梁斌
- 作品数：17 被引量：42H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2008年
- 目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。
- 宋旭红梁斌刘戈飞谢健平李蕊黄东阳
- 关键词：宫颈肿瘤
- 腺苷酸活化蛋白激酶在维甲酸衍生物CD437介导细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 观察腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在肿瘤细胞凋亡过程中的作用,研究其分子机制及其对肿瘤临床治疗的意义.方法 HeLa-S3细胞分别设6组：0.1％ DMSO对照组、5μmol/L CD437处理组、CD437＋Compound C处理组、CD437＋AICAR处理组、AMPK抑制剂Compound C处理组、AMPK激活剂AICAR处理组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡发生率;通过Western blot检测AMPK的Thr-172位点的磷酸化以及细胞凋亡的标志蛋白Caspase-3的激活,结合流式细胞术凋亡检测结果分析细胞内AMPK活性变化与凋亡的关系;通过在LKB1表达缺失的HeLa-S3细胞内再表达野生型LKB1,观察其在CD437诱导细胞凋亡过程中的作用.结果 流式细胞术检测显示5μmol/L CD437诱导8h可引起（87.42±5.95）％的HeLa-S3细胞凋亡.AICAR可降低CD437的凋亡诱导作用[（51.04±8.26）％,P＜ 0.05],而Compound C可提高CD437诱导的HeLa-S3细胞的凋亡率[（86.42±5.95）％].在细胞内重新表达LKB1则会抑制AICAR对CD437的凋亡抵抗作用.结论 内源性AMPK激活对HeLa-S3细胞具有保护作用,此作用可被细胞内的抑癌基因LKB1的再表达所抑制.
- 梁斌宋旭红袁松刘艳敏
- 关键词：肿瘤细胞AMPK凋亡
- 维甲酸衍生物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用被引量：12
- 2006年
- 维甲酸及衍生物的抗肿瘤作用已在白血病及多种实体肿瘤的临床治疗及实验室研究中显示出其诱人前景。其中,较引人注目的是一系列新的维甲酸衍生物,如CD437,ST1926,MM002等。这些新发现的维甲酸衍生物较目前临床应用较广的全反式维甲酸(ARTA)有更强的凋亡诱导作用,更低的细胞毒性和更理想的药物代谢动力学指标,诱导凋亡途径也不同于传统维甲酸类药物作用依赖p53激活的途径。其作用的分子机制也完全有别于目前已知的化疗药物,可诱导对维甲酸和其它多种化疗药物耐药的肿瘤细胞发生凋亡。该文对目前维甲酸衍生物在肿瘤细胞中的凋亡诱导作用研究作一综述。
- 梁斌宋旭红黄东阳
- 关键词：维甲酸衍生物肿瘤凋亡
- 抗兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶单克隆抗体的制备和鉴定
- 2008年
- 背景与目的:制备抗兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。材料与方法:以基因工程重组兔NRDR为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌兔NRDRmAb的细胞株。以间接ELISA法筛选阳性克隆、鉴定Ig亚类、细胞培养上清及腹水效价,同时采用Westernblot方法检测mAb的特异性。结果:获得3株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(NR1、NR2和NR5)。其抗体亚类均为IgG1,细胞培养上清效价依次为1∶20、1∶40和1∶20,腹水效价分别为1∶106、1∶107和1∶106。Westernblot结果显示NR1、NR2和NR5抗体均能有效识别兔肝组织中的NRDR及重组表达的兔NRDR。结论:成功地建立了稳定分泌兔NRDRmAb的杂交瘤细胞株,为NRDR生物学功能的进一步研究打下了基础。
- 杜牡丹宋旭红刘戈飞梁斌张巧霞李蕊谢健平甘雪琼黄东阳
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤
- SYBR荧光实时定量PCR检测子宫颈鳞癌组织NRDR及其选择性剪接亚型mRNA表达被引量：1
- 2011年
- 目的检测子宫颈鳞癌组织中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]及其选择性剪接亚型NRDRB1 mRNA的表达,建立SYBR实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测NRDR及其选择性剪接亚型mRNA的方法,为准确、快速分析NRDR、NRDRB1基因表达奠定基础。方法根据子宫颈鳞癌组织中NRDR、NRDRB1基因序列,设计并合成引物,将逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的基因片段克隆至pGEM-T easy载体,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,作为阳性克隆标准品,用于标准曲线的制备,由此可定量检测出每一样品模板中NRDR、NRDRB1起始拷贝数。结果阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系(NRDR:r=0.994,NRDRB1:r=0.997),可用于NRDR及其选择性剪接亚型基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 RQ-PCR方法较常规PCR技术更为准确、特异、灵敏,对定量检测及研究NRDR及其选择性剪接亚型表达有积极意义。
- 梁斌刘戈飞谢建平李蕊宋旭红
- 关键词：宫颈肿瘤实时定量聚合酶链反应选择性剪接基因表达
- 宫颈癌细胞中NRDR选择性剪接新亚型表达质粒的构建及原核表达被引量：1
- 2008年
- 背景与目的：构建宫颈癌细胞中视黄醇脱氢／还原酶．辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）及其选择性剪接亚型NRDRB1原核表达载体，并在BL21-AI大肠杆菌中表达融合蛋白。材料与方法：用RT-PCR检测宫颈癌组织中NRDR、NRDRB1表达，RACE方法克隆NRDRB1全长eDNA，运用Gateway表达系统将NRDR、NRDRB1编码区序列构建到表达载体，转化到大肠杆菌中表达，表达的融合蛋白通过金属离子亲和层析纯化。结果：在宫颈鳞癌组织中发现NRDR新的选择性剪接亚型NRDRBl，构建了NRDR、NRDRBl原核表达载体，在BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组蛋白，诱导表达4h后目的蛋白可占总蛋白量的30％．50％，经一步亲和层析得到了高纯度的NRDR及NRDRB1重组蛋白。结论：在大肠杆菌中获得高效表达的NRDR、NRDRB1蛋白，为进一步研究其功能提供了实验材料。
- 宋旭红刘戈飞梁斌李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：选择性剪接宫颈癌
- 研究型细胞生物学实验模式在临床医学基础教学中的应用探索被引量：1
- 2017年
- 本文针对我院临床医学全英班的优势及原有细胞生物学实验教学模式存在的弊端,结合教学工作中的体会,从实验教学内容及方式两方面对研究型细胞生物学实验教学模式进行探索与改革。问卷调查结果发现学生对教学改革的反馈很好,实验教学改革取得良好效果。
- 蔡娜丽刘道然黄东阳陈海滨梁斌常晓兰许彦鸣
- 关键词：教学模式探索
- 宫颈鳞癌组织中NRDR选择性剪接新亚型的鉴定及意义被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨NRDR选择性剪接新亚型NRDRB1 mRNA和蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR、免疫荧光、免疫沉淀、免疫印迹、MALDI-TOF质谱分析等技术,检测正常宫颈上皮及宫颈鳞癌组织中NRDRB1mRNA及蛋白表达。结果:NRDRB1亚型全长1 171 bp,其蛋白保留了SDR家族的N末端辅酶结合模序、C末端底物结合模序以及过氧化物酶体定位信号。因第3外显子的缺失,导致SDR家族典型的“LVSNAA”折叠的丢失,使NRDRB1蛋白空间构象发生改变,从而影响该蛋白的细胞内定位和功能,NRDRB1蛋白的亚细胞定位明显不同于NRDR,酶活性亦明显低于NRDR。NRDRB1 mRNA及蛋白在宫颈鳞癌组织中表达(15/27,55.6%),明显高于正常宫颈上皮组织(P<0.05),正常宫颈上皮除NRDR外,未检测到NRDRB1 mRNA及其蛋白。结论:NRDR选择性剪接的异常,以及新的剪接亚型NRDRB1细胞内定位及蛋白酶活性的改变可能与宫颈鳞癌的发生发展密切相关。
- 宋旭红梁斌刘戈飞李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：HELA细胞
- 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备
- 2009年
- 目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 ng蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好,为NRDR的进一步研究打下基础。
- 谢健平刘戈飞宋旭红李蕊梁斌杜昆
- 关键词：多克隆抗体
- AMPK活性对HeLa细胞内质网功能稳态的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对He La细胞内质网应激的影响。方法:试验分为对照组(1‰DMSO)、内质网应激诱导组(2μg/m L衣霉素或500 nmol/L MG132内质网应激诱导剂诱导)和内质网应激干预组[衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-B-呋喃核糖苷(AICAR)干预组、衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂二甲双胍干预组以及衣霉素或MG132+0.5 mmol/L AMPK抑制剂Compound C干预组],以探究各处理组中AMPK活性状态对内质网应激的影响。收集对数生长期的He La细胞,分组诱导孵育后,用Western blot检测He La细胞AMPK/T-172磷酸化水平及内质网应激标志蛋白(p-elf2α、Grp78和XBP-2+2+1s)的表达,并采用细胞内钙集群检测分析(Indo-1 ratiometric Ca analysis)检测各组He La细胞内Ca浓度的变化。结果:衣霉素和MG132可诱导内质网应激标志蛋白p-elf2α、Grp78和XBP-1s的表达。AMPK激动剂AICAR和二甲双胍干预可降低上述3种内质网应2+激标志蛋白的表达,并降低细胞胞浆内因内质网应激导致的Ca浓度升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。AMPK抑制剂Compound C的干预对上述内质网应激标志蛋白的表达无明显影响(P均>0.05)。结论:AMPK激活能缓解He La细胞中的内质网应激,维持细胞内质网的功能稳态,可能对提高肿瘤细胞的应激耐受能力起到主要作用。
- 梁斌袁松刘艳敏宋旭红
- 关键词：腺苷酸活化蛋白激酶内质网应激
