张华华
- 作品数：19 被引量：34H指数：3
- 供职机构：广东医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 一种检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量简易方法的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 建立一种快速、简单的检测小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的信号结合T细胞受体删除环(signaljointTCRrearrangementexcisioncircles,sjTRECs)水平的方法,并研究其准确性,以期推测初始T细胞含量从而评价胸腺功能。方法 根据标准质粒荧光定量PCR的扩增曲线选择合适有效的扩增循环次数;优化PCR条件;梯度稀释的标准质粒(10 3 - 10 8拷贝)PCR扩增后使用图像分析软件包分析琼脂糖凝胶电泳的图像,测量PCR产物带的光密度,经统计获得标准曲线及方程。将样本的PCR产物带的光密度代入标准曲线方程,从而获得样本的sjTRECs水平读数,并和实时定量PCR结果比较。结果 获得适合的PCR条件;成功建立可信度高的标准曲线;与实时定量PCR的检测结果比较,小鼠sjTRECs含量随年龄变化的趋势一致。结论 成功建立研究方法,与实时定量PCR评价sjTRECs水平得到明显相似的结果。
- 张华华曾耀英
- 关键词：初始T细胞胸腺功能实时定量PCR
- 医学细胞生物学双语教学的探索与思考被引量：6
- 2014年
- 结合近年来在医学细胞生物学课程中开展渗透式双语教学的探索实践,总结以学生为本循序渐进、区别对待不同章节、灵活运用双语手段、持续强化教学效果等做法和经验,分析师资、教材以及学生等方面存在的问题并提出改进的对策。
- 郑克勤梁朋张华华
- 关键词：医学细胞生物学双语教学以学生为本
- 《遗传与优生》课程多元化教学模式的探索与实践被引量：2
- 2013年
- 通过对《遗传与优生》课程教学内容的整合、教学方法的改革,综合运用以案例为基础的教学、以问题为基础的教学、基于网络的知识拓展、开设综合性实验等措施,对教学模式的优化进行了探索,建立了《遗传与优生》课程的多元化教学模式。
- 郑克勤梁朋张华华
- 关键词：教学模式
- D-半乳糖诱导小鼠免疫衰老的体外研究被引量：8
- 2008年
- 目的建立和评价小鼠体外细胞及器官水平D-半乳糖致免疫衰老体系,探讨D-半乳糖对于免疫衰老的作用机制。方法建立细胞水平的D-Gal作用体系:设置不同浓度的D-Gal处理体外培养的小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞,3H-TdR掺入实验检测增殖活性;建立器官水平的D-Gal作用体系:设置D-Gal注射处理组和对照组进行小鼠胸腺器官培养,检测方法为HE染色法观察组织切片和PI染色流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果D-Gal对于小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的增殖都有明显抑制作用,并且呈剂量相关效应;胸腺器官培养15 d后,HE染色结果显示:对照组的胸腺皮髓质分界清晰,细胞形态清晰,状态良好。而D-Gal组胸腺皮髓质分界混乱,细胞形态异常;D-Gal处理后,进行器官培养的胸腺3、7、11、15 d的亚二倍体峰的百分率分别为9.19±0.41、21.65±2.68、28.59±0.93、46.36±2.20,较对照组差异显著。结论D-Gal显著抑制了T淋巴细胞的增殖活性,可以诱导细胞免疫功能的衰退,诱导细胞水平的免疫衰老;切片结果表明,胸腺器官培养15 d后,D-Gal组胸腺发生组织退化。另外,胸腺器官培养中,对照组和D-Gal组的细胞凋亡率差异显著,D-Gal组的凋亡率随时间的增加而显著上升,证实D-Gal可在胸腺内诱导细胞的凋亡,破坏胸腺微环境,在体外器官水平诱导免疫衰老。
- 张华华周汝滨
- 关键词：免疫衰老D-半乳糖胸腺
- 实时定量PCR检测小鼠成熟过程中T淋巴细胞sjTRECs水平被引量：3
- 2005年
- 目的:实时定量PCR检测正常小鼠成熟过程中胸腺及脾脏T淋巴细胞的信号结合T细胞受体重排删除DNA环(sjTRECs)含量,从而推测T淋巴细胞中的初始T细胞的数目,评价小鼠成熟过程中的胸腺功能.为胸腺发育和功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.方法:实时定量PCR(SYBRGreen法)检测T淋巴细胞中sjTRECs含量.结果:1～6wk的小鼠胸腺中的初始T细胞含量持续增加,9wk时已经开始下降,12wk时持续下降.而小鼠的外周中初始T细胞的含量则随着周龄增加而增加(1～12wk).结论:在小鼠的成熟过程中,从9wk开始胸腺的生成功能减弱,而胸腺的输出功能持续增加;成功建立和应用实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量,是准确评价小鼠胸腺功能的方法.
- 张华华曾耀英肇静娴江逊何贤辉林羿
- 关键词：实时定量PCRT细胞
- B族G蛋白偶联受体PAC1的N端基序HSDCIF对其二聚化和上膜运输的影响
- 2013年
- B族G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.HSDCIF(His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe)为位于PAC1的N端胞外1区(extracellar domain 1,EC1)的一段短肽序列,与特定负责激活PAC1受体的激动域PACAP(1-6)具有极高的同源性.利用基因敲除技术构建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突变体(简称D-PAC1);利用基因工程原理和技术构建系列真核表达重组载体,包括融合了增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)的表达载体D-PAC1-EYFP;用于生物发光能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)检测的D-PAC1-Rluc;以及用于双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫荧光检测(immunofluorescence assay)测定D-PAC1的表达;荧光共聚焦显微观察D-PAC1的细胞运输,然后通过Western印迹、BRET与BiFC方法来检测D-PAC1的二聚化情况,综合评价HSDCIF基序对PAC1二聚化和在细胞中定位的影响.检测结果显示,缺陷HSDCIF基序的突变体D-PAC1不能发生二聚化,也不能正常的进行上膜运输,而是滞留在内质网中,同时外源化学合成的寡肽HSDCIF可以竞争性地抑制正常PAC1的二聚化.
- 郭晓令余榕捷曾智星李梅钟佳萍张华华
- 关键词：二聚化
- 实时定量RT-PCR评价小鼠胸腺功能和状态方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的建立实时定量RT-PCR的分析方法,对胸腺微环境内的相关基因的表达进行准确的定性和定量,以分析胸腺微环境及其中细胞的状态,直接有效地评价胸腺功能和状态。方法提取小鼠胸腺淋巴细胞RNA;逆转录成为cDNA;PCR扩增目的片段;优化PCR体系;进行实时定量RT-PCR反应,建立扩增曲线;反应结束后,设定阈值,软件输出Ct值;根据比较Ct值法公式,获得不同处理组间相关基因表达比值。结果实时定量RT-PCR的扩增曲线为S型的动力学曲线,熔解曲线为单一峰,证实反应的准确性和特异性;36周小鼠相对于1周小鼠的胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2 2.54±0.08、Foxn1 0.68±0.02I、L-7 0.15±0.03。结论36周小鼠发生了胸腺衰老,胸腺的功能和状态均出现退化;本研究成功建立利用实时定量RT-PCR评价小鼠胸腺功能和状态方法。
- 张华华郑克勤
- 关键词：实时定量RT-PCR胸腺小鼠
- 实时定量逆转录PCR分析D-半乳糖致衰老小鼠胸腺相关基因表达的研究
- 2009年
- 目的建立D-半乳糖致衰老小鼠模型,分析其胸腺相关基因表达的研究。方法D-Gal模型组小鼠皮下注射剂量为500mg/kg·d的D-半乳糖溶液,连续注射8w;实时定量逆转录PCR方法对D-Gal模型组小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对定量以直接评价胸腺微环境。结果D-Gal模型组与对照组相比,胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2:0.94±0.76,Foxn1:0.45±0.32,IL-7:0.69±0.7。结论D-Gal模型组与对照组相比,胸腺负调控因子的表达无明显变化,而胸腺微环境上皮细胞和胸腺细胞分泌及必需的因子的基因表达显著下降,因而在个体水平上,D-Gal破坏了胸腺微环境的稳定性和功能性,使小鼠胸腺发生明显退化。
- 张华华张国平
- 关键词：D-半乳糖胸腺
- 小鼠胸腺及其功能回复性的研究
- 本文对小鼠胸腺及其功能回复性进行了研究。
第一章评价小鼠胸腺功能和状态准确方法的建立。
目的：为了准确和全面地评价胸腺的功能和状态，需建立：实时定量PCR对初始T细胞标记物(sjTRECs)进行绝对定...
- 张华华
- 关键词：胸腺功能基质细胞
- 文献传递
- 枸杞子对D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的作用被引量：4
- 2008年
- 目的:建立D-半乳糖致衰老动物模型,并设置不同处理,研究枸杞子对于小鼠胸腺功能的作用,确定其对于免疫衰老的影响。方法:小鼠分组进行造模并给药;实时定量PCR方法对处理后小鼠胸腺初始T细胞标记物(sjTRECs)进行绝对定量以评价免疫中枢器官胸腺的生成和输出功能。结果:小鼠胸腺和脾脏的T淋巴细胞中的sjTRECs的含量:D-Gal模型组<枸杞组<对照组(P<0.05)。结论:D-Gal模型组与对照组相比,小鼠胸腺的初始T细胞生成和输出功能显著减弱,成功建立了D-Gal致小鼠免疫衰老的模型。枸杞组的小鼠胸腺初始T细胞生成和输出功能较D-Gal组显著增强,具有延缓衰老和免疫保护的作用。
- 张华华梁朋
- 关键词：免疫衰老D-半乳糖胸腺
