程金芝
- 作品数：29 被引量：49H指数：4
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省省长基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术生物学农业科学更多>>
- 一种用于杀灭蜱虫的药物试验仪
- 本实用新型公开了一种用于杀灭蜱虫的药物试验仪，属于灭虫器械技术领域，包括柜体，所述柜体内的底部滑动安装有分类放置结构，所述柜体内的顶部固定安装有LED照明灯，所述柜体内的正面活动安装有分测结构，所述柜体的顶部固定安装有安...
- 彭哲慧程金芝李威仪
- 白纹伊蚊唾液腺34 ku-2基因克隆与原核表达被引量：4
- 2015年
- 目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;将该基因克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,重组质粒在大肠埃希菌BL21/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定。结果 RT-PCR扩增获得Aalb_34ku-2 2个转录本。Aalb_34ku-2_1序列长度为954bp,编码318个氨基酸,等电点为5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF为882bp,编码294个氨基酸,等电点为6.09。两者相差24个氨基酸;构建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组表达载体并转入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后得到的重组蛋白与目的蛋白分子质量(34ku)相符,经鉴定为包涵体蛋白。结论成功构建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组原核表达质粒并表达出融合蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 李方站程金芝王涛牟小会颜凤翟慧吴家红
- 关键词：白纹伊蚊唾液腺原核表达
- 白纹伊蚊唾液蛋白Alb-AG5-3的基因特征分析及真核表达
- 2023年
- 目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY826105.1)设计特异性引物,从白纹伊蚊安顺株中扩增基因全长。经序列比对后利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)以及生物信息学在线软件SignalP、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL、AlphaFold等对该蛋白进行生物信息学分析。Trizol法提取白纹伊蚊雌蚊与雄蚊整蚊以及吸血前后雌蚊唾液腺RNA,qRT-PCR检测Alb-AG5-3在RNA相对表达量;以白纹伊蚊整蚊cDNA为模板,特异性扩增除信号肽外的Alb-AG5-3编码区,PCR产物经切胶回收纯化后与昆虫真核表达载体pMT/BiP/V5连接,构建真核重组质粒pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3。随后转入果蝇S2细胞中,500μmol/L CuSO4诱导重组蛋白Alb-AG5-3的表达。收集上清,采用Western blot鉴定V5表达标签,镍柱亲和层析纯化重组蛋白Alb-AG5-3。结果 生物信息学分析该基因CDS(Coding sequence)区扩增全长为768 bp,编码255个氨基酸,二、三级结构预测以无规则卷曲和a-螺旋为主,具CAP超家族经典的PR-1结构域,该基因编码的蛋白是一种强亲水性(GRAVY:-0.864)的富含半胱氨酸的分泌蛋白。Alb-AG5-3 mRNA在雌蚊中表达量高于雄蚊且吸血后的表达量显著下调。成功构建了白纹伊蚊唾液蛋白pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3真核表达质粒并通过果蝇S2表达体系表达出真核蛋白,镍柱亲和纯化后的Alb-AG5-3经Western blot检测能被V5标签蛋白抗体识别。结论 成功构建白纹伊蚊Alb-AG5-3真核质粒并在果蝇S2细胞中表达真核蛋白Alb-AG5-3,镍柱亲和纯化后获得单一的Alb-AG5-3蛋白以备后续分析。
- 高敏吴家红吴家红张霞程金芝聂映彭哲慧李志强赵久刚商正玲刘磊蓝静刘红美
- 关键词：白纹伊蚊唾液腺真核表达
- 白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1的克隆、表达分析被引量：3
- 2013年
- 目的克隆白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1(Aamucin1)的全长cDNA序列,并分析白纹伊蚊吸血前后基因表达的差异。方法根据白纹伊蚊罗马株Aamucin1基因序列(GenBank序列号为AY826068)设计特异引物,提取白纹伊蚊广州株唾液腺总RNA,PCR扩增Aamucin1全长基因序列,并进行生物信息学分析。实时荧光定量RT-PCR分析白纹伊蚊吸血前后Aamucin1基因表达差异。结果成功克隆白纹伊蚊广州株基因,并获得全长为849 bp的基因序列,编码283个氨基酸。白纹伊蚊广州株与罗马株Aamucin1基因序列比对在C端少了13个氨基酸。与罗马伊蚊同源序列的一致性为58%;该基因具有1个可变剪接子;Protscan分析示有苏氨酸丰富区,可变剪接子恰位于此区;饱血零时(吸血2 h,腹部饱胀者,为BSG_0组),Aamucin1基因表达显著下调,是吸血前(SG组)的0.39倍(P<0.01);饱血24 h(饱血后24 h,为BSG_24组),Aamucin1基因表达较饱血零时有回升,是吸血前(SG组)的0.61倍(P>0.05)。结论获得白纹伊蚊广州株Aamucin1基因全长序列,并证实其在mRNA水平受到吸血调控。
- 刘鉴程金芝孙宇朱儒芳张亮吴家红
- 关键词：白纹伊蚊克隆
- 白纹伊蚊唾液腺CTL1基因的表达与功能研究
- 程金芝
- 贵阳市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状与kdr（L1014F）等位基因频率分析被引量：4
- 2016年
- 探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的L1014F点突变频率相关性，为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据。本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定。结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和高效氯氰菊酯的LD50分别为0．00620～0．013339μg／雌蝇、0．02298～0．03614μg／雌蝇，抗性系数分别为3．35～7．56、7．38—11．62。采用特异性等位基因PCR法测定基因频率，结果显示4城区家蝇种群的L1014F点突变频率在29％～37％。相关性分析显示L1014F点突变等位基因频率与高效氯氰菊酯LD50值之间存在直线相关。研究结果表明贵阳市家蝇对氯菊酯、高效氯氰菊酯已经产生了抗药性，击倒抗性是其抗性机理之一。
- 杨茜张亮杨迅程金芝吴渊明刘鉴吴家红
- 关键词：家蝇抗性KDR拟除虫菊酯
- SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放
- 2024年
- 目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果:报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性(P<0.001),而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达(P<0.05)。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化(P<0.05)及p65的入核(P<0.01)。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论:SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。
- 牟露敏龙启舟邓东青程金芝聂映吴家红
- 关键词：NF-ΚB信号通路炎症因子
- 白纹伊蚊基因表达定量PCR内参基因的选择被引量：9
- 2011年
- 目的筛选白纹伊蚊基因表达定量PCR研究中适合的内参基因。方法采用实时荧光定量PCR技术,对β-ac-tin、BTF3a、rsp5、rsp27a、superoxide、rspL40六个看家基因的mRNA表达水平进行了探讨。结果除rsp27a基因扩增效率高于设定值被剃除外,余5个基因在不同组织中的表达稳定度为rspL40,BTF3a>rsp5>β-actin>superoxide;吸血不同时相表达稳定度为rspL40,rsp5>superoxide>BTF3a>β-actin。结论 rspL40,BTF3在不同组织中表达最稳定;rspL40,rsp5在吸血不同时相表达最稳定。
- 吴家红程金芝孙宇陈璐
- 关键词：白纹伊蚊实时荧光定量PCR内参基因基因表达
- 亚洲带绦虫六钩蚴Ta8基因的克隆表达及免疫原性分析
- 2012年
- 目的原核克隆表达亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因(Ta8),探索其表达蛋白在检测亚洲带绦虫感染中的应用价值。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫六钩蚴cDNA中获取Ta8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论成功地构建了亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中获得了成功表达;证明了8kDa基因表达产物具有免疫原性;还发现该绦虫成虫的头节、成节、孕节中也存在8kDa基因。
- 王宇程金芝黄江戴佳琳陈小睿廖兴江
- 关键词：亚洲带绦虫六钩蚴基因克隆原核表达免疫原性
- 埃及伊蚊腺苷脱氨酶相关基因的鉴定和表达分析
- 2017年
- 为了筛选和鉴定埃及伊蚊全基因组中腺苷脱氨酶相关基因，并分析其在蚊虫不同发育时期、雌蚊不同组织中的表达差异，本文运用模式昆虫黑腹果蝇Dm-ADA基因的ADA结构域序列在NCBI埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊ADA相关基因，采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．0预测信号肽，结合使用GeneDoc和Mega6．0软件包进行同源性比对和构建系统进化树构建。首先提取埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹、未吸血雌蚊、雄蚊）、雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）RNA并逆转录为cDNA，利用荧光实时定量PCR（qRT—PCR）方法对埃及伊蚊不同发育时期和雌蚊不同组织表达谱进行相对定量分析。结果显示，从埃及伊蚊全基因组中获得3条具有完整开放阅读码框的ADA相关基因（Aa-ADAL、Aa-ADGF-A、Aa-ADGF-B）；尽管不同物种ADA基因家族成员间相似性较低，但8个酶活性位点高度保守。Aa-ADAL在2龄幼虫期（7．88）、卵巢（8．05）高表达；Aa-ADGF-A在3龄幼虫期（7．25）高表达；Aa-ADGF-B在雌蚊唾液腺（10．07）显著高表达。经分析，2条属于ADA2／ADGF亚家族，1条属于ADAL亚家族。
- 吕清巧翟慧颜凤程金芝吴家红商正玲
- 关键词：埃及伊蚊QRT-PCR表达谱
