王春来
- 作品数：190 被引量：491H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 重排噬菌体E基因、含有该基因的打孔质粒载体及其应用
- 本发明公开了一种经基因重排后获得的PhiX174噬菌体mE基因以及含有该基因的打孔质粒载体及其构建方法，本发明还进一步涉及该孔质粒载体在制备菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明利用基因重排技术，对PhiX174噬菌体E...
- 刘思国常月红刘慧芳王春来彭伟司薇
- 文献传递
- 牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大肠杆菌中的过表达,纯化及抑菌活性被引量：14
- 2007年
- 牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽,在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列,人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段,克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体pET-B7-B5,将其转化于E.coli BL21(DE3)中实现了重组蛋白B7-B5(rB7-B5)的过表达,表达的rB7-B5以包涵体形式存在,rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6%,分子量大小为33kDa,与预测大小相符。以8mol/L尿素变性包含体后用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白,经多步透析法复性的rB7-B5对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性,为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。
- 赵昆刘思国王春来宫强迟磊刘建东王勇云孟克常月红刘慧芳周媛媛孙延鸣
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达
- 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板,PCR方法扩增出apxⅢA基因3.1kb的片段,扩增产物克隆于pMD18-T中,重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放...
- 邵美丽刘思国王春来郭洋张秀华郭设平佟恒敏
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌
- 文献传递
- 大肠杆菌打孔质粒载体、其构建方法及在制备菌蜕中的应用
- 本发明公开了一种大肠杆菌打孔质粒载体pBV－E及其构建方法，本发明还公开了该大肠杆菌打孔质粒载体在制备大肠杆菌菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明大肠杆菌打孔质粒载体采用了两个启动子，即pR、pL串联双启动子来表达E基...
- 刘思国王春来常月红刘惠芳
- 文献传递
- 广宿主打孔质粒载体、其构建方法及在制备菌蜕中应用
- 本发明公开了一种广宿主打孔质粒载体pBBR－E及其构建方法，本发明还公开了该广宿主打孔质粒载体pBBR－E在制备支气管败血波氏杆菌菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明广宿主打孔质粒载体pBBR－E由温敏调控基因cI85...
- 王春来刘思国常月红刘惠芳
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxⅡCA基因的克隆和基因缺失
- 猪传染性胸膜肺炎(porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的呼吸道疾病,能引起各个年龄的...
- 王春来刘思国王牟平孔宪刚
- 文献传递
- 一种诊断牛结核病的重组抗原蛋白及其制备方法
- 本发明公开了一种新的诊断牛结核病的重组抗原蛋白，该重组抗原蛋白是由牛分枝杆菌MPB70抗原蛋白、MPB83抗原蛋白和ESAT－6抗原蛋白依次连接而形成的融合蛋白，其中所述的MPB70抗原蛋白具有序列表SEQ ID NO：...
- 刘思国郭设平王春来张秀华郭洋邵美丽
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌主要血清型特异基因的筛选和鉴定
- 目的：该研究结果用于PCR诊断方法的靶基因，并建立副猪嗜血杆菌主要致病血清型的PCR诊断方法。方法：材料为标准15株血清型副猪嗜血杆菌菌株，根据OD260/280值检测基因组的含量和纯度，电泳凝胶检测基因组DNA的完整性...
- 张艳禾胡明明谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌靶基因基因筛选
- 副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析
- 2012年
- 为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15 000以上,表明Plp4蛋白具有良好的免疫原性。
- 朱晓凯赵福广李建军胡明明李艳玲张艳禾谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌免疫原性
- PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价被引量：1
- 2023年
- 为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果,本研究将猪圆环病毒2型(PCV2)cap基因克隆至pMAL-c5X载体中,并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的rCap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合,表明rCap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白rCdtB、rAfua和rOPPA,与rCap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗,疫苗中各蛋白(rCdtB、rAfua、rOPPA、rCap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组,采用背部多点注射方式免疫,首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体,结果显示,二免后14 d,免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001);利用PCV2免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)抗体检测试剂盒检测各组小鼠血清抗体,结果显示在攻毒前PBS组均未检测到PCV2抗体,免疫组二免后14 d抗体水平为1∶800。二免后14 d,将免疫组和PBS组各随机分为3组(每组10只小鼠)进行攻毒保护试验,结果显示二联苗对PCV2攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,对HPS5型HN10株攻毒组小鼠的免疫保护率为70%,与对照组比较差异极显著(P<0.01);对HPS13型ZD12株攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,与对照组比较差异极显著(P<0.001)。上述结果首次表明,原核表达的rCap具有良好的免疫原性,PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠具有一定的保护效果,为后续PCV2-HPS二联亚单位疫苗的研究奠定了实验基础。
- 栾慧龚俊赵馨雨危艳武李刚刘长明刘思国张万江王春来
- 关键词：PCV2副猪嗜血杆菌亚单位疫苗
