刘俊霞
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- CD34分子的胞外结构域cDNA分离与表达
- 2003年
- CD34分子是一种重要的造血干 /祖细胞表面标志 ,广泛用于造血干 /祖细胞的鉴定和分选。由于CD34分子具有受体样结构并能传递细胞同型聚集的信号 ,故它是一种信号分子 ,但其在造血系统的天然配体与确切的生理功能至今仍不明确。研究中我们分离了CD34分子的细胞外结构域cDNA ,并进行了原核融合表达及纯化。DNA序列分析和竞争结合抑制实验证明我们获得了纯化的CD34分子的细胞外结构域的重组蛋白 ,可作为CD34可溶性受体 。
- 孟磊刘俊霞贾海蓉宋增璇
- 关键词：胞外结构域CDNA原核表达
- 噬菌体展示抗体微型文库的构建被引量：1
- 2006年
- 用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。
- 黄跃龙李侠许静刘俊霞宋增璇卢光琇
- 关键词：CD34单链抗体
- 用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
- 2005年
- 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。
- 许静李侠刘俊霞何一心韩忠朝宋增璇
- 关键词：抗体筛选表面分子相互作用CDNA片段CD34^+人胎肝
- CD3/CD19双特异性单克隆抗体的制备、鉴定及其再导向的研究被引量：3
- 1998年
- 目的制备ＣＤ３／ＣＤ１９双特异性单克隆抗体（ＢｓＡｂ）并研究其生物学作用。方法采用杂交－杂交瘤技术制备ＢｓＡｂ，以双亚类ＥＬＩＳＡ和细胞结合试验确证ＢｓＡｂ的存在，再用５１Ｃｒ释放试验证实ＢｓＡｂ的再导向细胞毒效应。结果获得３株ＣＤ３／ＣＤ１９四源杂交瘤细胞，其中１株已成为稳定分泌ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ的四源杂交瘤细胞株。细胞毒试验表明ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ上清、ＣＤ３／ＣＤ１９纯化抗体以及ＣＤ３／ＣＤ１９化学交联ＢｓＡｂ都能增强ＣＤ３激活杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）对Ｎａｌｍ－６靶细胞的杀伤作用（Ｐ＜０．０５～０．００１）。结论ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ具有显著的再导向激活Ｔ细胞杀伤特异肿瘤靶细胞的功能，提示该ＢｓＡｂ有临床应用的潜在价值。
- 陈晓钎沈德诚孙同哲白金芬黄丽华佘鸣山芝芳李洪钊张金香刘俊霞郭桂庆周立
- 关键词：双特异性单克隆抗体CD3CD19
- 不完全佐剂和降植烷诱发小鼠单抗腹水的比较被引量：3
- 1994年
- 不完全佐剂和降植烷诱发小鼠单抗腹水的比较孙同哲，刘俊霞，白金芬，周立，郭桂庆，张金香（中国医学科学院血液学研究所天津３０００２０）制备小鼠腹水，生产单克隆抗体、降植烷（商品名Ｐｒｉｓｔａｎｅ．化学名２．６．１０．１４－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－ｐｅｎｔ...
- 孙同哲刘俊霞白金芬周立郭桂庆张金香
- 关键词：降植烷单克隆抗体佐剂腹水
- 荧光抗体的制备和应用研究
- ＜正＞目的研制具有激发荧光的抗体及其对造血细胞群的识别。方法采用基因重组技术,把能识别KG1a细胞的抗体可变区基因（scFv-C193基因）和具有激发荧光的绿色荧光蛋白基因拼接, 构建一个能在原核细胞中诱导表达的基因重组...
- 刘俊霞许静宋增璇
- 文献传递
- 脐血和某些血液病患者血清中IL_3／IL_3R相关分子──HI_（98）水平的检测及其意义
- 1994年
- 本文应用酶联免疫吸附方法，研究了一个与ＩＬ３／ＩＬ３受体（Ｒ）紧密相关的分子－ＨＩ９８抗原在正常人外周血、脐血及一些血液病患者血清中的水平，结果发现脐血、慢性粒细胞白血病和杂合性急性白血病患者血清中可溶性ＨＩ９８明显增高，且与疾病的轻重缓急、细胞的分化程度、细胞膜ＨＩ９８＋细胞数量均无关。分析发现与造血干／祖细胞有关。
- 汤美华陈璋官奇杨希峰周宇刘俊霞张金香沈德诚
- 关键词：可溶性抗原血液病脐血
- 单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的制备被引量：11
- 2003年
- 目的 :制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白。方法 :把碱性磷酸酶编码区插入pSTE2 8E5质粒DNA ,用scFvC6 6的重链和轻链可变区DNA取代scFv 8E5的重链和轻链可变区DNA ,构成表达载体pSTE2 C6 6 Ap在大肠杆菌中表达 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析产物活性。结果 :获得一个分子量为 75kD的scFvC6 6 Ap融合蛋白 ,可结合来自KG1a细胞裂解物中的一个分子量约 6 0kD的蛋白质带 ,其结合功能可通过其碱性磷酸酶活性直接测定。结论 :建立了一个用大肠杆菌制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白的方法 ,它可能取代常规的碱性磷酸酶标记方法而用于免疫检测。
- 许静刘俊霞李侠宋增璇
- 关键词：单链抗体碱性磷酸酶融合蛋白
- 神经钙粘连素胞外结构域的分离和表达
- 2006年
- 目的:分离和表达神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)胞外结构域cDNA并观察其表达蛋白质的免疫原性。方法:从胚胎肝脏和骨髓中分离出CD34+细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增N-cad胞外结构域cDNA,插入表达载体pOPE101-215,重组载体pOPE-N-cad,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以所表达蛋白免疫小鼠。结果:分离片段符合预期大小,DNA测序正确。重组质粒转化宿主菌XL1-Blue后,经IPTG诱导表达出了约70kD目的蛋白。免疫5次后,小鼠血清中可检出抗N-cad抗体。结论:CD34+细胞表达N-cad基因,其胞外结构域cDNA表达产物具有较好的免疫原性。
- 黄跃龙许静李侠刘俊霞卢光琇宋增璇
- 关键词：钙粘着糖蛋白类基因表达
- 特异性抗细胞表面分子单链抗体的分离和鉴定
- 2007年
- 目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用间接免疫荧光法鉴别其细胞结合特异性。对具有不同细胞结合特异性的克隆进行DNA序列分析,用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹鉴别抗原分子量。结果:间接免疫荧光结果显示,64个阳性克隆分别识别不同的细胞系,分属3种细胞结合谱,DNA序列测定结果证明C95、H1两个克隆具有独特的一级结构,利用Westernblot成功测定它们特异性识别KG1a细胞膜蛋白的表观分子量分别为34kD/22kD。结论:成功建立了分离和鉴定抗细胞表面分子phage-scFv单克隆的方法,并从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离出2个抗造血干/祖细胞的特异性克隆。
- 许静吴立华徐洁刘俊霞孟磊何一心宋增璇
- 关键词：噬菌体展示表面分子单链抗体
