祁雅慧
- 作品数：50 被引量：148H指数：6
- 供职机构：首都医科大学燕京医学院更多>>
- 发文基金：北京市科委科技计划项目北京市科委基金首都医科大学校长研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。
- 孙丽翠王雅梅闫豫东张静宜司杨祁雅慧
- 关键词：人血管内皮细胞生长因子BLOTSF9细胞
- 人VEGF_(165)和bFGF基因联合治疗大鼠急性心肌梗死被引量：1
- 2006年
- 目的观察直接心肌内注射人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因对大鼠急性心肌梗死模型血管及梗死面积的治疗效果,评估比较联合应用2种基因与单纯应用一种基因的疗效。方法建立大鼠急性心肌梗死模型,将生理盐水(对照组)、空载体(A组)、VEGF165(B组)、bFGF(C组)、VEGF165和bFGF混合质粒(D组)分3点注射于梗死交界处心肌内,4周后取材做常规HE染色和Masson染色,分别测量各组微血管数量和梗死面积;用免疫组织化学染色鉴定VEGF、bFGF的表达。结果B组、C组和D组心肌毛细血管总数明显大于对照组和A组(P<0.01),D组毛细血管总数大于B组和C组(P<0.01)。D组和C组的梗死面积百分比小于其他3组(P<0.01),D组和C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF和bFGF免疫组化染色显示有相应蛋白表达。结论联合应用VEGF和bFGF基因治疗急性心肌梗死,具有明显促进血管生成、缩小梗死面积的作用。
- 温铭杰刘冰孙丽翠祁雅慧
- 关键词：血管内皮细胞生长因子碱性成纤维细胞生长因子基因治疗心肌梗死
- 鸡α-珠蛋白基因5’端MAR调控GFP的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察不同细胞密度、不同转染时间MAR对GFP表达的影响。方法 :采用脂质体法将pcmv gfp与pgfp mar两个真核表达载体转染人的神经母细胞瘤细胞系 (SH -SY5Y)。结果 :在细胞密度为 3.0× 10 5cells ml,转染后 72hGFP表达量较其它条件下高 ,且在相同条件下 ,pgfp mar比pcmv gfp表达要高。结论 :初步证明该MAR能够提高GFP的表达。
- 闫豫东孙丽翠张静宜祁雅慧张玉国齐顺章
- 关键词：脂质体转染MARGFP动物细胞
- 核心蛋白聚糖与肝纤维化研究进展被引量：1
- 2008年
- 该文综述了核心蛋白聚糖(Decorin,DC)的结构、功能以及其来源方式,并且介绍了核心蛋白聚糖与胶原纤维和细胞因子的作用、肝纤维化的机制以及核心蛋白与肝纤维化的关系,及其临床应用前景。
- 熊丽丽祁雅慧李慎涛马怀安
- 关键词：核心蛋白聚糖肝纤维化转化生长因子-Β
- 人VEGF在NIH3T3细胞中的基因转移和表达被引量：1
- 2008年
- 目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中。G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的pcDNA3.1(+)阳性细胞克隆和未转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测。用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性。结果Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符。细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性。结论人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株。
- 王雅梅李慎涛温铭杰孙丽翠司杨闫豫东祁雅慧
- 关键词：血管内皮细胞生长因子真核表达载体基因表达
- 人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达
- 2003年
- 应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合。经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表达。表达的硫氧还蛋白-VEGF融合蛋白的相对分子质量约为3.2万,主要以包涵体形式存在,也有少量重组蛋白为可溶性蛋白,Western印迹实验和生物活性分析证实可溶性的重组蛋白具有hVEGF的抗原性和促血管生长活性。
- 王雅梅祁雅慧司杨殷红武文琦
- 关键词：大肠杆菌人血管内皮细胞生长因子基因表达融合蛋白
- 过表达bFGF促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成被引量：2
- 2011年
- 研究过表达人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在大鼠急性心肌缺血模型中的表达及其对心肌血管再生的影响.将含人bFGF质粒pcDNA/b转染人脐带静脉内皮细胞(HUVEC),进行MTT检测.pcDNA/b转染人肾细胞293细胞系,进行G418稳定筛选,Western印迹检测.建立大鼠急性心肌梗死模型,分别将生理盐水、空质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA/b分3点注射于梗死交界处心肌内4周后取材,做常规HE染色和Masson染色,测量各组微血管数量和梗死面积.经免疫组织化学染色鉴定和电镜观察,过表达外源bFGF可以促进HUVEC(细胞)生长;pcDNA/b能在293细胞中高效表达外源bFGF基因.pcDNA/b注射组梗死交界处可见大量新生血管,毛细血管总数明显大于对照组,梗死面积明显小于对照组.pcDNA/b组在梗死交界区有bFGF阳性表达.电镜观察显示,在梗死交界处心肌细胞间有毛细血管增生,分化成2个血管腔.本实验证明,过表达bFGF具有促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成的作用,为bFGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础.
- 王雅梅刘冰孙丽翠祁雅慧司杨闫豫东郑少鹏
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体基因过表达
- MT启动子控制的GFP基因在CHO细胞中的诱导表达
- 2003年
- 用羊金属硫蛋白(MT)启动子构建含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的真核表达载体,经脂质体介导在培养的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行诱导性表达。结果:构建的GFP基因表达载体能在CHO细胞中进行表达,用硫酸锌诱导可提高GFP的表达量。
- 孙丽翠祁雅慧仲峰
- 关键词：GFP基因CHO细胞基因表达基因转移
- 重组人VEGF与bFGF真核表达载体、融合蛋白及其用途
- 本发明涉及重组真核表达载体，其中在真核表达载体上插入了人血管内皮细胞生长因子(VEGF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因。本发明还涉及融合蛋白，由人血管内皮生长因子基因与碱性成纤维细胞生长因子组成。所述重组载体和...
- 王雅梅祁雅慧邴国英
- 文献传递
- 聚合酶链反应在诊断肺结核中的应用
- 1998年
- 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对７８例患者的痰、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和胸水标本进行结核菌检测；并同时进行涂片抗酸染色、皮肤结核菌素试验及血结核菌抗体检测。结果：ＰＣＲ阳性率为４６．１５％，与涂片镜检、结核菌素试验强阳性、血结核菌抗体阳性率（分别为３．８５％、１７．９５％、１１．５４％）相比均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。由此可见ＰＣＲ方法比传统方法具有更高的结核杆菌检出率。
- 刘双姚天樵徐利祁雅慧殷红姚庆英赫翠珍高天祥
- 关键词：聚合酶链反应结核杆菌肺结核
