章金刚
- 作品数：332 被引量：761H指数：13
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学化学工程更多>>
- 鸡贫血病病毒套式PCR检测方法的建立及应用被引量：15
- 2000年
- 鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性法氏囊病毒、正常MDCC_MSB1细胞DNA作为模板扩增时均未出现可见带 ,在检测鸡的各种组织病料时均未出现假阳性结果 ,该法比一次性PCR的敏感性高约 1 0 0 0倍 ,能检测到约一个拷贝的鸡贫血病病毒DNA ,而一次性PCR只能检测到3.6× 1 0 3 个拷贝。此方法已成功地应用于临床试验。对于鸡贫血病毒的许多鸡胚分离物和细胞分离物 ,一次性PCR不能扩增出可见电泳条带 ,而套式PCR都能扩增出特异的DNA片段 ,从而说明 ,套式PCR的敏感性大大高于一次性PCR 。
- 宋秀龙陈奖励辛九庆周方红杨雨辉章金刚
- 关键词：套式PCR贫血病病毒敏感性特异性
- 甲型H1N1流感病毒核酸荧光定量RT-PCR检测技术被引量：4
- 2010年
- 目的:建立基于TaqMan荧光探针技术的甲型H1N1流感病毒实时定量RT-PCR方法。方法:分析H1N1流感病毒基因特性,根据新发甲型H1N1流感病毒突变基因片段设计检测引物和TaqMan荧光探针,建立荧光定量RT-PCR检测体系,体外转录制备RNA标准品,进行特异性、敏感性、重复性及盲样检测评价实验。结果:可特异性有效检测新发甲型H1N1流感病毒核酸,与H1～H16流感病毒基因无交叉反应;对RNA标准品的检测敏感性达103拷贝/μL;重复性实验中,阳性标准品Ct值变异系数(CV)<10%,阴性标准品检测结果均呈阴性;12份盲样检测结果特异性好。结论:该荧光定量RT-PCR方法可作为甲型H1N1流感防控的病原快速诊断技术。
- 尹惠琼刘松婷史利军杨姝章金刚
- 关键词：甲型H1N1流感病毒大流行
- 中国特有小型猪内源性反转录病毒感染性克隆的构建与鉴定
- 目的猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)是猪-人异种移植及猪源生物制品研发中备受关注的病毒,PERV存在跨种传播感染人源细胞的风险。中国特有小型猪是适合医学实验研究和...
- 马玉媛颜奇坡向思龙吕茂民章金刚
- 关键词：猪内源性反转录病毒感染性克隆异种移植
- 中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析被引量：3
- 2006年
- 目的 克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒（PERV）囊膜基因（env）。比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法 应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV env基因，克隆入T载体后测序；随后以PCR方法对克隆PERV env基因进行分型检测；最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果 本试验所克隆的3株PERV env基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp，分别编码661、662和656个氨基酸，分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明：国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92．8～96．5％、69．4～73．4％及77．5％～80．8％之间。结论 PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关，与宿主、分布地域关系不大，且PERV—A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。
- 吴健敏吕茂民陈凤莲谢放潘汉世阳玉彪马玲章金刚
- 关键词：猪内源性反转录病毒囊膜基因
- 原料血浆中人巨细胞病毒抗体的检测
- 马玉媛王科李传龙吕茂民章金刚
- 生物条形码检测中的NP探针、其制备方法与生物条形码检测试剂盒
- 本发明生物条形码检测中的NP探针、其制备方法与生物条形码检测试剂盒，是在生物条形码检测方法的基础上，缩短NP探针标记的单链条形码DNA的长度(60碱基)，以减少NP探针表面条形码DNA形成折叠或弯曲，从而减少检测中存在的...
- 尹惠琼章金刚姬长甫王蕊朱凤宣吕茂民赵雄马玉媛
- 中国巴马小型猪封闭群内源性反转录病毒存在状况分析被引量：4
- 2005年
- 检测分析猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus;PERV)在中国巴马小型猪封闭群中的携带情况。根据本实验室已建立的PCR、RT_PCR检测方法,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达进行检测;同时根据目前通用的env基因分型方法检测PERVenv_Ae、nv_Be、nv_C的存在与表达情况。所有被检样品不仅存在PERV gag、pol、env特异性DNA,而且都能够转录为RNA;所有样品同时存在PERV A、B亚型的前病毒,且有70%个体还同时存在PERV_C亚型前病毒,但仅有90%样品检测到PERV_A亚型的表达,50%检测到PERV_B亚型的表达,而所有的样品均未检测到PERV_C型的表达。巴马小型猪封闭群外周血淋巴细胞基因组中存在PERV_A、B、C 3种亚型,但仅有A、B两种亚型能够表达。PERV_A、B、C 3种亚型的同时存在,预示着巴马小型猪封闭群中存在不同亚型病毒重组的可能性。
- 吴健敏阳玉彪郭艳茹吕茂民郭亚芬章金刚
- 关键词：巴马小型猪猪内源性反转录病毒病毒亚型
- 牛病毒性腹泻病病毒荧光定量PCR检测体系的建立与评价被引量：9
- 2009年
- 基于实时荧光定量PCR技术建立了一种有效地检测牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)核酸的方法。对BVDV基因组进行同源比对,选取5′UTR区作为扩增目的区,经软件分析后设计特异扩增引物,扩增片段长度为203 bp。选用SYBR染料作为扩增时信号指示剂,经扩增曲线分析表明,建立的方法可有效地检测BVDV。检测体系可检测到102copies/μL的样品拷贝数。故本研究建立的BVDV实时定量检测体系可用于易感动物、牛源血液生物制品及其他可能感染或污染BVDV样品的检测。
- 史利军孙宇尹惠琼孙卫华吕茂民章金刚
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR
- α2-巨球蛋白的制备与功能验证
- 章金刚
- 猪α-干扰素的原核表达及活性测定被引量：3
- 2009年
- 目的:表达并纯化出具有生物学活性的重组猪α-干扰素。方法:根据前期合成的猪α-干扰素基因序列设计引物,用PCR方法扩增出猪α-干扰素基因,并将其定向克隆入原核表达载体pET28中,酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,对表达产物通过镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化、透析法复性后,采用微量细胞病变抑制法测定重组猪α-干扰素的活性。结果:测序结果表明构建了猪α-干扰素原核表达载体pET28-poIFN-α;诱导表达后经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约21×103的位置出现明显的诱导蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经分析表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的36%,纯化后的目的蛋白纯度约为90%;采用微量细胞病变抑制法测定其活性约为1.67×106U/mg。结论:获得了纯度较高并具有较高活性的重组猪α-干扰素,为下一步研究猪α-干扰素药物价值及其生物制剂的生产、应用奠定了基础。
- 贾自文吕茂民冯晶晶赵媛媛王卓章金刚
- 关键词：原核表达抗病毒活性
