孙宇
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 供职机构：贵阳医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省省长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺苷脱氨酶、C型凝集素及丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达被引量：8
- 2010年
- 目的了解腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)基因、C型凝集素(C-lectin)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达情况。方法分别制备未吸血雌蚊唾液腺(SG组)和吸血雌蚊唾液腺(BSG组)、雌蚊躯体(无头无唾液腺,C组)和雄蚊组织(无头含唾液腺,M组)的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术,以β肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,根据GenBank公布的ADA、C-lectin和Serpin基因序列设计特异性引物进行RT-PCR,分析以上基因在不同组织中的表达情况。结果与雌蚊躯体和雄蚊组织中相对表达量相比,ADA基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了545倍和123倍(P<0.01);C-lectin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了3929倍和4973倍(P<0.01);Serpin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了1911倍和2978倍(P<0.01)。吸血前后雌蚊唾液腺中ADA、C-lectin和Serpin等3个基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADA在蚊虫组织中均有表达,在雌蚊唾液腺中高表达;C-lectin和serpin基因在雌蚊唾液腺中特异高表达。
- 吴家红程金芝陈璐孙宇
- 关键词：白纹伊蚊实时荧光定量RT-PCR腺苷脱氨酶C型凝集素丝氨酸蛋白酶抑制剂
- 不同日龄白纹伊蚊雌蚊唾液腺总蛋白谱分析
- 2012年
- 目的:探讨不同日龄白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白含量及总蛋白谱差异。方法:分别采用Pierce蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳方法,分析白纹伊蚊雌蚊各日龄唾液腺蛋白质定量及蛋白谱。结果:0日龄每对唾液腺蛋白质质量为(0.677±0.30)μg,3日龄为(1.454±0.46)μg,5日龄为(1.95±0.38)μg,7日龄为(1.733±0.46)μg,10日龄为(1.205±0.43)μg;SDS-PAGE检测到0日龄唾液腺总蛋白有12条主带,分别为15 kDa、18 kDa、30 kDa、32 kDa、34 kDa、40 kDa、45 kDa、48 kDa、50 kDa、62 kDa、68 kDa、>116 kDa 1条,还有其它比较弱的次带;3日龄以后的唾液腺总蛋白有12条带,但少了40 kDa条带,多了28 kDa条带。结论:不同日龄白纹伊蚊雌蚊唾液腺蛋白谱有一定差异。
- 刘鉴孙宇程金芝陈璐吴家红
- 关键词：伊蚊属涎腺
- 白纹伊蚊基因表达定量PCR内参基因的选择被引量：9
- 2011年
- 目的筛选白纹伊蚊基因表达定量PCR研究中适合的内参基因。方法采用实时荧光定量PCR技术,对β-ac-tin、BTF3a、rsp5、rsp27a、superoxide、rspL40六个看家基因的mRNA表达水平进行了探讨。结果除rsp27a基因扩增效率高于设定值被剃除外,余5个基因在不同组织中的表达稳定度为rspL40,BTF3a>rsp5>β-actin>superoxide;吸血不同时相表达稳定度为rspL40,rsp5>superoxide>BTF3a>β-actin。结论 rspL40,BTF3在不同组织中表达最稳定;rspL40,rsp5在吸血不同时相表达最稳定。
- 吴家红程金芝孙宇陈璐
- 关键词：白纹伊蚊实时荧光定量PCR内参基因基因表达
- 白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1的克隆、表达分析被引量：3
- 2013年
- 目的克隆白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1(Aamucin1)的全长cDNA序列,并分析白纹伊蚊吸血前后基因表达的差异。方法根据白纹伊蚊罗马株Aamucin1基因序列(GenBank序列号为AY826068)设计特异引物,提取白纹伊蚊广州株唾液腺总RNA,PCR扩增Aamucin1全长基因序列,并进行生物信息学分析。实时荧光定量RT-PCR分析白纹伊蚊吸血前后Aamucin1基因表达差异。结果成功克隆白纹伊蚊广州株基因,并获得全长为849 bp的基因序列,编码283个氨基酸。白纹伊蚊广州株与罗马株Aamucin1基因序列比对在C端少了13个氨基酸。与罗马伊蚊同源序列的一致性为58%;该基因具有1个可变剪接子;Protscan分析示有苏氨酸丰富区,可变剪接子恰位于此区;饱血零时(吸血2 h,腹部饱胀者,为BSG_0组),Aamucin1基因表达显著下调,是吸血前(SG组)的0.39倍(P<0.01);饱血24 h(饱血后24 h,为BSG_24组),Aamucin1基因表达较饱血零时有回升,是吸血前(SG组)的0.61倍(P>0.05)。结论获得白纹伊蚊广州株Aamucin1基因全长序列,并证实其在mRNA水平受到吸血调控。
- 刘鉴程金芝孙宇朱儒芳张亮吴家红
- 关键词：白纹伊蚊克隆
- 白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达
- 2014年
- 目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白。
- 程金芝孙宇陈璐刘鉴吴家红
- 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂克隆表达白纹伊蚊
- 白纹伊蚊3日龄成蚊饱血前后唾液腺总蛋白谱被引量：1
- 2009年
- 目的探讨3日龄白纹伊蚊雌蚊吸食糖水组和饱血组唾液腺总蛋白谱的差异。方法分别采用Pierce蛋白定量试剂盒和SDS?PAGE电泳分析白纹伊蚊3日龄吸食糖水组和饱血组成蚊唾液腺蛋白质浓度和蛋白谱。结果糖水组蚊虫单对唾液腺蛋白质质量约为(1.243±0.460)μg,饱血组约为(0.945±0.460)μg;SDS?PAGE检测到糖水组唾液腺总蛋白有12条主带,糖水组与饱血组唾液腺总蛋白条带没有变化。结论白纹伊蚊雌蚊饱血后唾液腺总蛋白无特异条带诱导,但饱血后单对唾液腺总蛋白下降。
- 吴家红孙宇程金芝陈璐
- 关键词：白纹伊蚊唾液腺
- 白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：5
- 2010年
- 目的建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法。方法根据GenBank上白纹伊蚊β-actin基因的序列（GenBank accession number：DQ657949）,利用Primer Express3.0软件设计并合成一对引物,采用SYBRGreen I作为染料建立实时荧光定量RT-PCR法。以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,并进行溶解曲线分析。结果标准曲线Ct值检测范围为15~30,扩增效率为97.9%,相关系数为0.996,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为86.4℃。结论成功建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法,为β-actin基因作为内参基因进行白纹伊蚊功能基因表达差异研究奠定基础。
- 吴家红程金芝陈璐孙宇
- 关键词：白纹伊蚊Β-ACTIN基因实时荧光定量PCR
