魏春华
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金黑龙江省农垦总局科技攻关项目大庆市科技局攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2009年
- 以纯化的重组F41菌毛蛋白作为检测抗原,建立了检测产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体的间接ELISA方法。经优化筛选的最佳反应条件:包被抗原浓度为0.26μg/孔,血清稀释度为1∶800,酶标二抗工作浓度为1∶6 000,30 g/L明胶封闭1 h,底物作用时间为10 min。经试验验证,该方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强等特点。用建立的间接ELISA方法与PCR方法进行符合性试验,总符合率为97.4%。表明,该方法可以用于产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体的检测。
- 何晓杰侯喜林余丽芸王桂华刘建奎魏春华
- 关键词：产肠毒素性大肠杆菌间接酶联免疫吸附试验
- 表达ETEC F41的干酪乳杆菌免疫小鼠后的黏膜免疫应答
- 2009年
- 将SPF级Balb/c小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠以pLA-F41/L.casei重组干酪乳杆菌滴鼻免疫,对照组用pLA/L.casei干酪乳杆菌滴鼻免疫,应用间接ELISA测定血清中特异性IgG抗体水平和鼻咽部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便中ETEC F41特异性SIgA抗体水平。分离并计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数目,利用免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平,观察重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答。结果表明重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答。
- 刘建奎魏春华余丽芸何晓杰赵志刚张宁刘双翼
- 关键词：滴鼻免疫肠相关淋巴组织
- 表达产肠毒素性大肠杆菌F41重组干酪乳杆菌免疫小鼠的保护性分析被引量：1
- 2009年
- 【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETECF41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的sIgA和IgG抗体水平,主动免疫组保护率在85%以上,对照组则全部死亡,被动免疫组新生幼鼠的保护率达80%,对照组保护率仅为5%。【结论】细胞表面锚定ETECF41菌毛蛋白的重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei通过滴鼻途径免疫能够有效预防F41型ETEC的感染。
- 刘建奎魏春华侯喜林余丽芸王桂华
- 关键词：滴鼻免疫保护率
- 表达大肠杆菌K99重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠的免疫保护性研究被引量：4
- 2009年
- 利用干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的感染。用PCR方法扩增ETECK99基因,克隆到L.casei细胞表面表达载体pLA中,构建了重组表达载体pLA-K99,并将其电转化至L.casei中,在MRS培养基中培养后,经SDS-PAGE、western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种SPF级BALB/c小鼠。采集血液样品测定小鼠产生抗K99的特异性IgG,收集小鼠肺部、肠道、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生的抗K99的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验,免疫组保护率在83%以上,对照组则全部死亡。
- 魏春华刘建奎侯喜林余丽芸何晓杰
- 关键词：ETECK99口服免疫保护率
- 聚-γ-谷氨酸合成酶复合体A的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2009年
- 以pgsBCA质粒为模板对已知的pgsA进行PCR扩增,得到长度为1 116 bp的片段。将获得的PgsA基因连接到pQE-30表达载体,转化大肠埃希菌后用IPTG诱导其表达,经SDS-PAGE和Westernblot分析,均可见约42 ku目的蛋白带。通过Ni-NTA agarose纯化,获得较高纯度的重组蛋白,经基因定量仪测定其浓度可达1.5 mg/mL;以其免疫新西兰兔获得免疫血清,Western blot分析证实,该重组蛋白具有良好的反应原性,用间接ELISA检测抗体效价可高达1∶12 800。结果表明,成功获得了pgsA的多克隆抗体。
- 刘建奎应明杰魏春华余丽芸何晓杰孙留霞
- 关键词：多克隆抗体间接ELISA
- 表达ETEC F41重组干酪乳杆菌口服及滴鼻免疫效果的比较被引量：7
- 2009年
- 【目的】比较小鼠滴鼻与口服接种ETEC F41重组干酪乳杆菌后,机体所产生的抗ETEC F41的黏膜免疫和系统免疫及免疫保护率的差异,为确定ETEC乳酸菌疫苗免疫程序奠定基础。【方法】将构建的重组质粒pLA-F41电转化入干酪乳杆菌,获得阳性重组菌。重组菌在MRS培养基中进行表达,经Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。SPF级BALB/c小鼠随机分成4组,每组40只,将重组菌以滴鼻和口服途径分别接种2组小鼠,对照组分别接种同剂量的空质粒菌株,免疫4次,初免后不同时间采集血液样品,测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对主动免疫和被动免疫小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的IgG和sIgA抗体水平,口服主动免疫组保护率在90%以上,滴鼻主动免疫组保护率在85%以上,对照组均全部死亡。口服被动免疫组保护率达90%,滴鼻被动免疫组保护率达80%,对照组保护率均为5%。【结论】滴鼻免疫和口服免疫重组干酪乳杆菌后能产生相近的抗ETEC F41的黏膜免疫和系统免疫并能有效预防ETECF41的感染。
- 刘建奎魏春华侯喜林王桂华余丽芸
- 关键词：滴鼻免疫口服免疫干酪乳杆菌保护率
- 重组ETEC k88ac-LT_B干酪乳杆菌在人工消化液中的生存性能被引量：3
- 2009年
- 探讨重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)在人工消化液中的存活能力。将K88ac-LTB基因从表达载体pQE-30克隆到L.casei细胞表面表达载体pLA中,构建了重组表达载体pLA-K88ac-LTB,并将其电转化至L.casei中,在MRS培养基中培养后,Western blotting检测,有约71.2kD蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符且可被抗血清所识别,间接免疫荧光实验及流式细胞结果表明,多聚谷氨酸合成酶A蛋白(pgsA)能够将融合蛋白成功地展示在菌体表面。将重组菌接种于人工模拟的胃肠液中,通过平板计数观察其存活能力。结果表明,重组干酪乳杆菌在人工消化液中均具有良好的存活性能,符合益生菌的基本特征,为实验动物模型的建立奠定了基础。
- 魏春华刘建奎侯喜林王桂华余丽芸
- 关键词：ETEC干酪乳杆菌
