张宝山
- 作品数：21 被引量：118H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定被引量：29
- 2000年
- 应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡
- 刘胜旺陈洪岩孔宪刚张宝山马云燕童光志卢景良
- 关键词：Γ-干扰素淋巴细胞基因克隆
- 鸡IL-2基因的克隆及序列测定被引量：27
- 1999年
- 根据已发表的鸡白细胞介素２（ＩＬ２）基因序列设计引物，用ＲＴＰＣＲ方法从新城疫病毒感染的雏鸡脾淋巴细胞培养物中扩增出鸡的ＩＬ２基因ｃＤＮＡ，并进行序列测定，为进一步表达鸡ＩＬ２并深入研究其功能奠定了基础。
- 陈洪岩刘胜旺陈奖励张宝山卢景良
- 关键词：克隆
- 重组马传染性贫血病病毒核心蛋白抗原在 A GID 和ELISA中应用的评价
- 1999年
- 用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒（ Ｅ Ｉ Ａ Ｖ） 核心蛋白（ Ｇａｇ） 和 Ｐ２６ 蛋白， 作为免疫琼脂双扩散（ Ａ Ｇ Ｉ Ｄ） 和酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 抗原。对７６ 份已知马传贫非特异性血清进行检查， 同时与市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒作比较。证明， 用表达蛋白作抗原的 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测结果均为阴性反应， 而用市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 试剂盒检查有５４ 份马血清出现非特异性反应， 市售 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒检查也出现了非特异性反应， Ｏ Ｄ 值比表达抗原 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 高３５ 倍。初步证明在 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法中， 表达抗原优于常规马传贫病毒抗原。
- 孔宪刚陶伟英刘永刚张宝山刘胜旺卢景良
- 关键词：EIAV传染性贫血病ELISA核心蛋白
- 酵母双杂合系统BD端血型糖蛋白A表达质粒的构建被引量：3
- 2002年
- 目的 :获得血型糖蛋白A(GPA)cDNA片段 ,并构建酵母双杂合BD端表达质粒。方法 :利用RT -PCR方法 ,从K5 6 2细胞mRNA中扩增GPAcDNA片段 ,约 410bp。测序后将其克隆至pbridge载体上。用醋酸锂法将构建好的pbridge -GPA转染酵母菌AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果 :克隆到的 410bpGPAcDNA编码的氨基酸序列基本与公布序列相同。pbridge—GPA转染酵母菌后 ,在SD/Gal/—His/Ura培养基上出现 1mm大小白色菌落。结论 :获得了血型糖蛋白AcDNA克隆 ,pbridge—GPA对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 ,可作为酵母双杂合系统中的靶基因。
- 李宏涛傅国辉姜晓姝张宝山孔宪刚
- 关键词：血型糖蛋白膜蛋白质类
- 两种抗艾滋病药物对马传贫病毒的体外抑制作用被引量：1
- 1993年
- 探讨了抗艾滋病病毒药物3′-叠氮3-脱氧胸腺嘧啶核苷及三氮唑核苷在马传贫病毒(EIAV)-驴胎皮肤细胞培养系统中对EIAV的抑制作用。通过细胞病变观察及培养物病毒抗原活性的测定表明,上述两种药物对EIAV有明显的抑制作用。
- 戴玉坤张宝山
- 关键词：马传染性贫血病毒艾滋病
- 应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表达的研究被引量：12
- 2000年
- 应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(ChIFN_γ)和白细胞介素_2(ChIL_2) 等鸡的Th1 样淋巴因子mRNA。未诱导但培养了3 小时的鸡脾细胞可表达ChIFN_α和ChIFN_γmRNA,而未检测到ChIL_2m RNA的表达。正常SPF鸡的脾细胞可表达ChIFN_αmRNA。本研究应用不同公司生产的反转录酶和Taq 多聚酶,取得了相同的结果。表明该方法具有很好的重复性,而且该法敏感而方便。
- 刘胜旺孔宪刚陈洪岩张宝山刘永刚童光志卢景良
- 关键词：MRNART-PCR
- EIAV反式激活蛋白(TAT)基因的分子克隆与序列测定
- 2002年
- 以马传染性贫血病毒 (EIAV)疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒繁殖期提取细胞总 RNA,反转录后使用特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆、测序并与基因组全序列比较 ,确定了编码 EIAV反式激活蛋白(TAT)的转录产物及阅读框架 ,发现至少有 2种拼接产物编码 TAT。比较 2种阅读框架 ,以保守序列作为模板扩增得到完整的编码 EIAV反式激活蛋白的基因。
- 周家喜张宝山刘永刚孔宪刚刘胜旺孙成群刘相东
- 关键词：马传染性贫血病毒测序TAT基因分子克隆
- 马传染性贫血病病毒核心蛋白基因的克隆和表达被引量：1
- 1999年
- 根据美国马传染性贫血病病毒（EIAV）Wyoming株基因序列，设计扩增EIAVgag和p26基因的引物，用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重组杆状病毒（rBVs）。含有gag和p26基因的重组杆状病毒感染昆虫Sf21细胞，经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化，每升培养物能获得2mgCag或12mgp26蛋白。
- 孔宪刚孙荣芳刘永刚张宝山刘胜旺卢景良
- 关键词：传染性贫血病病毒重组杆状病毒核心蛋白
- 鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用被引量：32
- 1999年
- 将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明， Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高，至第３５ 日龄左右达到高峰，攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高，血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击，说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。
- 陈洪岩江国托杨奇伟陈奖励张宝山刘胜旺卢景良
- 关键词：S1基因基因免疫传染性支气管炎IBV
- 现地马传贫琼扩阴性酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验被引量：2
- 1994年
- 在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性马４匹、ＥＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果均为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为阳性，用马传贫病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５０％以上。
- 戴玉坤张宝山哈萨戴素敏郭振梅郭庆华王立波
- 关键词：马传贫琼扩试验酶联免疫吸附
