司杨
- 作品数：13 被引量：41H指数：5
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市科委科技计划项目北京市科委基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达
- 2003年
- 应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合。经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表达。表达的硫氧还蛋白-VEGF融合蛋白的相对分子质量约为3.2万,主要以包涵体形式存在,也有少量重组蛋白为可溶性蛋白,Western印迹实验和生物活性分析证实可溶性的重组蛋白具有hVEGF的抗原性和促血管生长活性。
- 王雅梅祁雅慧司杨殷红武文琦
- 关键词：大肠杆菌人血管内皮细胞生长因子基因表达融合蛋白
- 过表达bFGF促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成被引量：2
- 2011年
- 研究过表达人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在大鼠急性心肌缺血模型中的表达及其对心肌血管再生的影响.将含人bFGF质粒pcDNA/b转染人脐带静脉内皮细胞(HUVEC),进行MTT检测.pcDNA/b转染人肾细胞293细胞系,进行G418稳定筛选,Western印迹检测.建立大鼠急性心肌梗死模型,分别将生理盐水、空质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA/b分3点注射于梗死交界处心肌内4周后取材,做常规HE染色和Masson染色,测量各组微血管数量和梗死面积.经免疫组织化学染色鉴定和电镜观察,过表达外源bFGF可以促进HUVEC(细胞)生长;pcDNA/b能在293细胞中高效表达外源bFGF基因.pcDNA/b注射组梗死交界处可见大量新生血管,毛细血管总数明显大于对照组,梗死面积明显小于对照组.pcDNA/b组在梗死交界区有bFGF阳性表达.电镜观察显示,在梗死交界处心肌细胞间有毛细血管增生,分化成2个血管腔.本实验证明,过表达bFGF具有促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成的作用,为bFGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础.
- 王雅梅刘冰孙丽翠祁雅慧司杨闫豫东郑少鹏
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体基因过表达
- 人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。
- 孙丽翠王雅梅闫豫东张静宜司杨祁雅慧
- 关键词：人血管内皮细胞生长因子BLOTSF9细胞
- VEGF重组质粒pcDNA/V的构建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表达被引量：6
- 2006年
- 构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转染至人胚肾细胞(293细胞)中,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆。ELISA、Westernblot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因,鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性。进一步的体内表达研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA3.1(+)分三点注射于梗死交界处心肌内,四周后取材。经免疫组化染色检测,pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达;电镜观察显示,pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生。实验结果表明成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体。体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性,为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础。
- 王雅梅刘冰孙丽翠闫豫东司杨祁雅慧
- 关键词：血管内皮细胞生长因子真核表达载体
- 人碱性成纤维细胞生长因子在昆虫细胞sf9中的表达
- 2004年
- 将人碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)基因cDNA克隆到pFastBacI转移载体中 ,重组质粒转化到感受态细胞DH1 0Bac中 ,使目的基因转座入BacmidDNA中 ,纯化DNA后 ,利用病毒噬斑实验筛选重组的杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,在Sf9细胞中进行表达。Western印迹结果表明 :表达产物为相对分子质量约 1 70 0 0的蛋白 ,与预计的重组蛋白相对分子质量相同 ,并具有较好的免疫学活性。MTT检测证实表达产物能明显促进人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的分裂增生 。
- 王雅梅孙丽翠祁雅慧司杨闫豫东殷红张静宜
- 关键词：FGF昆虫细胞HUVECMTT检测人碱性成纤维细胞生长因子感受态细胞
- 利用昆虫杆状病毒载体表达人碱性成纤维细胞生长因子被引量：2
- 2007年
- 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,hbFGF)基因进行表达,并检测重组蛋白的特异性及生物学活性。方法将人bFGF的cDNA克隆至杆状病毒转座载体pFastBacHTb中,并转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细菌DH10Bac中,获得重组Bacmid/bFGF;纯化DNA后,转染昆虫细胞Sf21,PCR鉴定重组病毒;进一步将重组病毒感染Sf21细胞,在Sf21细胞中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western bloting分析;MTT法检测表达产物的生物活性。结果重组Bacmid/bFGFDNA直接转染昆虫细胞得到重组病毒rAcV-Bac-bFGF,病毒滴度MOI值≈8。重组病毒在感染后48h开始出现一相对分子质量为23000大小的特异带,感染后72h蛋白量明显增加,96h蛋白量达到最大,120h蛋白量开始减少。在正常昆虫Sf21细胞的对照中未见该蛋白带。Western bloting显示目的蛋白条带与人bFGF抗体发生特异反应。MTT结果显示重组蛋白能明显促进3T3细胞的分裂增殖。结论利用杆状病毒表达系统可成功表达具有生物学活性的bFGF蛋白。
- 王雅梅孙丽翠闫豫东司杨张静宜祁雅慧
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子昆虫细胞基因表达
- 乳腺癌组织中NHERF1、PTEN和ERα蛋白的表达及其临床意义被引量：5
- 2012年
- 目的在乳腺癌及癌旁组织中研究钠氢交换子调节因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor 1,NHERF1)、PTEN和雌激素受体亚型ERα的免疫组织化学表达情况及其与乳腺癌临床病理分型的关系。方法采用免疫组织化学(SP)法评价乳腺癌组织及癌旁组织中NHERF、PTEN和雌激素受体亚型ERα蛋白表达情况,对其进行比较研究。结果乳腺癌组织中NHERF1和PTEN均呈现弱阳性表达或者不表达,而在癌旁组织中两者均有表达,而且在癌旁组织与癌组织中的表达量的差异有统计学意义(P<0.01)。而ERα的表达量在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织(P<0.01)。结论乳腺癌组织中PTEN蛋白的表达水平可能与乳腺癌组织中NHERF1的表达有很大的相关性,雌激素受体在乳腺癌的发生发展过程中起了很重要的作用。
- 李阳李洋程杉葛志成司杨贺俊崎
- 关键词：乳腺癌PTEN雌激素受体免疫组织化学
- 人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析被引量：2
- 2004年
- 采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。
- 祁雅慧王雅梅孙丽翠司杨闫豫东张静宜邴国英
- 关键词：克隆生物活性
- 外伤性增生性玻璃体视网膜病变的电镜观察被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨外伤性增生性玻璃体视网膜病变 (traumaticproliferativevitreoretinopathy ,tPVR)细胞增生的特征。方法 对 10例tPVR的玻璃体切除标本进行了透射电镜观察。结果 tPVR的增生特征以成纤维细胞及胶原纤维为主。 3例标本可见吞噬细胞及色素颗粒 ,4例标本可见少数视网膜色素上皮 (RPE)细胞 ,3例可见血管组织。结论 tPVR以纤维增生为主 ;玻璃体出血可引起以巨噬细胞为主的炎症反应 ,刺激增生 ;有血管参与tPVR的增生过程。
- 张兰王文伟庞秀琴于洁孙宪丽陈凤华李毅斌祁雅慧王民司杨
- 关键词：外伤性增生性玻璃体视网膜病变电镜观察眼外伤
- 应用反义VEGF基因抑制肿瘤细胞生长的研究被引量：2
- 2003年
- 本实验研究反义血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因对肿瘤细胞生长的抑制作用及由此引起的细胞凋亡。将pcDNA3.1/anti-VEGF真核表达载体转染人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y),采用软琼脂集落生长,MTT及电子显微镜观察细胞的增殖及形态学变化,并进一步从蛋白水平检测VEGF的表达。结果证明,反义VEGF基因确有抑制神经母细胞瘤生长的作用,电镜下观察到细胞出现凋亡形态,ELISA结果表明VEGF的表达显著降低。
- 孙丽翠祁雅慧闫豫东张静宜王民司杨
- 关键词：肿瘤细胞细胞凋亡ELISA基因治疗
