倪剑锋
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国科学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达被引量：7
- 2007年
- 将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白为包涵体,表达量占总蛋白的30%以上,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白的分子量为43 kD,与预期的相符。包涵体粗提后,经Ni2+亲和层析柱及Sephacryl S-200HR柱分离复性,纯度可达90%以上,ELISA试验结果证明该融合蛋白保存了与相应抗原的结合活性和IL-2的生物活性。
- 倪剑锋纪剑飞吕安国黄日波韦宇拓吴文芳
- 关键词：单链抗体白细胞介素2融合蛋白
- IL2与抗GD2单链抗体融合蛋白及编码基因和应用
- 本发明涉及生物制药，具体的说是一种新型的IL2－抗GD2单链抗体融合基因在大肠杆菌中的表达和应用；选择经过突变改变其稀有密码子的IL－2，与黑色素瘤单链抗体连接，形成有抗肿瘤作用的融合蛋白具有序列表SEQ ID No：4...
- 吴文芳倪剑锋杨立泉吕安国
- 文献传递
- 杀伤血管内皮生长因子受体1阳性细胞的靶向毒素被引量：4
- 2005年
- 白喉毒素(diphtheria toxin DT) 是棒状白喉杆菌被茁噬菌体感染后分泌的一种外毒素. 它可以阻断真核细胞的蛋白质合成,杀死细胞. 血管内皮生长因子(VEGF) 的R82A,K84A,H86A突变体可以和肿瘤血管上高表达的VEGF受体1 (VEGFR-1) 特异性结合. 首先从白喉杆菌中提取基因组DNA,扩增出白喉毒素C区、T区基因. 并运用点突变技术,制成VEGF的R82A,K84A,H86A突变体. 利用这个可以和肿瘤血管上特异性受体相结合的VEGF的突变体,代替白喉毒素上的受体结合区,制成了针对VEGFR-1的靶向融合毒素——DT391-mVEGF. 以去除了受体结合区的DT391为阴性对照,细胞实验表明,融合毒素对VEGFR-1阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.
- 白向阳倪剑锋吕安国吴文芳牛瑞芳
- 关键词：白喉毒素融合蛋白
- 重组铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL的克隆、表达与活性检测被引量：6
- 2004年
- 目的对铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列进行改造,以获得相对分子质量小、活性强的重组毒素PE38KDEL。方法基于铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列的高GC含量,通过PCR反应和酶切技术,构建重组毒素PE38KDEL基因,并于大肠杆菌表达,用Westernblot分析表达产物。为检测其生物活性,将其与靶向分子IL4突变体cpIL4(13D)融合,构建融合蛋白表达载体,并于大肠杆菌表达,表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,用MTT法检测其对表达IL4受体的黑色素瘤细胞LiBr的细胞毒性。结果成功构建了PE38KDEL基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的21%左右;构建了融合蛋白cpIL4(13D)PE38KDEL,并于大肠杆菌AD494(DE3)中得到高效表达,纯化后融合蛋白的纯度达95%以上,细胞毒实验证明其对黑色素瘤细胞LiBr具有良好的杀伤作用,这说明改造后的PE38KDEL是具有细胞毒效应的。结论重组毒素PE38KDEL的构建,为各种导向药物的构建奠定了基础。
- 崔京霞纪剑飞倪剑锋吴文芳
- 关键词：PE38外毒素A重组毒素GC含量
- 一种白介素－4突变基因IL－4－13及其制备和应用
- 本发明涉及基因重组技术，具体地说是一种白介素－4(IL－4)突变基因IL－4(13D)及其制备和应用，突变基因IL－4(13D)具有序列表SEQ ID NO：1中碱基序列；是以天然的人IL－4基因为基础，利用重叠PCR，...
- 吴文芳崔京霞吕安国倪剑锋
- 文献传递
- 一种白介素－4突变基因IL－4－13121及其制备和应用
- 本发明涉及基因重组技术，具体地说是一种白介素－4突变基因IL－4(13D121E)及其制备和应用，突变基因IL－4(13D121E)具有序列表SEQID NO：1中碱基序列；是以天然的人IL－4基因为基础，利用重叠PCR...
- 吴文芳崔京霞吕安国倪剑锋
- 文献传递
- 抗GD2/抗CD16单链双特异性抗体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2007年
- 利用重叠PCR(overlap-PCR)将抗GD2表面抗原GD2的单链抗体基因m-ScFv和抗CD16的单链抗体基因NM3E2融合在一起,得到新型的单链双特异性抗体基因n-m,双抗的联接肽序列为SerGly4Ser,在肽连的C端引入了6×his以利于纯化。该双特异性抗体基因的序列经测序验证后,连接表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),诱导表达,凝胶成像系统扫描显示表达的外源融合蛋白约占菌体总蛋白的27%。表达蛋白分泌于胞质空间,经超声波破胞后收集上清,经Ni+亲和层析柱分离,纯度可达90%以上。经SDS-PAGE及Westernblotting鉴定表达蛋白的分子量为53KD,与预期的相符。
- 倪剑锋纪剑飞白向阳吕安国黄日波韦宇拓吴文芳
- 关键词：单链抗体单链双特异性抗体
- 双特异性抗体N1M1及N2M2融合蛋白及其编码基因
- 本发明属于制药领域，具体的说是一种新型的抗CD16/抗黑色素瘤双特异性抗体N1M1及N2M2融合蛋白及其编码基因(在大肠杆菌中的表达和应用)。双特异性抗体N1M1融合蛋白，具有序列表SEQ ID No：4中氨基酸序列；其...
- 吴文芳倪剑锋孙静吕安国
- 文献传递
- 抗GD2-抗CD16及IL2-m融合蛋白的构建与活性研究
- 神经节苷脂GD2在正常的组织细胞中很少存在,而在黑色素瘤、小细胞肺癌、等肿瘤细胞表面大量存在.因此能特异性结合神经节苷脂GD2,激活肿瘤附近免疫细胞功能的基因工程融合蛋白将为上述肿瘤的治疗开辟新的途径.实验中采用重叠PC...
- 倪剑锋
- 关键词：重叠PCR单链双特异性抗体白细胞介素-2
- 文献传递
