张静宜
- 作品数：16 被引量：28H指数：3
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 低氧预适应鼠脑内nPKCε-ERK1/2功能复合物的变化
- 目的：脑缺血/低氧预适应(I/HPC)是一种内源性保护机制,可使组织细胞对继发严重的缺血/低氧刺激产生耐受。我们以往的研究表明,新奇型蛋白激酶 C(nPKCε)的膜转位可能参与了低氧预适应的发生发展过程。本研究拟利用 n...
- 江君杨巍巍卜祥宁张楠韩松张静宜李俊发
- 人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。
- 孙丽翠王雅梅闫豫东张静宜司杨祁雅慧
- 关键词：人血管内皮细胞生长因子BLOTSF9细胞
- 低氧预适应鼠脑内与cPKCβⅡ相互作用的ERK1/2蛋白水平降低
- 目的：低氧预适应(HPC)是机体对低氧刺激产生耐受的一种内源性保护机制,可降低继发严重低氧所造成的细胞损伤。对这一机制的研究有利于人们对低氧性临床疾病的认识。我们以往的研究表明,经典型蛋白激酶 C(cPKC)βⅡ、γ和新...
- 杨巍巍江君卜祥宁张楠韩松张静宜李俊发
- LipofectAMINE和Vigofect转染特点的比较研究
- 2004年
- 目的 :评估新型转染试剂Vigofect介导gfp - 2mar基因转染BHK细胞的转染效率及其对细胞的毒性作用 ,并与传统转染试剂LipofectAMINE进行比较。方法 :将适量的gfp - 2mar分别用等量的LipofectAMINE和Vigofect转染BHK细胞 ,于转染后 4 8h用MTT比色法检测活细胞数 ,以GFP为报告基因 ,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪计数荧光细胞 ,检测转染效率。结果 :Lipo fectAMINE转染组细胞存活率为 96 .5 1± 3.12 % ,显著大于Vigofect转染组 6 1.4 3± 16 .89% (P <0 .0 1) ;Vigofect转染效率为 5 9.2±19 .5 1% ,显著高于LipofectAMINE 10 .72± 8.17% (P <0 .0 2 )。结论 :与LipofectAMINE相比较 ,Vigofect对细胞毒性较大 。
- 张静宜孙丽翠闫豫东祁雅慧齐顺章
- 关键词：GFP基因转染MTT流式细胞仪
- 低氧预适应小鼠海马组织内NF-H磷酸化水平升高
- 目的：缺血/低氧预适应(I/HPC)是机体产生的一种内源性保护措施,即亚致死性缺血/低氧刺激可诱导组织产生对继发的严重缺血/低氧损伤的耐受。对这一组织保护机制的研究为临床缺血低氧脑损伤的防治工作提供了新思路。我们过去的研...
- 张静宜韩松张楠卜祥宁江君杨巍巍李俊发
- 蛋白激酶C特定亚型及其底物在脑低氧预适应中的作用
- 李俊发徐群渊韩松张静宜卜祥宁张楠杨巍巍江君戚智锋
- 1.项目所属科学技术领域：特殊环境生理学；2.项目主要研究内容：①为了探讨脑I/HPC引起的神经保护机制，该课题组在吕国蔚教授所建整体小鼠低氧预适应(HPC)模型基础上，加入了高CO2因素。同时，为了加强科学性和不同低氧...
- 关键词：
- 关键词：蛋白激酶C低氧预适应神经保护脑缺血
- 人碱性成纤维细胞生长因子在昆虫细胞sf9中的表达
- 2004年
- 将人碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)基因cDNA克隆到pFastBacI转移载体中 ,重组质粒转化到感受态细胞DH1 0Bac中 ,使目的基因转座入BacmidDNA中 ,纯化DNA后 ,利用病毒噬斑实验筛选重组的杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,在Sf9细胞中进行表达。Western印迹结果表明 :表达产物为相对分子质量约 1 70 0 0的蛋白 ,与预计的重组蛋白相对分子质量相同 ,并具有较好的免疫学活性。MTT检测证实表达产物能明显促进人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的分裂增生 。
- 王雅梅孙丽翠祁雅慧司杨闫豫东殷红张静宜
- 关键词：FGF昆虫细胞HUVECMTT检测人碱性成纤维细胞生长因子感受态细胞
- 利用昆虫杆状病毒载体表达人碱性成纤维细胞生长因子被引量：2
- 2007年
- 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,hbFGF)基因进行表达,并检测重组蛋白的特异性及生物学活性。方法将人bFGF的cDNA克隆至杆状病毒转座载体pFastBacHTb中,并转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细菌DH10Bac中,获得重组Bacmid/bFGF;纯化DNA后,转染昆虫细胞Sf21,PCR鉴定重组病毒;进一步将重组病毒感染Sf21细胞,在Sf21细胞中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western bloting分析;MTT法检测表达产物的生物活性。结果重组Bacmid/bFGFDNA直接转染昆虫细胞得到重组病毒rAcV-Bac-bFGF,病毒滴度MOI值≈8。重组病毒在感染后48h开始出现一相对分子质量为23000大小的特异带,感染后72h蛋白量明显增加,96h蛋白量达到最大,120h蛋白量开始减少。在正常昆虫Sf21细胞的对照中未见该蛋白带。Western bloting显示目的蛋白条带与人bFGF抗体发生特异反应。MTT结果显示重组蛋白能明显促进3T3细胞的分裂增殖。结论利用杆状病毒表达系统可成功表达具有生物学活性的bFGF蛋白。
- 王雅梅孙丽翠闫豫东司杨张静宜祁雅慧
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子昆虫细胞基因表达
- 人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析被引量：2
- 2004年
- 采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。
- 祁雅慧王雅梅孙丽翠司杨闫豫东张静宜邴国英
- 关键词：克隆生物活性
- 人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建被引量：1
- 2004年
- 为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。
- 孙丽翠王雅梅祁雅慧闫豫东张静宜
