宋旭红
- 作品数：25 被引量：50H指数：5
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省博士启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2008年
- 目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。
- 宋旭红梁斌刘戈飞谢健平李蕊黄东阳
- 关键词：宫颈肿瘤
- DHRS4基因簇缺失型神经母细胞瘤细胞株的克隆和鉴定
- 2011年
- 目的单克隆培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y-细胞株,并鉴定其在基因水平缺失DHRS4基因簇,包括DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1的基因序列。方法有限稀释法培养实验室偶得的低表达DHRS4基因的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,相差显微镜观察细胞的生长和增殖,PCR、RT-PCR检测DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1基因的DNA和RNA含量,Westernblotting检测DHRS4蛋白的表达。结果筛选得到单克隆神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,在DNA、RNA和蛋白水平均未检测到DHRS4基因簇的DNA序列及表达产物。结论经过克隆低表达DHRS4基因簇的SH-SY5Y细胞,得到纯系的DHRS4基因簇缺失的SH-SY5Y-细胞株,该细胞对于进一步研究DHRS4基因簇的功能和表达调控都是难得的细胞模型。
- 苏中静刘戈飞宋旭红陈海滨常晓兰黄东阳
- 关键词：基因缺失
- 神经母细胞瘤辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达与生物信息学分析被引量：7
- 2006年
- 目的探讨辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR)与神经母细胞瘤发生的关系。方法采用RACE方法从神经母细胞瘤细胞SK-N-SH和SY-5-Y中克隆NRDR全长cDNA,对获得的序列进行生物信息学分析,Northern杂交确定NRDR组织分布,免疫荧光染色鉴定NRDR细胞内定位,杆状病毒蛋白表达系统表达克隆的NRDR,反相高压液相色谱测定NRDR催化活性。结果从神经母细胞瘤细胞中克隆了一种新的NRDR全长cDNA片段(NCB I登录号为DQ344810),序列分析表明NRDR属短链醇脱氢酶家族。结论NRDR定位于细胞过氧化物酶体,具有辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶活性。神经母细胞瘤细胞中NRDR表达调控的改变,可能与神经母细胞瘤的发生有关。
- 刘戈飞李一凡宋旭红杜昆李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：神经母细胞瘤生物信息学
- 腺苷酸活化蛋白激酶在维甲酸衍生物CD437介导细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 观察腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在肿瘤细胞凋亡过程中的作用,研究其分子机制及其对肿瘤临床治疗的意义.方法 HeLa-S3细胞分别设6组：0.1％ DMSO对照组、5μmol/L CD437处理组、CD437＋Compound C处理组、CD437＋AICAR处理组、AMPK抑制剂Compound C处理组、AMPK激活剂AICAR处理组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡发生率;通过Western blot检测AMPK的Thr-172位点的磷酸化以及细胞凋亡的标志蛋白Caspase-3的激活,结合流式细胞术凋亡检测结果分析细胞内AMPK活性变化与凋亡的关系;通过在LKB1表达缺失的HeLa-S3细胞内再表达野生型LKB1,观察其在CD437诱导细胞凋亡过程中的作用.结果 流式细胞术检测显示5μmol/L CD437诱导8h可引起（87.42±5.95）％的HeLa-S3细胞凋亡.AICAR可降低CD437的凋亡诱导作用[（51.04±8.26）％,P＜ 0.05],而Compound C可提高CD437诱导的HeLa-S3细胞的凋亡率[（86.42±5.95）％].在细胞内重新表达LKB1则会抑制AICAR对CD437的凋亡抵抗作用.结论 内源性AMPK激活对HeLa-S3细胞具有保护作用,此作用可被细胞内的抑癌基因LKB1的再表达所抑制.
- 梁斌宋旭红袁松刘艳敏
- 关键词：肿瘤细胞AMPK凋亡
- AMPK活性对HeLa细胞内质网功能稳态的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对He La细胞内质网应激的影响。方法:试验分为对照组(1‰DMSO)、内质网应激诱导组(2μg/m L衣霉素或500 nmol/L MG132内质网应激诱导剂诱导)和内质网应激干预组[衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-B-呋喃核糖苷(AICAR)干预组、衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂二甲双胍干预组以及衣霉素或MG132+0.5 mmol/L AMPK抑制剂Compound C干预组],以探究各处理组中AMPK活性状态对内质网应激的影响。收集对数生长期的He La细胞,分组诱导孵育后,用Western blot检测He La细胞AMPK/T-172磷酸化水平及内质网应激标志蛋白(p-elf2α、Grp78和XBP-2+2+1s)的表达,并采用细胞内钙集群检测分析(Indo-1 ratiometric Ca analysis)检测各组He La细胞内Ca浓度的变化。结果:衣霉素和MG132可诱导内质网应激标志蛋白p-elf2α、Grp78和XBP-1s的表达。AMPK激动剂AICAR和二甲双胍干预可降低上述3种内质网应2+激标志蛋白的表达,并降低细胞胞浆内因内质网应激导致的Ca浓度升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。AMPK抑制剂Compound C的干预对上述内质网应激标志蛋白的表达无明显影响(P均>0.05)。结论:AMPK激活能缓解He La细胞中的内质网应激,维持细胞内质网的功能稳态,可能对提高肿瘤细胞的应激耐受能力起到主要作用。
- 梁斌袁松刘艳敏宋旭红
- 关键词：腺苷酸活化蛋白激酶内质网应激
- 宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型真核表达载体的构建和表达被引量：2
- 2008年
- 目的:构建宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及选择性剪接亚型NRDRB1真核表达载体,并转染HeLa细胞表达融合蛋白和native蛋白。方法:分别以pDONR-NRDR、pDONR-NRDRB1载体为模板,用PCR方法扩增两端带有酶切位点的NRDR及NRDRB1编码区序列,酶切后连接到pCDNA3、pCMV-Myc真核表达载体上,经酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞16 h,Western blot检测蛋白表达情况,蛋白质谱分析鉴定表达蛋白。结果:成功构建NRDR、NRDRB1真核表达载体,转染HeLa细胞后,可表达带有Myc标签的蛋白和不带标签的native蛋白;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为NRDR和NRDRB1。结论:获得了在真核细胞中表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料。
- 宋旭红李蕊刘戈飞梁斌谢建平黄东阳
- 关键词：选择性剪接宫颈癌真核表达
- 宫颈鳞癌组织中NRDR选择性剪接新亚型的鉴定及意义被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨NRDR选择性剪接新亚型NRDRB1 mRNA和蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR、免疫荧光、免疫沉淀、免疫印迹、MALDI-TOF质谱分析等技术,检测正常宫颈上皮及宫颈鳞癌组织中NRDRB1mRNA及蛋白表达。结果:NRDRB1亚型全长1 171 bp,其蛋白保留了SDR家族的N末端辅酶结合模序、C末端底物结合模序以及过氧化物酶体定位信号。因第3外显子的缺失,导致SDR家族典型的“LVSNAA”折叠的丢失,使NRDRB1蛋白空间构象发生改变,从而影响该蛋白的细胞内定位和功能,NRDRB1蛋白的亚细胞定位明显不同于NRDR,酶活性亦明显低于NRDR。NRDRB1 mRNA及蛋白在宫颈鳞癌组织中表达(15/27,55.6%),明显高于正常宫颈上皮组织(P<0.05),正常宫颈上皮除NRDR外,未检测到NRDRB1 mRNA及其蛋白。结论:NRDR选择性剪接的异常,以及新的剪接亚型NRDRB1细胞内定位及蛋白酶活性的改变可能与宫颈鳞癌的发生发展密切相关。
- 宋旭红梁斌刘戈飞李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：HELA细胞
- 一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
- 李一凡刘戈飞宋旭红杜昆黄东阳
- 关键词：选择性剪接
- 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备
- 2009年
- 目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 ng蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好,为NRDR的进一步研究打下基础。
- 谢健平刘戈飞宋旭红李蕊梁斌杜昆
- 关键词：多克隆抗体
- 正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究被引量：1
- 2010年
- 目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细胞,通过RT-PCR和real-time PCR方法检测DHRS4L2的表达情况。结果:发现了2个新的DHRS4L2剪接亚型DHRS4L2A和DHRS4L2A3,2个新亚型均出现了新的第1个外显子,命名为Ea,前者缺失外显子1,后者缺失外显子1和3;在正常肝细胞中去甲基化后含DHRS4L2外显子1的转录产物比处理前明显增加,在肝癌细胞中则比处理前减少。结论:获得2个新的DHRS4L2剪接亚型,并发现DHRS4L2的表达和甲基化调控相关,且甲基化的调控作用在正常肝与肝癌细胞之间存在差异,其机制尚待进一步探讨。
- 甘雪琼宋旭红李蕊张巧霞杜牡丹黄东阳
- 关键词：选择性剪接
