许静
- 作品数：33 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠造血系统Fbxw11的克隆及逆转录病毒表达载体的构建
- ＜正＞目的:泛素化修饰在调节真核细胞生存、信号和功能中起重要作用,细胞浆中泛素化系统是由E1（Ub-激活）,E2（Ub-聚集）和E3（Ub-连接）酶形成的多酶体系,E3中的SCF复合体由Skp1,cullin-1和F-b...
- 曹智攀田晨许静袁卫平郑国光
- 文献传递
- 单链抗体分子与链亲和素融合蛋白的制备<英文>被引量：4
- 1999年
- 研究了抗人纤维蛋白单链抗体分子scFV-8E5与链亲和素融合蛋白的制备。链亲和素拼接在scFV-8E5 cDNA的3’端,制备的融合蛋白单体分子量约45kD。表达产物少数为周质间可溶型蛋白,多数为包涵体。无论是可溶型的蛋白产物或从包涵体中回收并复性的蛋白产物均有结合人纤维蛋白和生物素的功能。这个双特异性融合蛋白的成功制备证明了在scFV-8E5的3’端拼接其它效应分子的可行性。
- 许静李文平隋建华宋增璇
- 关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白抗纤维蛋白
- 噬菌体展示抗体微型文库的构建被引量：1
- 2006年
- 用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。
- 黄跃龙李侠许静刘俊霞宋增璇卢光琇
- 关键词：CD34单链抗体
- RNA腺苷脱氨酶在MLL-AF9诱导的小鼠急性髓系白血病发病中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的 建立敲除RNA腺苷脱氨酶1（ADAR1）的小鼠MLL-AF9融合基因急性髓系白血病（AML）模型,初步探讨ADAR1对AML发病的影响.方法 采用免疫磁珠法富集介导雌激素受体-重组酶Cre（ER-Cre）的ADAR1lox/lox及其对照ADAR1lox/lox小鼠骨髓Lineage-（Lin-）细胞,用携带MSCV-MLL/AF9-IRES-GFP的逆转录病毒感染上述Lin-细胞,流式细胞术检测感染效率,移植相同数量细胞至致死剂量和半致死剂量照射受体小鼠中,建立MLL-AF9诱导的AML模型.移植48 h后诱导ADAR1敲除,体内实验分为实验组（ER-Cre;ADAR1lox/lox＋他莫昔芬）和对照组（①ER-Cre;ADAR1lox/lox＋空载体、②ADAR1lox/lox＋他莫昔芬、③ADAR1lox/lox＋空载体）,第10、15、20天分别检测小鼠外周血GFP＋细胞比例,观察各组小鼠的存活情况.体外实验分组同上,将他莫昔芬改为4-羟基他莫昔芬,观察各组AML细胞并检测其凋亡情况.结果 成功建立敲除ADAR1的MLL-AF9融合基因AML小鼠模型.与对照组比较,体内实验中实验组AML小鼠在各时间点外周血GFP＋细胞比例均降低,存活时间明显延长,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;体外实验中实验组细胞总数、GFP＋细胞比例均降低,Annexin Ⅴ＋7-AAD＋和Annexin Ⅴ＋细胞比例均升高,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 敲除ADAR1可减缓AML的发病,增加AML细胞凋亡.ADAR1在MLL-AF9诱导的AML发生和维持过程中起关键作用.
- 彭路芸杨鑫张英驰胡甜园王伟丽汪晓敏许静程涛袁卫平高瀛岱
- 关键词：腺苷脱氨酶重组融合蛋白质类白血病髓样急性基因敲除技术小鼠
- 红细胞生成刺激素(EPO)的纯化
- 1992年
- 本文用中空纤维柱超滤浓缩尿,再经离子交换层析、聚焦层析、凝胶过滤和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-层析等四步从15L再生障碍性贫血患者尿中获得约2mg EPO制品。比活性达10 300U/mg蛋白。该制品在分析型PAGE中呈一条区带。
- 蔡辉国马双许静汤晓培王爱萍
- 关键词：红细胞纯化
- 急性髓系白血病环境对正常造血干/祖细胞的影响
- 程辉袁卫平程涛刘延风郝莎李儒东庞雅坤马士卉师迎旭许静郑国光
- 用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
- 2005年
- 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。
- 许静李侠刘俊霞何一心韩忠朝宋增璇
- 关键词：抗体筛选表面分子相互作用CD34^+基因数据库人胎肝
- 一种人FLT3配基同源异型蛋白在组织中的分布被引量：1
- 1999年
- 目的研究人ＦＬＴ３配基膜外区缺失１３９ｂｐ的同源异型蛋白在组织中的分布特点。方法采用聚合酶链或逆转录聚合酶链反应法对ＦＬＴ３配基在人肝脏、脑、骨髓、肌肉、肾脏、正常人外周血及４种白血病细胞系中的分布进行了研究，并利用ＤＮＡ测序法鉴定ＰＣＲ产物。结果除脑中未见ＦＬＴ３配基表达外，在肝脏、肌肉、骨髓、肾脏、胎肝、正常人外周血细胞及白血病细胞系中均可检测到ＦＬＴ３配基，而膜外区缺失１３９ｂｐ的ＦＬＴ３配基同源异型蛋白只分布于骨髓、胎肝中。结论ＦＬＴ３配基膜外区缺失１３９ｂｐ的同源异型蛋白分布于造血组织中，可能与造血调控有关。
- 李会良蔡英林许静李文平马正宇罗寿青郭亚林
- 关键词：FLT3配基造血组织
- 真性红细胞增多症诱导性多能干细胞株的建立被引量：2
- 2015年
- 诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cell,i PSC)技术在疾病研究和临床应用上具有广阔的前景。JAK2V617F是骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN),如真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)患者携带的一种重要突变。该研究采用非整合型质粒重编程携带JAK2V617F突变的PV患者外周血来源的单个核细胞,诱导生成携带JAK2V617F突变的i PSC。结果表明,通过这种途径形成的i PSC系可稳定传代,多能性基因表达水平与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)类似,可稳定地在体内分化形成三胚层结构并携带不同负荷的JAK2V617F突变。这为研究JAK2V617F在PV中的发病机制、药物筛选开发及基因靶向治疗提供了一个重要的实验模型。
- 汪文君邢文白洁刘淑平许静纪光臻袁卫平张孝兵程涛周圆杨逢春
- 关键词：诱导多能干细胞重编程真性红细胞增多症JAK2V617F
- 抗人纤维蛋白单链抗体重链可变区的人源化
- 1999年
- 目的人源化抗人纤维蛋白单链抗体的重链，降低人抗鼠抗体反应。方法从基因文库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体重链（ＶＨ－８Ｅ５）同源性７１．８％的人源免疫球蛋白ＨＵＭＨＣＨ１０９重链（ＶＨ）序列，作为人源化改造ＶＨ－８Ｅ５的框架。人工合成人源化ＶＨ－８Ｅ５片段，用连接酶连接成完整的人源化ＶＨ－８Ｅ５，构建表达载体ｐＯＰＥ１０１－ＶＨ－８Ｅ５。转化ＪＭ１０９后用异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导表达。结果经聚丙烯酰胺电泳和ＥＬＩＳＡ证明表达产物相对分子质量３０×１０３左右，有特异性识别和结合人纤维蛋白能力，是亲本抗体ＳｃＦｖ－８Ｅ５活性的４／５左右。人源化ＳｃＦｖ－８Ｅ５表达产量为转化菌总蛋白的１１．２％。结论人源化ＶＨ－８Ｅ５仍具有特异性识别人纤维蛋白的活性。
- 李文平蔡英林许静许静李彬李彬
- 关键词：单链抗体免疫原性人源化
