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刘戈飞

作品数：54 被引量：145H指数：8
供职机构：汕头大学医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金辽宁省科学技术基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 49篇期刊文章
  • 3篇会议论文
  • 2篇学位论文

领域

  • 38篇医药卫生
  • 19篇生物学
  • 2篇文化科学

主题

  • 24篇细胞
  • 15篇基因
  • 12篇剪接
  • 11篇选择性剪接
  • 10篇克隆
  • 7篇蛋白
  • 7篇基因表达
  • 6篇神经母细胞
  • 6篇神经母细胞瘤
  • 6篇细胞瘤
  • 6篇母细胞
  • 6篇母细胞瘤
  • 6篇CDNA
  • 5篇活性
  • 5篇癌细胞
  • 4篇血管
  • 4篇人神经母细胞...
  • 4篇上皮
  • 4篇上皮细胞
  • 4篇肿瘤

机构

  • 34篇汕头大学
  • 25篇中国医科大学
  • 13篇中国医科大学...
  • 2篇佳木斯大学附...
  • 2篇辽宁省人民医...
  • 2篇汕头大学医学...
  • 1篇广东省人民医...
  • 1篇广东医学院
  • 1篇上海交通大学
  • 1篇沈阳医学院

作者

  • 54篇刘戈飞
  • 25篇黄东阳
  • 16篇宋旭红
  • 11篇李蕊
  • 10篇梁斌
  • 7篇谢健平
  • 7篇杜昆
  • 6篇李立梅
  • 5篇谢建平
  • 5篇王桂玲
  • 4篇杨军
  • 4篇杜晶
  • 4篇张劲松
  • 4篇胡新华
  • 4篇宋今丹
  • 4篇张强
  • 4篇张巧霞
  • 3篇李一凡
  • 3篇陈海滨
  • 3篇孔垂泽

传媒

  • 6篇汕头大学医学...
  • 5篇癌变．畸变．...
  • 3篇中国临床康复
  • 2篇中华眼科杂志
  • 2篇中华实验外科...
  • 2篇中国医科大学...
  • 2篇中国生物化学...
  • 2篇解剖学研究
  • 1篇中国康复理论...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇心血管康复医...
  • 1篇中国现代医学...
  • 1篇生命科学研究
  • 1篇军事医学科学...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇中华泌尿外科...
  • 1篇中华外科杂志
  • 1篇中华检验医学...
  • 1篇解放军医学杂...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2014
  • 3篇2011
  • 1篇2010
  • 2篇2009
  • 6篇2008
  • 5篇2007
  • 14篇2006
  • 4篇2005
  • 11篇2004
  • 3篇2003
  • 2篇2002
  • 1篇2001
  • 1篇2000
共 54 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
过氧化氢酶基因重组腺病毒对大鼠晶状体氧化损伤的保护作用
目的:探讨过氧化氢酶(CAT)基因重组腺病毒对晶状体氧化损伤进行基因治疗的可行性。方法:克隆CAT基因,构建CAT基因重组腺病毒,测定病毒液滴度。体外培养大鼠晶状体,Western印迹分析确定重组腺病毒感染大鼠晶状体后C...
李立梅刘戈飞
文献传递
从动物组织提取高质量总RNA方法的改进被引量：24
2003年
RNA提取技术是分子生物学研究中的重要实验技术。介绍一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA 的改进的方法,该法实用性强、重复性好。提取的RNA无DNA等污染物,其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表 达研究的需要。利用改进后的方法提取牛组织的总RNA,研究了NRDR基因在牛组织中的表达分布。
王桂玲刘戈飞黄东阳
关键词：RNA提取动物组织分子生物学纯度
宫颈癌细胞中NRDR选择性剪接新亚型表达质粒的构建及原核表达被引量：1
2008年
背景与目的：构建宫颈癌细胞中视黄醇脱氢／还原酶．辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）及其选择性剪接亚型NRDRB1原核表达载体，并在BL21-AI大肠杆菌中表达融合蛋白。材料与方法：用RT-PCR检测宫颈癌组织中NRDR、NRDRB1表达，RACE方法克隆NRDRB1全长eDNA，运用Gateway表达系统将NRDR、NRDRB1编码区序列构建到表达载体，转化到大肠杆菌中表达，表达的融合蛋白通过金属离子亲和层析纯化。结果：在宫颈鳞癌组织中发现NRDR新的选择性剪接亚型NRDRBl，构建了NRDR、NRDRBl原核表达载体，在BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组蛋白，诱导表达4h后目的蛋白可占总蛋白量的30％．50％，经一步亲和层析得到了高纯度的NRDR及NRDRB1重组蛋白。结论：在大肠杆菌中获得高效表达的NRDR、NRDRB1蛋白，为进一步研究其功能提供了实验材料。
宋旭红刘戈飞梁斌李蕊谢建平黄东阳
关键词：选择性剪接宫颈癌
转过氧化氢酶基因LECs对氧化损伤耐受性的实验研究被引量：1
2005年
目的探讨转过氧化氢酶(CAT)基因晶状体上皮细胞(LECs)对氧化损伤耐受性的变化,为白内障的临床预防与治疗提供实验依据。方法应用稳定转染的方法构建CAT基因高表达LECsSRA01/04-CAT,测定CAT的活性。以SRA01/04和SRA01/04-CAT细胞为研究对象,使用过氧化氢(H2O2)为处理因素,MTT方法测定对SRA01/04和SRA01/04-CAT细胞的半数致死量(IC50);AnnexinV和碘化丙啶双染色分析H2O2诱导LECs凋亡作用。Western印迹方法分析凋亡过程中caspase-3的活化。结果成功构建CAT基因表达水平提高的SRA01/04-CAT细胞。SRA01/04-CAT细胞CAT的表达水平是SRA01/04细胞的3·5倍,SRA01/04-CAT细胞的CAT活性是SRA01/04细胞CAT活性的2·2倍。H2O2对SRA01/04细胞的IC50为32·24μmmol/L,对SRA01/04-CAT的IC50为85·32μmmol/L,转染CAT基因后SRA01/04-CAT对过氧化氢的耐受能力是SRA01/04的2·65倍。相同培养条件下H2O2诱导SRA01/04细胞凋亡率是SRA01/04-CAT细胞的2·1倍。H2O2诱导LECs凋亡的过程伴随caspase-3的激活,SRA01/04-CAT细胞caspase-3活化的时间比SRA01/04细胞晚,同一时刻上SRA01/04-CAT细胞caspase-3活化的强度比SRA01/04细胞弱。结论CAT基因可提高LECs对氧化损伤的耐受性,能够抑制活性氧诱导产生的细胞凋亡效应。CAT基因可能是一个较好的候选基因,用于白内障基因治疗。
李立梅刘戈飞张劲松
关键词：晶状体上皮细胞活性氧凋亡LECS白内障
宫颈鳞癌组织中NRDR选择性剪接新亚型的鉴定及意义被引量：10
2006年
目的:探讨NRDR选择性剪接新亚型NRDRB1 mRNA和蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR、免疫荧光、免疫沉淀、免疫印迹、MALDI-TOF质谱分析等技术,检测正常宫颈上皮及宫颈鳞癌组织中NRDRB1mRNA及蛋白表达。结果:NRDRB1亚型全长1 171 bp,其蛋白保留了SDR家族的N末端辅酶结合模序、C末端底物结合模序以及过氧化物酶体定位信号。因第3外显子的缺失,导致SDR家族典型的“LVSNAA”折叠的丢失,使NRDRB1蛋白空间构象发生改变,从而影响该蛋白的细胞内定位和功能,NRDRB1蛋白的亚细胞定位明显不同于NRDR,酶活性亦明显低于NRDR。NRDRB1 mRNA及蛋白在宫颈鳞癌组织中表达(15/27,55.6%),明显高于正常宫颈上皮组织(P<0.05),正常宫颈上皮除NRDR外,未检测到NRDRB1 mRNA及其蛋白。结论:NRDR选择性剪接的异常,以及新的剪接亚型NRDRB1细胞内定位及蛋白酶活性的改变可能与宫颈鳞癌的发生发展密切相关。
宋旭红梁斌刘戈飞李蕊谢建平黄东阳
关键词：HELA细胞
美国医师执照考试对我国医学遗传学教学的启示被引量：5
2009年
介绍了美国医师执照(United States Medical Licensing Examination,USMLE)考试中与医学遗传学教学相关的大纲内容,并比较了我国医学遗传学教学范围与美国USMLE测试考点的异同。分析发现USMLE更加注重临床思维的培训以及临床案例的运用,启示国内医学遗传学教学工作应加强运用以问题为基础的教学模式(Problem-based learning,PBL),提出邀请临床医生参加教材编写,以及在中国执业医师考试中增加医学遗传内容等建议。
孙平楠周小玲刘戈飞黄天华
关键词：美国医师执照考试医学遗传学教学PBL教学
一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析被引量：11
2005年
背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
李一凡刘戈飞宋旭红杜昆黄东阳
关键词：选择性剪接
兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备
2009年
目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 ng蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好,为NRDR的进一步研究打下基础。
谢健平刘戈飞宋旭红李蕊梁斌杜昆
关键词：多克隆抗体
一种人肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶剪接体cDNA的克隆及特征分析(英文)被引量：5
2004年
在用RT PCR法局部扩增人与小鼠肝脏 6 35bp的NRDRDNA时 ,在人肝中发现了另一短序列PCR产物 ,克隆后测序显示其整个序列与NRDRcDNA编码区的前后序列完全一致。采用 3′ Race和 5′ Race方法 ,从人肝组织细胞中扩增得到两个全长cDNA ,除 12 6 1bp的NRDRcDNA外 ,另一个为全长 10 0 3bp、编码区长为 5 2 5bp的NRDRiso(GenBank登录号 :AY0 7185 6 )。数据库分析表明 ,NRDRiso编码区是由人NRDR 8个外显子中的第 1、2、3、7、8外显子选择性剪接而成。缺失的NRDR第 4、5、6外显子共 2 5 8bp ,编码 86个氨基酸。因此 ,与人NRDR的 2 6 0个氨基酸残基相比 ,NRDRiso由 174个氨基酸残基组成 ,分子量为 18 6kDa ,并且NRDRiso的组织表达与NRDR明显不同。
杜晶黄东阳刘戈飞王桂玲徐晓琳王博朱莉
关键词：CDNA克隆ADH选择性剪接
蛋白激酶C抑制剂逆转肾癌多药耐药机制的探讨(英文)被引量：2
2007年
目的探讨蛋白激酶 C 抑制剂对肾癌细胞多药耐药性的逆转作用的机制。方法应用荧光显色法、RT- PCR、Western Blot 方法检测 PKCαcDNA 对肾癌 786- 0 细胞的转染前后细胞中 MDR 相关基因MDR1、MRP1、LRP 的表达变化。采用 MTT 法测定转染细胞系 PKC- α\786- 0 与 786- 0 细胞分别对阿霉素( ADM) 与蛋白激酶 C 激动剂、蛋白激酶 C 抑制剂协同作用后的耐药性变化。结果 RT- PCR 结果显示肾癌转染细胞 PKCα\786- 0 的 MDR1 表达水平高于肾癌 786- 0 细胞。阿霉素( ADM) 与蛋白激酶 C 抑制剂协同作用的细胞系的耐药性明显降低。786- 0 细胞对阿霉素( ADM) 的 IC50 为: 7.8015e-7(5.7046e-7 至 1.0669e-6);PKCα\786- 0 对药物阿霉素( ADM) 的 IC50 为: 1.6588e-6(1.1621e-6 至 2.3677e-6); 蛋白激酶 C 激动剂 PMA 联合阿霉素处理 PKCα\786- 0 的 IC50 为: 2.6794e-6(2.0521e-6 至 3.4983e-6); 蛋白激酶 C 抑制剂 Calphostin C 联合阿霉素处理 PKCα\786- 0 的 IC50 为: 9.2506e-8(5.9337e-8～1.4422e-7)。结论蛋白激酶 C 抑制剂可以逆转人肾癌细胞的多药耐药性, 其途经可能与改变 MDR1 的表达相关。
刘涛孔垂泽毕建斌刘戈飞
关键词：蛋白激酶C多药耐药肾癌
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