孙成群
- 作品数：10 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- EIAV反式激活蛋白(TAT)基因的分子克隆与序列测定
- 2002年
- 以马传染性贫血病毒 (EIAV)疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒繁殖期提取细胞总 RNA,反转录后使用特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆、测序并与基因组全序列比较 ,确定了编码 EIAV反式激活蛋白(TAT)的转录产物及阅读框架 ,发现至少有 2种拼接产物编码 TAT。比较 2种阅读框架 ,以保守序列作为模板扩增得到完整的编码 EIAV反式激活蛋白的基因。
- 周家喜张宝山刘永刚孔宪刚刘胜旺孙成群刘相东
- 关键词：马传染性贫血病毒测序TAT基因分子克隆
- 马传染性贫血病毒基因组部分转录图谱被引量：2
- 2001年
- 以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置。发现两种病毒在外显子 3的上游拼接受体位点 (SA2 )的位置与已报道的EIAV毒株均不相同 。
- 刘相冬张宝山孔宪刚王滨有孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华
- 关键词：马传染性贫血病毒病毒基因组
- 慢病毒基因转移载体、其制备方法和应用
- 本发明公开了一种马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体、其构建方法及其用途。本发明载体包含：CMV/R/U5启动子、5’非翻译区引导序列、部分5’gag基因编码区序列、中央聚嘌呤序列和EIAV的Rev反应元件、CMVI...
- 韩凌霞童光志曲连东司昌德于海波孟庆文姜骞刘家森孙成群
- 水疱性口炎病毒糖蛋白基因的克隆和表达被引量：1
- 2005年
- 对一株实验室保存多年的水疱性口炎病毒(VSV)的囊膜糖蛋白(VSV_G)基因进行了克隆和测序,并且构建了重组VSV_G真核系统表达载体。结果表明克隆的VSV_G基因全长1536个核苷酸(nt),其编码的G蛋白长为511个氨基酸(aa),氨基酸序列与20个Indiana血清型VSV毒株的同源性在95.4%左右(94.1%～98.0%)。种系发生树分析表明此病毒株属于水疱病毒属的VSV_Indiana血清型。经免疫荧光检测证明构建的重组VSV_G表达质粒pCIVG5和pCRVG6转染23T细胞后能够有效地转录和表达,这为进一步开发利用VSV_G奠定了基础。
- 孙成群彭金美吴东来童光志仇华吉孔宪刚
- 关键词：水疱性口炎病毒囊膜糖蛋白
- 编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定被引量：1
- 2000年
- ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒繁殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较，确定了编码Ｒｅｖ蛋白的病毒基因组转录产物的编码序列和拼接位点。
- 张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚
- 关键词：CDNA克隆
- 马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本驴强毒株长末端重复序列(LTR)的启动子活性比较
- 2002年
- 将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey adaptedequineinfectiousanemiavirus,D AEIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkeyleukocyteattenuatedEIAV,DLAEIAV)及EIAVWyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT Basicvector中,获得重组质粒p D A LTR CAT、p DLA LTR CAT及p Wyo LTR CAT。将这3个重组质粒分别体外转染EIAV阴性健康驴的白细胞,比较这三者LTR启动报告基因CAT表达的基础活性和在tat pcDNA3共转染条件下激活活性的差异。结果表明:在驴白细胞中,DLAEIAVLTR启动CAT表达的活性略高于D AEIAVLTR;而与EIAVWyoming株LTR比较,DLAEIAV与D AEIAV二者LTR启动CAT表达的活性都较低。在有共转染重组表达质粒tat pcDNA3条件下,D AEIAV、DLAEIAV及EIAVWyoming株LTR起始CAT表达的活性都得到提高,分别提高了4 8倍、6 0倍和3 2倍。上述结果提示,LTR可能是体现DLAEIAV驴白细胞适应性的因素,不一定是影响其毒力减弱的根本原因。
- 周家喜孔宪刚张宝山刘胜旺刘丽玲孙成群刘相东刘永刚杨威
- 关键词：马传染性贫血病毒长末端重复序列
- 编码EIAV反式激活蛋白Tat的cDNA克隆和序列测定
- 2000年
- ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒增殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较。确定了编码ＥＩＡＶ反式激活蛋白的转录产物及阅读框架及转录后拼接位点，研究发现至少有两种拼接产物编码ＴＡＴ。
- 张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚
- 拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率被引量：1
- 2003年
- 分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-AEIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLAEIAV)RNA为模板,利用RT-PCR的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列。然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2env阅读框架中,构成CAT拼接报告系统。同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列TAG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒。用构建的3个重组表达质粒DNA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度。结果表明:EIAV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低。由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAVmRNA外显子-2、3之间的拼接效率。实验数据表明,EIAVSA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-AEIAVSA2-SD2拼接效率比DLAEIAV相应位点拼接效率高。
- 刘相冬张宝山王滨有杨威孙成群周家喜王凯波孔宪刚
- 关键词：马传染性贫血病毒REV
- 慢病毒基因转移载体、其制备方法和应用
- 本发明公开了一种马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体、其构建方法及其用途。本发明载体包含：CMV/R/U5启动子、5’非翻译区引导序列、部分5’gag基因编码区序列、中央聚嘌呤序列和EIAV的Rev反应元件、CMVI...
- 韩凌霞童光志曲连东司昌德于海波孟庆文姜骞刘家森孙成群
- 文献传递
- 编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定
- 2001年
- EIAV在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节 ,其中Rev蛋白是病毒编码的转录后调节因子 ,决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Rev是非结构蛋白 ,由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用EIAV疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒增殖早期提取总RNA ,反转录后使用EIAV特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析 ,通过与基因组全序列的比较 。
- 孔宪刚张宝山周家喜刘永刚刘胜旺刘相东孙成群
- 关键词：马传贫病毒CDNA克隆
