田丽花
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种副溶血弧菌外膜蛋白LptD的制备方法及其应用
- 本发明涉及一种副溶血弧菌外膜蛋白LptD的制备方法及其应用，通过培养副溶血弧菌菌种并提取DNA，设计副溶血弧菌外膜蛋白编码序列的引物对，以副溶血弧菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物和载体pET-28a(+)...
- 潘建义李楚楚叶智鸧温良优陈冉田丽花
- 文献传递
- 大肠杆菌外膜蛋白ompW基因敲除菌的构建及其对两种抗生素的敏感性被引量：7
- 2012年
- 探讨大肠杆菌ompW基因敲除后,硫酸新霉素和氨苄青霉素对敲除菌最低抑菌浓度(MIC)和生存率的影响,进而分析OmpW的功能。【方法】运用Red重组技术将大肠杆菌K12染色体上基因ompW敲除,构建缺陷株ΔompW。然后分别测定硫酸新霉素和氨苄青霉素对正常菌和ΔompW菌的最小抑菌浓度(MIC)及次抑菌浓度(1/2 MIC)下K12和ΔompW菌的生存率。【结果】经PCR鉴定和通过提取膜蛋白进行western blot分析表明,成功获得ompW敲除菌。抗生素分析表明,K12菌对硫酸新霉素的MIC为8.0μg/mL,生存率为98.0%;ΔompW菌对新霉素的MIC为1.7μg/mL,而其生存率仅为39.0%。而k12对氨苄新霉素的MIC为16.0μg/mL,ΔompW为3.3μg/mL;1/2 MIC下K12生存率为70.4%,而ΔompW为30.3%。【结论】ompW基因缺陷株对两抗生素的敏感性大大增强,表明ompW在细菌抗性方面起着关键作用。
- 吴贤斌邹海杰田丽花潘建义赵辅昆
- 关键词：RED同源重组外膜蛋白最小抑菌浓度生存率
- 副溶血弧菌免疫原性蛋白的鉴定及克隆表达被引量：1
- 2013年
- 运用蛋白质组学及免疫学技术筛选和鉴定副溶血弧菌的外膜蛋白中具有较好免疫原性的外膜蛋白,为防治副溶血弧菌类疾病的亚单位疫苗的研发奠定基础。用灭活的副溶血弧菌免疫ICR小鼠制备抗血清;通过对外膜蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析筛选免疫原性蛋白,经MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,对免疫原性蛋白进行鉴定。克隆表达免疫原性蛋白VP0802,并对该蛋白的表达条件进行优化,最后纯化蛋白VP0802,并免疫小鼠获得抗血清,通过Western Blot验证蛋白VP0802的免疫原性。结果:免疫小鼠所得到的抗血清效价为1∶5 000;经免疫印迹分析确定了12种外膜蛋白具有较好免疫原性,其中10种外膜蛋白经质谱分析得到鉴定,分别为LPS-assembly protein,VP0802,Maltoporin,Chitoporin,OmpC,OmpA,OmpU,OmpK,VP1243和VP0966。成功构建免疫原性蛋白VP0802的高表达菌株;该菌株在低温低转速的条件下诱导,目的蛋白仍以包涵体形式存在,在37℃,220r/min,IPTG终浓度为1mmol/L的条件下诱导,目的蛋白表达量较高,纯化得到蛋白VP0802并验证了该蛋白的免疫原性。表明在副溶血弧菌的外膜蛋白中存在多种与免疫原性相关的蛋白,且部分蛋白为首次发现具有免疫原性。
- 田丽花叶智鸧温良优潘建义赵辅昆
- 关键词：副溶血弧菌外膜蛋白免疫原性
- 副溶血弧菌免疫原性蛋白的鉴定及其研究
- 副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus，VP)属于革兰氏阴性嗜盐弧菌，是海洋环境中最常见的细菌类群之一，广泛存在于江河口及海洋环境中，是鱼、虾、贝类等养殖水产动物的重要病原菌，给养殖业带来巨大的经济损失...
- 田丽花
- 关键词：副溶血弧菌外膜蛋白免疫原性亚单位疫苗
- 文献传递
