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埃及伊蚊腺苷脱氨酶相关基因的鉴定和表达分析: 2017年; 为了筛选和鉴定埃及伊蚊全基因组中腺苷脱氨酶相关基因，并分析其在蚊虫不同发育时期、雌蚊不同组织中的表达差异，本文运用模式昆虫黑腹果蝇Dm-ADA基因的ADA结构域序列在NCBI埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊ADA相关基因，采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．0预测信号肽，结合使用GeneDoc和Mega6．0软件包进行同源性比对和构建系统进化树构建。首先提取埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹、未吸血雌蚊、雄蚊）、雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）RNA并逆转录为cDNA，利用荧光实时定量PCR（qRT—PCR）方法对埃及伊蚊不同发育时期和雌蚊不同组织表达谱进行相对定量分析。结果显示，从埃及伊蚊全基因组中获得3条具有完整开放阅读码框的ADA相关基因（Aa-ADAL、Aa-ADGF-A、Aa-ADGF-B）；尽管不同物种ADA基因家族成员间相似性较低，但8个酶活性位点高度保守。Aa-ADAL在2龄幼虫期（7．88）、卵巢（8．05）高表达；Aa-ADGF-A在3龄幼虫期（7．25）高表达；Aa-ADGF-B在雌蚊唾液腺（10．07）显著高表达。经分析，2条属于ADA2／ADGF亚家族，1条属于ADAL亚家族。; 吕清巧翟慧颜凤程金芝吴家红商正玲; 关键词：埃及伊蚊 QRT-PCR 表达谱

埃及伊蚊yellow基因家族表达谱分析及rAa-Yc蛋白的功能初探: 目的：筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。并针对Aa-Yc作为研究对象，通过重组表达以获取rAa-Yc活性蛋白，并对其...; 颜凤; 关键词：埃及伊蚊表达谱病原鉴定

登革-2型病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法建立: 2017年; 目的建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法。方法从Gen Bank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果该方法检测灵敏度达到102copies/μL;特异性验证中除登革2型病毒有明显扩增外,与墨累谷脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒1、3、4型、黄热病毒和科萨努尔森林病毒、乙型脑炎病毒均无交叉反应。重复性实验结果表明该方法的组间和组内的变异系数(CV)均<2%。对人工感染DENV-2的87只蚊虫标本进行比对实验,结果荧光定量RT-PCR检测出56份阳性,传统RT-PCR只检测出16份阳性,差异有统计学意义(χ~2=37.908,P=0.000)。结论 TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测DENV-2,特异性强、敏感性高。; 牟小会郑祎扬韦艳颜凤程金芝吕清巧商正玲吴家红; 关键词：标准品

中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：2: 2016年; 流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，三带喙库蚊是其主要的传播媒介，感染人体后可引起流行性乙型脑炎（乙脑）。人群对本病普遍易感，15岁以下儿童发病率较高。; 牟小会吕清巧颜凤程金芝郑棉扬商正玲吴家红韦艳; 关键词：流行性乙型脑炎病毒 PCR检测方法 TAQMAN ENCEPHALITIS 单股正链RNA病毒

埃及伊蚊yellow基因家族的鉴别和表达谱分析被引量：1: 2016年; 目的筛选并鉴定埃及伊蚊（Aedes aegypti）全基因组中的yellow基因，分析其基因结构、基因进化以及在不同发育时期和不同组织的表达谱。方法运用模式昆虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）Dm-yellow基因（GenBank登录号为AAF45497）王浆主蛋白（MRJP）结构域氨基酸序列，在埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊yell0叫基因家族．采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域，运用SignalP4．1预测信号肽．结合使用DNAstar、MAGA6．0和GeneDoc软件包进行同源性比对、保守性分析和系统进化树构建。提取埃及伊蚊总RNA，合成cDNA，利用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）法对埃及伊蚊不同发育时期（卵、I～Ⅳ龄幼虫、蛹以及未吸血雌蚊和雄蚊）和未吸血雌蚊不同组织（唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢）的yellow基因表达谱进行相对定量分析。结果从埃及伊蚊全基因组中筛选出12条yellow基因（Aa-一yellow、Aa一yellow—b、Aa一yellow—c、Aa一yellow—d、Aa-yellow—e、Aa一yellow-f2、Aa—yellow-fb、Aa一yellow-fc、Aa—yellow—g、Aa—yellow—g2、Aa—yellow—h和Aa一fellow—x）。生物信息学分析结果显示，12条yellow基因均具有MRJP结构域和信号肽序列。同源性比对结果显示．埃及伊蚊yellow基因家族成员间同源性较低，为15％～49％：但其保守域间同源性较高，可达60％。系统进化树分析结果显示．12个yellow蛋白分为5个亚家族，其中11个在黑腹果蝇中均有直系同源蛋白存在。ⅡRT．PCR结果显示，An—yellow-d和Aa-yelloW一Ⅳ在雄蚊中高表达（P〈0．01或P〈O．05），相对表达量分别为0．0189和0．0235；Aa一yelloW一尼在雌蚊和唾液腺中特异高表达（P〈0．01），相对表达量分别为0．0248和0．0349；Aa一yellow-f2在Ⅱ龄幼虫中特异高表达（P〈0．01），相对表达量为0．0934；Aa一yellow、Aa—yellow—e和Aa—yellow一�; 颜凤吕清巧程金芝牟小会翟慧杨迅商正玲吴家红; 关键词：埃及伊蚊表达谱

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颜凤

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