赵春文
- 作品数：11 被引量：19H指数：2
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- 在昆虫细胞中克隆与表达人白细胞介素6被引量：1
- 1993年
- 本文利用DNA合成及PCR技术对人白细胞介素6(hIL-6)cDNA进行转译优化与扩增,并同杆状病毒载体pVL 1393重组构建了pVL·IL-6载体;通过磷酸钙共沉淀法将pVL·IL-6 DNA与野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wtAcMNPV)DNA共转染昆虫细胞Sf9,筛选出表达人IL-6的重组病毒rAc·IL-6,经ELISA定量测定rhIL-6表达水平约为1μg/ml;rhIL-6生物活性经IL-6依赖细胞系7TD1测定为10~6u/ml。
- 赵春文王嘉玺肖定华马贤凯
- 关键词：PCR杆状病毒白细胞介素-6
- 葡激酶基因的分离及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 1998年
- 目的：分离葡激酶基因并使其在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术自溶源性金黄色葡萄球菌ＦＲ６１０株的染色体ＤＮＡ中分离葡激酶编码序列，ＤＮＡ序列分析后，组入高效表达载体ｐＢＶ２２０中，转化至大肠杆菌。结果和结论：分离的葡激酶基因与文献报道相比，第１０８位核苷酸由腺嘌呤核苷酸变异为鸟嘌呤核苷酸，导致了成熟葡激酶第３７位氨基酸由精氨酸变异为甘氨酸。表达结果显示，表达产物占菌体总蛋白的７０％，获得了高效表达菌株。初步纯化表达蛋白，以链激酶为标准品测定其溶栓活性。
- 邹民吉王嘉玺赵春文王利红段聚宝
- 关键词：克隆表达大肠杆菌
- 人白介素6受体配基结合区的表达及功能鉴定
- 1994年
- 选取人白介素6受体(hIL-6R)配基结合区作为克隆和表达的目的基因片段,以pET-3b为表达载体构建并筛选出两个重组子pET-6R(B)和pET-6R(B)4,分别编码28kD的IL-6R配基结合区和53kD的配基结合区的串联体。重组子分别转化相应受体菌,经IPTG诱导两种目的蛋白28kD的rIL6R-28和53kD的rIL6R-53分别占菌体总蛋白的50％和30％。表达产物主要以包涵体形式存在,纯化并复性后均能增强IL-6对IL-6依赖株7TD1细胞的生长刺激作用。ELISA结果也表明rIL6R-28和rIL6R-53都具有明显的配基结合活性。
- 段聚宝王嘉玺韩家淮彭善云邹民吉苗继红赵春文马贤凯
- 关键词：白细胞介素6糖蛋白无性系受体
- 抗SK单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定
- 1998年
- 链激酶（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ，ＳＫ）为β－溶血性链球菌产生的血纤维蛋白溶酶原最有效的活化剂之一，具有半衰期较长、来源丰富、价格便宜及疗效与ｔ－ＰＡ相当的显著特点，因而显示出良好的临床应用前景。在研制和应用重组ＳＫ的过程中，ＳＫ的鉴定、纯化和临床...
- 王利红王嘉玺周俐梅赵春文段聚宝邹民吉
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞系
- 全文增补中
- 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
- 1995年
- 在大肠杆菌中,利用新构建的含T7g-10L RBS以及λ-PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N端8个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致。在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95％以上的纯度。结果表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。
- 韩保光孟莉邹民吉凌世淦宋晓国赵春文段聚宝王嘉玺马贤凯
- 关键词：HIV-1核心蛋白纯化
- 人白细胞介素18的基因克隆与表达被引量：2
- 1997年
- 人白细胞介素１８（ＩＬ－１８）是新近发现的细胞因子之一．研究表明它参与Ｔ１辅助细胞介导的细胞免疫．利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人外周血细胞扩增得到了ＩＬ－１８的ｃＤＮＡ并测定其核酸序列．利用基因重组技术构建ＩＬ－１８的表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达．这为以后进一步研究ＩＬ－１８的功能奠定了基础．
- 陈淑娟王嘉玺邹民吉王利红赵春文彭善云贾兴旺
- 关键词：白细胞介素18基因克隆基因表达
- 肥胖基因的分离及其在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 2000年
- 利用PCR技术自外周血白细胞染色体DNA中扩增获取了肥胖基因(ob基因)的外显子2和3序列.经过拼接,获得了全长的ob基因编码序列.测序结果表明,获得的序列与文献报道完全一致.利用PCR技术扩增出成熟蛋白的编码序列,克隆至表达载体pBV220中获得了表达菌株,并对表达产物进行了初步纯化,为进一步研究ob基因产物的功能与应用奠定了基础.
- 邹民吉王嘉玺王利红段聚宝赵春文蔡欣
- 关键词：肥胖基因PCR大肠杆菌基因表达
- 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型Gag前体蛋白片段在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
- 1996年
- 利用新型原核表达载体pDOG,在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因片段。表达载体利用λPR启动子以及T7g-10的RBS来有效起始表达基因的翻译。表达片段PG1包括p17C-端13个氨基酸、整个p24以及p15N-端74个氨基酸。与PG1相比,PG2片段不含有p17序列,并缺失了p24N-端77个氨基酸。两者的表达量均占总菌体蛋白的20％以上。重组蛋白以包涵体形式存在,在提取包涵体后,经过一步离子柱层析,可以纯化到90％以上的纯度。PG1可被一株抗p24的单抗特异识别,而PG2则不能。纯化的重组蛋白能与HIV-1阳性血清发生很强的特异反应,可以用于HIV-1抗体检测中。
- 韩保光孟莉邹民吉凌世淦宋晓国赵春文段聚宝王嘉玺马贤凯
- 关键词：纯化
- 链激酶基因的分离和其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化
- 1996年
- 从化脓性链球菌的染色体ＤＮＡ分离得到的目的基因片段定向插入载体ｐＢＶ２２０中，获得有目的基因插入的重组质粒ｐＢＶＳＫ。双脱氧链终止法手工测序和Ｂｅｃｋｍａｎ自动测序仪分析ｒＳＫ基因的全长序列，测序结果表明我们所获得的ｒＳＫ基因与文献报道的基本一致。重组质粒ｐＢＶＳＫ转化受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α株，温敏诱导后表达一个分子量约４７ｋＤａ的特异蛋白，其表达量为６０％。表达产物以包涵体的形式存在，包涵体经过洗涤、溶解和纯化后，最终纯度达到９５％以上。复性的重组蛋白用体外血块溶解法测定生物活性，结果表明我们所获得的ｒＳＫ蛋白具有较好的溶解血块的活性，其比活性为１３×１０５ｕ／ｍｇ。
- 周俐梅王嘉玺邹民吉段聚宝赵春文
- 关键词：链激酶基因表达大肠杆菌血纤维蛋白溶酶原
- 人白介素6受体拮抗剂的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 1996年
- 白介素6的过高表达往往与一些疾病的发生和发展有关,如一些自身免疫性疾病、增生性疾病和某些恶性肿瘤。这种情况下就有必要拮抗或抑制IL-6的作用以达到治疗的目的。一般来说,细胞因子的可溶性受体作为细胞因子结合蛋白(CBPs)可以拮抗相应因子的作用,但IL-6的可溶性受体(sIL-6R)却不同,它与IL-6形成的复合物仍然能与信号转导子gp130结合,介导IL-6的效应,起到IL-6激动剂的作用,因而有必要构建具拮抗效应sIL-6R的突变体分子,以用于IL-6相关疾病的治疗研究。
- 段聚宝王嘉玺邹民吉赵春文王利红周莉梅彭善云
- 关键词：受体拮抗剂肠杆菌基础医学研究可溶性受体IL-6
