李春林
- 作品数：10 被引量：66H指数：5
- 供职机构：南京医科大学基础医学院医学分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省重点实验室开放基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位
- 目的筛选和鉴定重组的日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj338的表位。方法用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG,将抗体进一步纯化,获得抗rSj338单特异多克隆...
- 胡雪梅张兆松吴海玮李春林苏川季旻珺王诗宁王勇吴观陵
- 关键词：噬菌体肽库表位日本血吸虫线粒体
- 文献传递
- ABI377全自动DNA测序仪对测序模板和引物的要求被引量：2
- 2002年
- 刘丰李春林苏川
- 关键词：DNA模板DNA测序仪
- 日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究被引量：24
- 2002年
- 目的 观察日本血吸虫 (中国大陆株 )的线粒体相关蛋白 r Sj338及膜蛋白 r Sj2 2 .6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性 ,为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗r Sj338抗体和抗 r Sj2 2 .6的抗体筛选噬菌体随机 12肽库 ,将获得的 r Sj338的有效抗原表位与r Sj2 2 .6有效抗表位混合后免疫 BAL B/ c小鼠 ,并与 r Sj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 r Sj338的 4种表位和 r Sj2 2 .6抗原的 4种表位混合免疫组小鼠获得了 4 5 .4 % (P<0 .0 1)的减虫率及 5 9.1% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ,r Sj338的 4种表位混合免疫组小鼠获得了 34.2 % (P<0 .0 1)的减虫率及 4 6 .8% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ;r Sj3384种表位和 r Sj2 2 .6的 4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于 r Sj338的 4种表位混合免疫组 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。
- 胡雪梅张兆松吴海玮李春林苏川季旻珺王勇朱翔吴观陵
- 关键词：日本血吸虫抗原表位免疫保护膜蛋白动物实验
- 日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究被引量：19
- 2001年
- 目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6 k Da有效抗原表位对小鼠的免疫保护性 ,预测其在抗血吸虫感染中的作用。方法 用纯化的抗 Sj2 2 .6 k Da的多克隆抗体 Ig G对噬菌体 12肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ,经 Western- blot免疫识别、动物初筛及序列分析后 ,将获得的阳性克隆免疫 BABL/ c小鼠。结果 共获得 4个有效抗原表位 ,各免疫组和对照组相比 ,4种表位混合免疫组小鼠 ,获得了 39.5 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 5 7.1% (P<0 .0 1)肝总减卵率 ;4种表位分别免疫4组小鼠 ,各组分别获得了 2 7.5 % (P<0 .0 5 )、5 .4% (P<0 .0 5 )、2 2 .8% (P<0 .0 5 )、11.6 % (P<0 .0 5 )的减虫率及 41.4% (P<0 .0 1)、2 9.7% (P<0 .0 5 )、32 .2 % (P<0 .0 5 )、30 .9% (P<0 .0 5 )肝总减卵率。结论 所获得 4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力 。
- 胡雪梅张兆松李春林吴海玮苏川季旻珺王勇刘丰吴观陵
- 关键词：日本血吸虫噬菌体肽库表位免疫保护
- 日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位筛选及其免疫保护性研究
- 目的 筛选和鉴定重组的日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白rSj338的表位,并对其有效抗原表位免疫保护作用进行研究,预测其在抗血吸虫感染中的作用。方法用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26G...
- 胡雪梅张兆松吴海玮李春林苏川季王诗宁王勇吴观陵
- 关键词：噬菌体肽库表位日本血吸虫线粒体融合蛋白免疫保护
- 文献传递
- 日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj338的免疫细胞化学定位被引量：3
- 2002年
- 目的 应用免疫电镜技术观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 方法 收集新鲜的日本血吸虫成虫 ,常规固定、包埋 ,制备日本血吸虫成虫超薄冷冻切片。用纯化的抗rSj338单特异多克隆抗体为一抗 ,同时 ,以正常兔血清作阴性对照 ;以直径为 10nm胶体金颗粒标记的蛋白A进行定位 ,进行组织化学反应 ,透射电镜观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 结果 高密度胶体金颗粒主要分布于日本血吸虫线粒体外膜上 ,在线粒体的嵴上也见分布。结论 rSj338蛋白确为日本血吸虫线粒体相关蛋白 。
- 胡雪梅张兆松吴海玮李春林苏川季旻王勇朱翔吴观陵
- 关键词：日本血吸虫线粒体相关蛋白免疫细胞化学免疫电镜
- 日本血吸虫重组线粒体相关蛋白免疫学活性鉴定被引量：7
- 2002年
- 分子筛进一步纯化并复性的融合蛋白均能刺激家兔产生特异性抗体 ,粗提包涵体蛋白免疫家兔 ,血清抗体滴度为 1∶2 5 6 0 0 ,复性蛋白及经分子筛纯化的蛋白免疫的家兔血清抗体滴度均为 1∶5 12 0 0 ,Westernblot结果显示 ,粗提包涵体蛋白、复性蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的蛋白均能被重感染兔血清和rSj338/2 6GST特异性免疫兔血清所识别。攻击实验中 ,粗提包涵体蛋白和经分子筛纯化的蛋白分别可诱导小鼠产生 2 7.8% (P <0 .0 1)和 30 .4 % (P <0 .0 1)的减虫率 ,4 0 .4 % (P <0 .0 1)和 4 3.5 % (P <0 .0 1)肝总减卵率。粗提包涵体蛋白中rSj338和经分子筛纯化的蛋白中rSj338分别可诱导小鼠产生 13.9% (P <0 .0 5 )和 2 0 .0 % (P <0 .0 5 )的减虫率 ,30 .0 % (P <0 .0 1)和 4 1.7% (P <0 .0 1)肝总减卵率。结论 获得的日本血吸虫线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/2 6GST)具有良好的免疫学活性 ,重组融合蛋白 (rSj338/2 6GST)及rSj338均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。
- 胡雪梅张兆松苏川吴海玮季旻珺李春林王勇吴观陵
- 关键词：日本血吸虫线粒体融合蛋白质类免疫保护包涵体
- 日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因的克隆和鉴定被引量：11
- 2001年
- 目的 从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。 方法 用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用于日本血吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选。PCR扩增阳性克隆插入cDNA片段。序列分析后 ,于该序列第一开读框两端设计引物并分别引入EcoRⅠ和NotⅠ位点 ,PCR扩增并纯化目的基因片段后克隆入质粒载体pGME T ,再亚克隆入表达载体pGEX 6p 1。经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblotting鉴定。 结果 阳性克隆插入片段约 12 0 0bp ,第一开读框长 5 0 7bp ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 3kDa。DNA序列分析显示 ,与已知序列同源性小于 4 0 %。重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B能高效表达融合蛋白 ,且能被日本血吸虫特异性IgE抗体识别。 结论 成功构建的重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B ,Sj4
- 王勇苏川张兆松胡雪梅沈蕾刘丰王荣芝陈淑贞李春林吴观陵
- 关键词：日本血吸虫IGE重组抗原融合蛋白
- 重组日本血吸虫特异性IgE相关蛋白的纯化及免疫学活性鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 纯化重组日本血吸虫特异性IgE抗体相关蛋白和鉴定其免疫原性。 方法 大量表达Sj43B/pGEX 6p 1 /BL2 1重组克隆菌 ,超声粉碎后离心获得融合表达的重组蛋白包涵体。经TNMFX缓冲液分步洗涤后 ,将包涵体溶解液经FPLC分离 ,获得重组融合蛋白组分 ,再经巯基二硫键转换复性后 ,用于免疫小鼠获得抗血清 ,分别用dot ELISA法和Westernblotting法对融合蛋白引起的特异性血清抗体同型反应进行鉴定。 结果 分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分 ,FPLC分离可获得高纯度重组蛋白。用复性后的重组融合蛋白免疫小鼠 ,其中目的蛋白可引起特异性IgE抗体反应 ,而担体蛋白 2 6kDaGST不引起特异性IgE应答 ,可引起特异性IgG抗体反应 ,目的蛋白则否。 结论 重组质粒Sj43B/pGEX 6p 1表达的融合蛋白 ,其目的蛋白部分免疫小鼠可产生特异性IgE抗体。
- 王勇苏川张兆松胡雪梅刘丰李春林季旻珺朱翔吴观陵
- 关键词：免疫学日本血吸虫包涵体蛋白纯化
- 用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位被引量：11
- 2002年
- 目的 筛选和鉴定重组的日本血吸虫 (中国大陆株 )线粒体相关蛋白rSj338的表位。方法 用纯化的rSj338 2 6GST免疫家兔获得抗rSj338 2 6GST的多克隆抗体IgG ,将抗体进一步纯化 ,获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体 12肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblot免疫识别 ,核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338 2 6GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠 ,并采用Westernblot及dot ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆。并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338 2 6GST、2 6GST、日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Westernblot识别。结果 经 5轮免疫学筛选后挑取的 32个克隆 ,用Westernblot方法 30个克隆能被抗rSj338抗体识别。核苷酸序列分析发现共有 11种表位 ,与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选 ,共获得 4个免疫原性较强的阳性克隆 ,其免疫鼠血清均可识别rSj338 2 6GST、日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论 获得了 4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位 ,均为模拟表位 。
- 胡雪梅张兆松吴海玮李春林苏川季旻珺王诗宁王勇吴观陵
- 关键词：重组日本血吸虫噬菌体肽库线粒体相关蛋白表位
