宫强
- 作品数：152 被引量：396H指数：10
- 供职机构：河南科技大学食品与生物工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家科技攻关计划河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达被引量：3
- 2005年
- 以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以 IPTG进行诱导,终浓度为1mmol／L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增 出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白 相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断 及新型疫苗的研究奠定了基础。
- 张秀华刘思国宫强王春来王牟平彭永刚沈国顺郭洋郭设平
- 关键词：SDS-PAGE电泳核苷酸序列测定PCR产物IPTGT载体
- 牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究
- 根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东迟磊赵昆孔宪刚
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型抑制消减杂交文库的构建和分析被引量：4
- 2007年
- 为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交（SSH）法,以APP血清7型DNA作为测试方（Tester）、APP血清1型DNA作为驱动方（Driver）,进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对.结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%～100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究.首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础.
- 王勇刘思国王春来宫强刘建东刘慧芳周媛媛常月红云孟克李广兴
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌抑制消减杂交DNA文库
- 牛分枝杆菌三价串联抗原基因的原核表达及其免疫学活性研究
- 应用PCR方法从牛分枝杆菌vallee株基因组中扩增获得MPB70、MPB83和ESAT-6三个目的基因片段,利用基因搭桥和连接技术,将三基因串连于同一表达载体pET32(a)中,每个基因之间以连接肽相隔.利用大肠杆菌表...
- 郭设平刘思国张秀华王春来宫强郭洋邵美丽
- 关键词：牛分枝杆菌融合基因原核表达免疫学活性PCR方法
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究被引量：3
- 2004年
- 以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25＿4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX＿6P＿1进行连接,构建成重组表达载体pGEX＿OM Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS＿PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34kD,与实际预测相符,命名为GST＿OMPc。GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测。结果表明:纯化蛋白GST＿OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应。OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础。
- 刘思国彭永刚王牟平王春来宫强
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌克隆
- 一种亚单位疫苗免疫佐剂及应用
- 本发明介绍了一种亚单位疫苗免疫佐剂及应用，该佐剂为抗菌肽囊素三肽融合肽，其氨基酸序列为SEQ.ID.NO.1，核苷酸序列为：SEQ.ID.NO.2。本发明应用PG-1-GGGGS-3BS融合肽作为分子佐剂，可以有效增强鸡...
- 牛明福李翔宫强秦翠丽侯玉泽张敏王文辉吉萍
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗在小鼠体内的免疫机制及其保护效力被引量：6
- 2007年
- 【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu)进行攻毒保护试验。【结果】试验Ⅱ组的4种抗体水平(ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和OMP)和脾淋巴细胞诱生IL-2水平显著高于其它3组(P<0.05),脾淋巴细胞增殖水平也一直高于其它3组(P>0.05)。且试验Ⅱ组对APP1型保护作用(9/10)明显高于试验I组(6/10)、试验Ⅲ组(5/10)和对照组(0/10),而对APP2型保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它3组(典型肺部损伤),显示出细胞免疫和体液免疫水平与免疫攻毒保护之间存在着正相关性。【结论】试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对不同血清型APP的攻击提供了很好的交叉保护作用。
- 邵美丽刘思国王春来王勇宫强尹训南郭设平刘建东佟恒敏
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护力淋巴细胞增殖
- 牛结核病疫苗研究现状被引量：1
- 2008年
- 牛结核病是一种严重的人畜共患病，其传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展，不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还会引起奶牛产乳率和乳质下降，更严重威胁着人类的身心健康。据统计，人结核病有10％以上是由牛分枝杆菌引起，因此控制牛结核病具有重大的公共卫生学意义。
- 宫强刘思国
- 关键词：牛结核病奶牛乳房炎疫苗人畜共患病牛分枝杆菌公共卫生学
- 禽四种细菌病多联菊粉及油乳剂灭活疫苗的研究
- 2018年
- 为探讨菊粉对四种常见禽细菌病灭活疫苗的佐剂效应,试验将禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌分别培养至浓度为2×1010cfu/mL,按等比例混合后以终浓度为0.35%甲醛37℃灭活24 h,分别制备油乳剂和菊粉多联灭活疫苗,以动物试验检测其安全性和效力。结果表明:两种灭活疫苗均具有良好的安全性,免疫后抗体水平均呈现上升趋势,且菊粉疫苗组稍高于油乳剂疫苗组。攻毒试验结果显示两种疫苗均可为试验动物提供80%以上的保护率,且菊粉疫苗组略优于油乳剂疫苗组,说明菊粉具有较好的免疫佐剂效应。
- 田野宫强
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌鸡白痢沙门氏菌油乳剂菊粉
- 牛结核病的研究进展
- 牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病,可通...
- 刘思国王春来郭设平宫强邵美丽
- 关键词：牛结核病病原学流行病学
- 文献传递
