孙英杰
- 作品数：116 被引量：162H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 禽Toll样受体研究进展被引量：9
- 2011年
- Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)作为一种膜表面分子,是模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)的主要组分,在脊椎动物和无脊椎动物中都可识别入侵的病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)。通过对鸡和斑胸草雀的基因组进行比对分析,发现禽中存在10种Toll样受体,其中TLR2 a、b、3、4、5和7已经证明和哺乳动物同源;有些经过基因倍增生成两个基因,TLR1La和TLR1Lb,TLR2 a和2 b;禽TLR21可能与鱼类和两栖动物的同源;禽TLR15是禽类特有的一类受体。各种禽Toll样受体在抵御各种微生物的感染过程中发挥各自重要的作用,本文就禽Toll样受体的研究进展进行简要综述。
- 丁娜孙英杰丁铲
- 关键词：TOLL样受体先天性免疫
- 新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究被引量：2
- 2015年
- 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。
- 詹媛仇旭升曲昱蓉孙英杰谭磊宋翠萍丁铲
- 关键词：新城疫病毒EIF4E
- 细胞PKR-eIF2 α抗新城疫病毒作用研究
- 新城疫病毒为副黏病毒科禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒Ⅰ型(APMV-1)，基因组为单股负链不分节段的RNA.双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)作为干扰素刺激基因的一种，能够识别病毒产生的dsRNA而活...
- 张石磊孙英杰詹嫒于胜青仇旭升谭磊陈鸿军丁铲
- 新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究
- 引言新城疫(NewcastleDisease,ND)是由新城疫病毒(NDV)强毒株引起的一种急性、烈性、高度接触传染性禽传染病,严重危害世界养禽业的健康发展。目前已有报道表明,NDV感染可以激活Akt、mTOR以及p70...
- 詹媛仇旭升曲昱蓉孙英杰谭磊宋翠萍丁铲
- 文献传递
- 新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1
- 2019年
- 副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确。本研究通过LC-MS/MS质谱对NDV La Sota病毒P蛋白的磷酸化位点进行了检测,鉴定了Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser164和Ser141六个磷酸化位点。通过在线分析,预测这些磷酸化位点的磷酸化激酶分别是PKC、CKII和GSK3。为了鉴定6个磷酸化位点的生物学功能,在已建立的表达GFP基因的NDV微型基因组质粒pTVT-LGT基础上,用荧光素酶报告基因(luciferase)替换GFP报告基因,建立了表达荧光素酶的NDV微型基因组系统。利用“丙氨酸扫描”对6个磷酸化位点进行突变后,在NDV微型基因组平台中进行功能鉴定。结果显示,T78、T82和S164位磷酸化位点的缺失显著影响了病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合体(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)的复制,其生物学意义有待进一步的研究。
- 李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：新城疫病毒质谱磷酸化位点
- H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017株反向遗传操作系统的建立
- 2020年
- 为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础.
- 李梦娇徐凯杨彬刘伟仇旭升孙英杰谭磊廖瑛宋翠萍刘炜玮张小荣丁铲孟春春吴艳涛
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型
- 新城疫病毒利用网格蛋白和小窝蛋白受体途径感染鸡骨髓来源树突状细胞
- 2023年
- 新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径感染细胞,且其入胞途径可能具有细胞类型特异性。本研究以鸡骨髓源树突状细胞(chBM-DCs)为模型,探究NDV入侵该细胞的内吞途径。首先利用CPZ(CME抑制剂)和Dynasore(dynamin1/2抑制剂)预处理DCs,然后感染NDV强毒株Herts/33,通过Western blot和IFA检测NDV NP的胞内表达水平变化。药物预处理组NP的表达水平均显著降低,表明NDV能够通过网格蛋白介导的内吞途径进入DCs。进一步利用甲基-β-环糊精(MβCD)预处理DCs,然后感染Herts/33,通过Western blot和IFA检测NDV NP的胞内表达水平变化。结果显示药物预处理组NP的表达水平显著降低,表明NDV能够通过小窝蛋白介导的内吞途径进入DCs。本研究为全面阐明NDV感染宿主细胞的途径提供了理论基础。
- 杨晓凤仇旭升孙英杰宋翠萍孟春春刘炜玮廖瑛丁铲谭磊
- 关键词：新城疫病毒
- DF-1细胞中泛素-蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响
- 2017年
- 为研究DF-1细胞的泛素-蛋白酶体系统(UPS)是否参与新城疫病毒(NDV)在细胞中复制的过程。使用Western-blot检测感染NDV Herts/33毒株的细胞样品以判断细胞内泛素化蛋白水平的变化,并检测NDV感染对细胞26S蛋白酶体水解活性的影响。检测泛素-蛋白酶体系统抑制剂对NDV感染后细胞上清中病毒滴度的影响,以及抑制剂MG-132对NDV在细胞中生长状况的影响。结果显示,虽然感染NDV后DF-1细胞内泛素化蛋白水平并未发生明显变化,但26S蛋白酶体的活性显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂可以抑制NDV在DF-1细胞中的复制。本研究结果证明DF-1细胞内泛素-蛋白酶体系统参与了NDV在DF-1细胞中的复制过程。
- 曲昱蓉詹媛仇旭升谭磊孙英杰宋翠萍孟春丁铲
- 关键词：新城疫病毒泛素-蛋白酶体系统抑制剂
- 鸡血小板衍生生长因子受体α基因的分子克隆及其真核表达蛋白鉴定
- 2022年
- 鸡血小板衍生生长因子受体α(chPDGFRα)是PDGFRs家族的一种,属于受体酪氨酸激酶(RTKs)家族成员。本研究首先运用RT-PCR技术从鸡骨髓源树突状细胞(chBM-DCs)中分子克隆得到PDGFRα基因,然后将基因片段分别定向克隆至真核表达载体pCMV-HA和p3XFLAG-CMV-14中,构建出重组chPDGFRα表达质粒pHA-PDGFRα和pFLAG-PDGFRα,经酶切鉴定及DNA测序验证正确后,分别瞬时转染至HEK293T细胞,通过Western blot和IFA进行检测。结果表明成功构建了pHA-PDGFRα和pFLAG-PDGFRα重组表达质粒,为深入研究chPDGFRα蛋白在抗病毒免疫中的分子作用机制奠定了基础。
- 杨晓凤徐丘璠乔长涛仇旭升孙英杰宋翠萍孟春春廖瑛丁铲谭磊
- 关键词：树突状细胞分子克隆真核表达
- ClassⅠ新城疫病毒强毒株主要结构蛋白特异性抗体的研制被引量：3
- 2010年
- 以新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒分离株9a5b尿囊液、原核表达的NP、P、M、HN、F五种蛋白为免疫原,接种6周龄BALB/c小鼠制备抗体,用血凝抑制试验(HI)、间接免疫荧光试验(IFA)、细胞中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-blot方法共同检测所获得的各类抗体。结果显示,成功制备获得了NDV各结构蛋白多抗及12株NDV特异性单抗。免疫特性鉴定结果表明,在获得的12株单抗中,3H7和3H9株单抗为抗ClassⅠHN特异性单抗,仅具有IFA和HI效价,而2A8株单抗却无HI效价;其他单抗均与ClassⅡ毒株存在交叉反应。
- 孙英杰陈鸿军宋翠萍于洋仇旭升于圣青丁铲
- 关键词：新城疫病毒强毒株结构蛋白特异性抗体
