王利红
- 作品数：32 被引量：104H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 逆转录病毒载体介导IL－2导入MCF－7细胞基因表达及对LAK细胞杀伤的敏感性研究
- 1995年
- 用逆转录病毒载体介导人ＩＬ－２基因导入人乳腺癌细胞系ＭＣＦ－７并获得表达。原位杂交结果证实，转染的ＭＣＦ－７细胞中有ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达，用ＩＬ－２依赖细胞系ＣＴＬＬ－２以ＭＴＴ比色法测得ＭＣＦ－７细胞培养上清液中有ＩＬ－２活性，其活性平均为１０ＩＵ／１０￣６细胞。转导后的ＭＣＦ－７细胞对ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性降低。
- 李秀森郭宁王利红施巍江飞子王嘉玺毛宁
- 关键词：杀伤细胞基因表达
- 一种重组全长人脑红素、其生产方法及其应用
- 本发明公开了一种细菌表达生产重组全长人脑红素rhNGB的方法以及用该方法得到的重组全长人脑红素rhNGB，该方法包括将工程菌接种培养、细菌反复冻融、菌体裂解、包涵体裂解、层析纯化和目的蛋白复性等步骤。本发明是在构建人脑红...
- 张成岗王利红高艳王春丽
- 文献传递
- 蛋白质组研究中双向聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱的计算机分析被引量：4
- 1998年
- 目的：建立蛋白质组研究中双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＰＡＧＥ）图谱的计算机分析方法。方法：利用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ２－Ｄ分析软件。结果：我们对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２蛋白质组的２－ＤＰＡＧＥ图谱进行了计算机分析，识别了１０００以上的蛋白斑点（其中肉眼可视斑点为４００左右），同时获得了所识别斑点的等电点、相对分子质量、斑点面积、Ｄ值、Ｄ％、斑点体积及相对体积等参数。结论：建立了蛋白质组研究中图像分析体系，为今后蛋白质组２－ＤＰＡＧＥ数据的分析与比较、数据库的建立、蛋白质的功能预测以及大规模斑点的模式识别奠定了基础。
- 胡志远万晶宏王利红钱小红钱小红
- 关键词：蛋白质组PAGEHEPG2细胞
- 血管生成素与绿色荧光蛋白融合基因的构建、表达及生物活性被引量：6
- 2002年
- 通过RT PCR的方法从人外周血白细胞扩增血管生成素 (Ang)cDNA .在计算机分子结构模建的基础上 ,通过柔性连接臂构建了Ang与Gfp融合基因 ,并在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达 .重组蛋白占菌体总蛋白的 32 %.融合蛋白经初步纯化后 ,在紫外线激发下可见明显的绿色荧光 ,同时能够显著地促进鸡胚尿囊膜毛细血管的新生 ,而且所获融合蛋白在体外具有促进人脐静脉血管内皮细胞增殖的作用 .这种双功能融合蛋白的表达为阐明Ang的核转位过程奠定了基础 。
- 马百坤徐东刚王嘉玺彭善云李莉王利红邹民吉
- 关键词：血管生成素绿色荧光蛋白融合基因生物活性
- 人白介素17基因的分离及其在大肠杆菌中的表达
- 1997年
- 用ＲＴ－ＰＣＲ方法从活化的人外周血淋巴细胞中分离了人白介素１７（ｈＩＬ－１７）基因，序列分析结果表明与文献报道的完全相符。以质粒ｐＢＶ２２０为表达载体，在大肠杆菌中高效表达了ｈＩＬ－１７基因，重组蛋白以包涵体的形式存在，约占菌体总蛋白的量４０％。
- 周俐梅王嘉玺周泾王利红蔡欣段聚宝
- 关键词：白细胞介素17基因表达大肠杆菌
- 利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能
- 2006年
- 目的:采用碱性磷酸酶(AP4)标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征,并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义。方法:将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4,成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白,并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定。结果:确认了netrin-4的神经突起导向功能。进一步通过对AP标签进行检测,发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合,而EGFL不结合,说明神经元表面含有netrin-4受体或结合位点,且可能通过LNT和NCT结构域起作用。结论:netrin-4具有明确的神经突起导向功能,在神经元表面含有结合位点,同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势。
- 秦树桐高艳王利红周仁平张成岗
- 关键词：碱性磷酸酶基因神经元
- 人白介素6受体功能区片段在E．coli中的表达
- 1995年
- 通过ＤＮＡ体外重组技术，以ｐＥＴ－３ｂ为表达载体，构建了重组表达质粒ｐＥＴ－６Ｒ（Ｂ）和ＰＥＴ－６Ｒ（Ｂ）４，分别编码２８ｋＤ的ｈＩＬ－６Ｒ配基结合区片段及其５３ｋＤ的二联体蛋白，并为酶切分析和ＤＮＡ序列分析所证实。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，含有重组表达质粒的菌株可分别表达出２８ｋＤ的蛋白ｒＩＬ６Ｒ－２８和５３ｋＤ的ｒＩＬ６Ｒ－５３。重组蛋白分别占菌体总蛋白的４５％和２９％左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＬ－６Ｒ的抗原性。
- 段聚宝王嘉玺邹民吉王利红马贤凯
- 关键词：白细胞介素6受体大肠杆菌
- 重组人源脑红蛋白的高效表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2009年
- 脑红蛋白(euroglobin,NGB)是新发现的主要表达于脊椎动物神经元及视网膜中的第三类携氧珠蛋白。已有诸多报道认为脑红蛋白在缺氧缺血性脑损伤的神经保护过程中,作为活性氧簇(ROS)的清除剂或缺氧信号的感受器起重要作用,但其神经保护作用的具体机制不明。显然,实现该蛋白的制备对于研究其功能具有重要作用。基于此,通过RT-PCR从人胎脑中扩增出脑红蛋白cDNA并克隆到原核表达载体pBV220,通过测序鉴定正确后转化至大肠杆菌HB101中诱导表达,表达产物超声破碎后经凝胶过滤柱Sephacryl S-200和阴离子交换柱QSepharose F纯化,最后通过SephadexG-25脱盐。经15%SDS-PAGE和Western blot检测及质谱和蛋白序列分析鉴定制备的蛋白样品为脑红蛋白,表达菌体、超声后上清及纯化蛋白溶液均呈现红色,说明具有珠蛋白的典型活性。采用两步法实现了脑红蛋白高效纯化,且确保了其具有明显活性,为进一步揭示脑红蛋白神经保护作用的功能及机制等奠定了重要基础。
- 吴永红王利红高艳张成岗
- 关键词：脑红蛋白原核表达蛋白纯化蛋白鉴定
- 急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中TGF-β1及其受体TGF-βR1的表达水平:与单纯伤口愈合的定量对比研究被引量：3
- 2003年
- 为研究TGF-β1及其受体TGF-βR1在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达水平及对溃疡形成、发展、愈合的影响,我们采用雌性Wistar大鼠,以60Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,并以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型,观察病变55天,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平。研究发现,照后14天照射野内开始出现皮肤溃疡,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平均较正常皮肤组织明显增强,与单纯伤口组比较,溃疡床的TGF-β1及TGF-βR1阳性细胞数量明显减少,阳性强度减弱不明显。表明放射性皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的表达水平降低可能与溃疡发生、发展及难愈合的分子机制相关。
- 谷庆阳王德文杨志祥高亚兵刘杰陈肖华王利红崔玉芳王晓民
- 关键词：放射性皮肤溃疡TGF-Β1TGF-ΒR1伤口愈合
- β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
- 余利红高艳王利红韩洪彦孙志贤张成岗
- 关键词：合成肽抗原表位抗体制备抗体鉴定
