不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIgA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化。结果PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异。结论PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础。
- 袁源王栋邢丽王希良
- 关键词：蛋白体免疫反应
- 鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究被引量：9
- 2006年
- 目的以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgGI、gA抗体比正常对照组显著升高(P<0.01),同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P<0.01)。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgGI、gA和黏膜sIgA,其中1∶2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5∶1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。
- 吴秀芳于三科谢应国王栋袁源刑丽武素琴王希良
- 关键词：黏膜免疫
