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活化型及失活型SUMO1真核表达载体的构建及鉴定被引量：3: 2014年; 目的:构建活化型及失活型SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)真核表达载体并鉴定其蛋白活性。方法:以野生型HA-SUMO1-pc DNA3.1为模板,采用PCR扩增目的基因,将其连接入克隆载体T vector,筛选阳性重组子;将目的基因酶切回收后亚克隆入真核表达载体pc DNA3.1。将阳性克隆转染HEK293细胞,免疫印迹鉴定底物蛋白与SUMO1的结合情况(即SUMO化水平)。结果:活化型及失活型SUMO1目的基因被扩增,并且亚克隆入pc DNA3.1,且测序结果与预期一致。免疫印迹分析显示,转染活化型SUMO1组检测到显著的蛋白SUMO化条带,而失活型组则无明显条带。结论:活化型及失活型SUMO1真核表达载体成功构建,并可于HEK293细胞高效表达。; 杜彩萍王梅段富刚侯筱宇; 关键词：真核表达载体

案例教学法在药事管理学课程中的应用被引量：4: 2012年; 药事管理学课程具有很强的专业性及政策性,理论内容比较枯燥。传统"讲授式"教学方法不能提高学生的学习兴趣,学习效果比较差。针对药事管理学课程的教学现状,以课程理论内容为依托,引入"案例教学法"对课程进行改革和实践,以激发学生的兴趣,巩固理论基础,提升学习兴趣,增强学生解决问题的能力。; 吴杰杜彩萍; 关键词：药事管理学案例教学法

野生型MLK3真核表达载体的构建及其表达: 2010年; 目的构建野生型MLK3真核表达质粒并转染至COS-7细胞中表达。方法以大鼠海马总RNA为模板,通过RT-PCR分段扩增MLK3的序列,采用酶切、链接的方法先将目的基因克隆至pGEM-T,筛选正确的质粒后,再亚克隆至pcDNA3.1(+)。以脂质体转染法将构建好的重组质粒转染至COS-7细胞,通过免疫印迹鉴定重组质粒的表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型MLK3的序列正确。免疫印迹显示,转染的重组质粒在相对分子质量92×103处有相应条带出现。结论成功构建了MLK3的真核表达质粒,重组质粒在COS-7细胞中高效表达。; 金磊岳军杜彩萍侯筱宇; 关键词：克隆真核表达

抑制MLK3-PSD-95相互作用对β-淀粉样肽神经毒性的保护作用及其机制的研究: β-淀粉样肽(Amyloid-βpeptide;Aβ)参与阿尔茨海默病(Alzheimer''''s disease;AD)的形成和发展。本室前期研究结果表明,可溶性寡聚化的Aβ激活MLK3-MKK7-JNK3信号通路,...; 金磊徐岩杜彩萍侯筱宇; 关键词：阿尔茨海默病 Β-淀粉样肽 PSD-95 MAPK

酪氨酸蛋白激酶Fyn突变体FynY531F与FynK299M活性的鉴定: 2007年; Fyn是Src酪氨酸蛋白激酶家族(Src family of protein tyrosine kinases;SrcPTKs)中的一员,在神经元的增殖、分化和存活中起着重要作用.本文利用分子克隆手段构建Fyn突变体FynY531F(酪氨酸突变为苯丙氨酸)和FynK299M(赖氨酸突变为甲硫氨酸)的真核表达载体,并通过检测突变体对NMDA受体亚基NR2A的磷酸化作用以鉴定其激酶活性.根据GenBank提供的大鼠Fyn的cDNA序列(NM-012755),采用RT-PCR扩增野生型Fyn(wFyn)目的基因,应用定点突变技术扩增活化型Fyn(FynY531 F)目的基因,并用重叠延伸PCR定点突变技术扩增失活型Fyn(FynK299 M)目的基因,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).免疫印迹分析显示,wFyn、FynY531F及FynK299M重组体均能在COS-7细胞表达.将构建的3个重组体分别与NMDA受体亚基NR2A的表达质粒共转染COS-7细胞.结果显示,活化型Fyn能够使NR2A酪氨酸磷酸化,而失活型Fyn则没有表现出激酶活性.结果表明,本文成功构建了野生型、活化型及失活型Fyn的真核表达载体,为进一步揭示Fyn在中枢神经系统中的病理生理意义奠定了基础.; 侯筱宇杜彩萍; 关键词：FYN 克隆 NMDA受体磷酸化

活化型及失活型n-Src真核表达载体的构建及活性鉴定: 2014年; 目的构建神经型酪氨酸蛋白激酶n-Src的活化型（aSrc,SrcY535F）及失活型（iSrc,SrcK303R）真核表达载体并鉴定其在HEK293T细胞中的表达及活性.方法以野生型pRc/CMV-n-Src真核表达载体为模板,采用PCR定点突变技术分别扩增活化型及失活型pRc/CMV-n-Src全长序列,并转染入HEK293T细胞,通过免疫印迹检测n-Src的蛋白表达及其自身磷酸化水平.结果 aSrc及iSrc目的基因成功扩增,且测序结果与预期结果一致.免疫印迹分析显示,aSrc及iSrc均能在HEK293T细胞中表达,aSrc自身磷酸化水平显著升高.结论成功构建活化型及失活型n-Src真核表达载体,并能于HEK293T细胞中高效表达.; 杜彩萍侯筱宇; 关键词：真核表达载体

神经型一氧化氮合酶SUMO化在突触可塑性中的作用: 杜彩萍胡斌王梅侯筱宇; 关键词：神经型一氧化氮合酶 PIAS3 突触可塑性长时程增强

脑缺血及Aβ神经毒性条件下PSD-95Y523磷酸化的研究: PSD-95(postsynaptic density-95)是膜结合鸟苷酸激酶家族亚家族中的一员,是一个锚定蛋白,又称为脚手架蛋白,通过串集谷氨酸受体及其相关信号分子,形成信号复合物,在突触后对兴奋性信号转导进行整合。...; 杜彩萍吴桂梅谭然彭艳刘永王伟高锦侯筱宇; 关键词：脑缺血 Β-淀粉样肽兴奋性毒性 PSD-95 酪氨酸磷酸化

海人藻酸受体GluK2亚基复制缺陷型腺病毒的构建: 2014年; 目的:构建海人藻酸(kainate,KA)受体GluK2亚基复制缺陷型腺病毒重组体。方法:以GluK2-pcDNA3.1真核表达载体为模板,经PCR扩增GluK2目的基因,然后将其亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,后将重组的穿梭质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共同电转入BJ5183电穿孔感受态细胞筛选阳性同源重组子。阳性重组体经限制性内切酶PacⅠ消化,经脂质体转染入HEK293细胞进行包装与扩增。接着腺病毒经大量提取纯化后进行滴度测定。结果:GluK2腺病毒具有较强的感染能力(6.75×109ifu/ml)并可表达目的蛋白。结论:GluK2复制缺陷型腺病毒成功构建。GluK2腺病毒可高效感染原代神经元及神经细胞系,为进一步研究其对神经元的调控作用奠定基础。; 杜彩萍徐镇胡书群李婷侯筱宇; 关键词：腺病毒复制缺陷型

PSD-95及其突变体的重组腺病毒对皮质神经元的感染: 2009年; 目的构建PSD-95（postsynaptic density-95）及其突变体PSD-95Y523F和PSD-95Y533F（523和533位酪氨酸分别突变成苯丙氨酸）的复制缺陷型重组腺病毒载体，并检测腺病毒颗粒对体外原代培养皮质神经元的感染能力。方法双酶切将PSD-95及其突变体的基因分别从载体peDNA3．1（＋）亚克隆至穿梭载体pAdTrack—CMV中；电穿孔法将穿梭重组体转化到电转感受态细胞BJ5183中，使其与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组；同源重组体经PacI酶切线性化，脂质体法转入HEK293H细胞中进行病毒包装；病毒颗粒分别感染HEK293T细胞和原代皮质神经元，荧光检测或免疫印迹方法检测目的蛋白的表达水平。结果经酶切电泳鉴定和序列测定证明同源重组体中含序列正确的目的基因；重组腺病毒颗粒感染HEK293T细胞后，免疫印迹显示有较高水平的目的蛋白表达；重组腺病毒具有感染原代皮质神经元的能力，在未成熟神经元（体外培养5—9天）中感染率低，而在成熟神经元（体外培养13天）中感染率较高。结论成功构建了PSD-95、PSD-95Y523F、PSD-95Y533F的重组腺病毒载体；获得具有感染能力的重组腺病毒颗粒，易于感染成熟的神经元。; 徐镇杜彩萍侯筱宇; 关键词：PSD-95 腺病毒载体酪氨酸磷酸化

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杜彩萍

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