高尚锋
- 作品数：14 被引量：19H指数：3
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 突触后密度蛋白-95在大鼠脊髓发育过程中的表达变化被引量：8
- 2007年
- 目的:探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在大鼠脊髓发育过程中的表达变化以及细胞定位。方法:采用实时定量PCR(Real-Time PCR)和Western blot测定发育不同时期PSD-95 mRNA及蛋白水平的表达变化。采用免疫荧光染色显示PSD-95在发育脊髓中的细胞定位。结果:大鼠脊髓发育过程中PSD-95 mRNA及其蛋白水平从生后1d开始逐渐升高,在生后1周达高锋,成年后维持在一定的生理水平。免疫荧光双标证实PSD-95在生后发育早期主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN和突触的标记物synapsin存在共定位;成年后广泛分布于脊髓前角、后角以及白质,分别与NeuN和synapsin以及小胶质细胞的标记物OX-42共定位。结论:大鼠脊髓发育过程中PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,在生后发育早期主要表达在前角运动神经元和后角感觉神经元,提示PSD-95参与了神经元的发育和成熟。
- 沈爱国高尚锋程纯赵剑陈梦玲李欣牛淑琼
- 关键词：脊髓发育NMDA受体
- p27^(kip1)和Skp2在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化被引量：3
- 2007年
- 为了探讨损伤后周围神经p27kip1和S期激酶相关蛋白2(Skp2)的定位表达和变化,本实验将成年SD大鼠随机分为正常对照组、夹伤组和切断组,运用Western blot结合免疫组织化学及免疫荧光双标,在大鼠坐骨神经损伤时,对p27kip1和Skp2表达的影响进行了研究。结果表明:(1)坐骨神经夹伤后,p27kip1蛋白表达先逐渐下降,后又逐渐上升;坐骨神经切断后,远侧段p27kip1蛋白表达持续下降,而近侧段p27kip1蛋白表达在切断后6h明显下降,后又逐渐升高至正常水平,而Skp2表达变化与之相反;(2)免疫组织化学染色结果显示,坐骨神经切断后1w,远侧段从断端到末端,p27kip1阳性信号逐渐增加,而Skp2阳性信号逐渐减弱;(3)免疫荧光双标显示,正常和损伤坐骨神经的雪旺氏细胞中都有p27kip1和Skp2表达。以上结果提示:周围神经损伤后影响雪旺氏细胞中p27kip1和Skp2的表达变化,为进一步研究它们在周围神经损伤和修复中的作用机制奠定基础。
- 史淑贤程纯陈梦玲秦婧高尚锋沈爱国
- 关键词：P27^KIP1SKP2雪旺氏细胞坐骨神经BLOT
- 大鼠坐骨神经切断后Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达变化
- 2007年
- 目的探讨大鼠坐骨神经切断后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在神经中的表达变化及其意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经切断模型。通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经切断后SSeCKS表达的时空变化。结果Western blotting显示,大鼠坐骨神经切断后,近端SSeCKS的表达逐步升高,伤后2d达到高峰,之后逐渐下降。远端SSeCKS表达于12h达到高峰,之后呈下降趋势。免疫组织化学方法结果表明,SSeCKS在神经断端处高表达,成簇状聚集;在远离断端处表达明显降低,分布亦较为均一。免疫荧光双标记结果显示,SSeCKS与S100、NF200及GAP43有部分共定位。结论大鼠坐骨神经切断后,可以引起SSeCKS的表达变化,其可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导,并与损伤后神经的再生及功能修复有关。
- 沈爱国秦婧陈莉刘海鸥牛淑琼高尚锋史淑贤
- 关键词：坐骨神经切断免疫组织化学免疫印迹法
- 雌鼠母爱剥夺模型在应激反应中的特征被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨母爱剥夺对雌鼠成年后下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamo-pituitary-adrenal axis,HPA)轴活性和急性应激反应,以及下丘脑室旁核中性激素受体表达水平的影响。方法:建立雌性Sprague-Dawley大鼠母爱剥夺模型。成年后在其动情周期的不同阶段给予急性足底电击刺激。采用放射免疫法测定血浆中雌二醇和睾酮及促肾上腺皮质激素浓度,酶联免疫法测定血浆皮质酮浓度,免疫组织化学法检测下丘脑中雄激素和雌激素受体表达。结果:母爱剥夺后雌鼠血浆促肾上腺皮质激素和皮质酮水平在动情前期明显下降(P=0.012和P=0.019),下丘脑室旁核中雄激素受体在动情期表达下调(P=0.008)。结论:新生鼠母爱剥夺可以降低雌鼠HPA轴基础活性,该变化与外周性激素水平波动相关。SD雌性大鼠下丘脑内雄激素比雌激素对于CRH活性的调节作用更为显著。
- 孙博高尚锋阮玲娟包爱民
- 关键词：下丘脑-垂体-肾上腺轴
- 突触后密度蛋白95在大鼠脊髓损伤后的表达变化被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨突触后密度蛋白95(PSD-95)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况。方法:使用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用实时定量PCR和Western印迹法测定损伤后各时间段PSD-95 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫荧光双标方法显示PSD-95在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变。结果:PSD-95 mRNA及其蛋白水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,mRNA在5 d降到最低水平,蛋白水平在7 d最低。PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)在SCI后8 h存在着共定位关系,但在SCI后7d,PSD-95除与nNOS部分共定位之外,还高表达于损伤局部活化中性粒细胞和巨噬细胞。结论:SCI后PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且损伤后高表达在活化的炎症细胞,提示PSD-95参与了脊髓继发性损伤过程。
- 沈爱国高尚锋程纯赵剑陈梦玲牛淑琼李欣郭志琴
- 关键词：脊髓损伤神经型一氧化氮合酶
- 突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达被引量：1
- 2007年
- 为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-timePCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况。结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高。免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显。本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程。
- 高尚锋程纯陈梦玲史淑贤秦婧沈爱国
- 关键词：坐骨神经神经型一氧化氮合酶NMDA受体
- 突触后密度蛋白-93在大鼠脊髓损伤后的表达变化
- 2007年
- 目的探讨突触后密度蛋白-93(PSD-93)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况。方法使用改良Allen法制备大鼠急性脊髓损伤模型,致大鼠脊髓(T9、T10)重度撞击伤。采用实时定量PCR(Real-time PCR)和Western blotting测定损伤后各时间段PSD-93 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫荧光双标方法检测PSD-93在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变。结果PSD-93 mRNA水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,在3d降到最低水平;蛋白水平则在SCI后显著上调,于1d达高峰。免疫荧光双标显示,PSD-93在SCI后除与神经型一氧化氮合酶(nNOS)存在着共定位之外,还高表达于损伤局部活化的小胶质细胞和星形胶质细胞。结论脊髓损伤后PSD-93在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与nNOS、活化的胶质细胞存在共定位,提示PSD-93参与了脊髓继发性损伤过程。
- 高尚锋程纯陈梦玲赵剑李欣牛淑琼严斌沈爱国
- 关键词：脊髓损伤神经型一氧化氮合酶实时定量PCR免疫印迹法免疫荧光
- 实时荧光定量聚合酶链反应突触后密度蛋白93基因TaqMan探针的制备被引量：1
- 2006年
- 目的:制备实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)突触后密度蛋白93(PSD93)基因TaqM an探针以进一步研究PSD93表达情况。方法:采用RT-PCR法,从生后1天的SD大鼠大脑组织mRNA中扩增PSD93基因部分CDS区片段,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定及序列测定,采用TaqM an探针,以重组质粒为模板绘制标准曲线。结果:RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度113bp相符,DNA序列测序的结果与GenBank提供的已知序列(RNU50717)比较,所克隆的PSD93基因片段与其中的113bp完全相同,与PSD93基因100%同源。以重组质粒为模板绘制标准曲线,相关系数r大于0.99,反应效率为0.95,各点变异系数小于20%。结论:采用RT-PCR和T载体技术成功获得FQ-PCR PSD93基因TaqM an探针。
- 缪爱芳陈梦玲沈爱国严美娟高尚锋程纯
- 关键词：聚合酶链反应实时荧光定量TAQMAN探针
- p27^(kip1)和Skp2在大鼠坐骨神经夹伤后脊髓中的表达变化被引量：1
- 2007年
- 目的:研究p27^(kip1)和Skp2在正常和坐骨神经夹伤后大鼠脊髓中的表达变化。方法:Westem印迹法,免疫组织化学,免疫荧光双标。结果:Western印迹结果显示坐骨神经夹伤后,脊髓中p27^(kip1)表达下降后又有所恢复,并且p27^(kip1)和Skp2在脊髓中的表达变化呈负相关。免疫组织化学及免疫荧光双标显示,p27^(kip1)和Skp2在正常和损伤后的脊髓神经元和胶质细胞中都有表达。坐骨神经夹伤后p27^(kip1)和Skp2在脊髓腹角阳性细胞数目变化呈负相关。结论:坐骨神经损伤后p27^(kip1)。和Skp2在脊髓腹角神经元及其周围的胶质细胞表达变化相关,对研究脊髓损伤和修复的分子机制有重要意义。
- 史淑贤程纯陈梦玲秦婧高尚锋沈爱国
- 关键词：P27KIP1SKP2脊髓坐骨神经
- 神经递质GABA和NO在抑郁症患者和应激模型中的病理意义
- 第一部分：GABA能神经传递紊乱与抑郁症患者HPA轴过度激活的关系 目的：下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus, PVN)中的促肾上腺皮质激素释放激素(corticotr...
- 高尚锋
- 关键词：脑脊液促肾上腺皮质激素释放激素抑郁症促肾上腺皮质激素释放激素神经型一氧化氮合酶一氧化氮脑脊液抑郁症神经型一氧化氮合酶一氧化氮
- 文献传递
