- 实时荧光定量RT-PCR检测肝卵圆细胞Alb和CK-19 mRNA的表达
- 2010年
- 目的建立Alb和CK-19 mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)系统,检测Lewis大鼠肝卵圆细胞(HOC)及其分化细胞中Alb和CK-19 mRNA表达量并分析其意义。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测分别检测HOC、分化细胞、胆道及肝脏标本中Alb和CK-19 mRNA的表达情况,以上标本各20例。结果Alb mRNA在HOC(-1.820±0.614)中的表达水平明显低于其在肝脏(-1.139±0.588)中的表达水平(P<0.05);CK-19 mRNA在HOC(-3.852±0.974)中的表达水平明显低于在胆道(-1.739±0.704)、肝脏(-1.926±0.653)、分化细胞(-1.492±0.634)中的表达水平(P<0.05);HOC Alb mRNA表达水平高于CK-19mRNA表达水平(P<0.05),分化细胞Alb mRNA(-1.758±0.543)表达水平同ck-19 mRNA表达水平差异不明显(P>0.05)。结论使用实时荧光定量RT-PCR检测HOC Alb和CK-19 mRNA的表达克服了传统PCR只能定性不能定量的缺点,为研究Alb和CK-19 mRNA在HOC中的表达提供了相对定量的方法,成功地进行该项实验需要掌控好几个关键环节;HOC中Alb mRNA和CK-19 mRNA表达量低,经过诱导分化后两者表达量明显升高,证实HOC具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双向分化特性,在本研究的诱导分化条件下HOC主要向胆管上皮细胞分化。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静刘滇生陈娟
- 关键词：肝卵圆细胞LEWIS大鼠ALBMRNACK-19MRNA
- 脂质体介导pBLAST2-hHGF质粒转染Lewis大鼠肝卵圆细胞被引量：1
- 2010年
- 背景:在体外将外源基因导入肝细胞相当困难,而利用肝脏干细胞导入外源性基因较为容易。目前大鼠肝卵圆细胞增殖模型的建立已较为成熟,但作为原代细胞,肝卵圆细胞的稳定培养和传代是较为困难的。目的:建立pBLAST2-hHGF质粒稳定转染大鼠肝卵圆细胞的细胞株,观察转染细胞的生物学特性。方法:取稳定培养的第4代雄性Lewis大鼠肝卵圆细胞,采用脂质体介导DNA转染的方法将pBLAST2-hHGF质粒转染到肝卵圆细胞,然后在倒置显微镜下观察转染细胞的形态变化、细胞增殖情况,检测细胞转染后的增殖分化能力,确定转染细胞的稳定培养条件,使用western blot和ELISA方法检测转染细胞hHGF蛋白的表达。结果与结论:第4代以脂质体介导成功转染pBLAST2-hHGF质粒的肝卵圆细胞在培养基中添加不同剂量和种类细胞因子的条件下转染细胞可稳定传代14代,其形态与未转染细胞比较无明显变化,但生长增殖速度明显快于未转染细胞,去除培养液中的生长因子后pBLAST2-Hhgf/肝卵圆细胞迅速分化为肝细胞和胆管上皮细胞,western blot方法检测转染细胞有hHGF蛋白表达,ELISA法检测培养液中hHGF蛋白含量高。结果提示,使用脂质体介导pBLAST2-hHGF质粒转染肝卵圆细胞方法可靠,转染细胞稳定培养并传代次数长于肝卵圆细胞,转染细胞具备分泌hHGF的能力,可用于后续研究。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静刘滇生李来邦陈娟
- 关键词：肝卵圆细胞质粒转染脂质体传代
- 肝移植术后合并急性胰腺炎的回顾性分析被引量：2
- 2010年
- 目的总结肝移植术后合并急性胰腺炎的诊断及预防治疗经验。方法对我院2006～2009年肝移植术后合并急性胰腺炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果本组肝移植后急性胰腺炎的发生率为5.6%(6/107),33.3%的急性胰腺炎并发患者移植术中存在胰腺损伤。起病后诊断时间和治疗时间分别为(5.1±1.1)d和(21.4±16.3)d;术后血淀粉酶和尿淀粉酶恢复时间分别为(8.0±4.1)d和(16.1±4.4)d;1例术后1个月时发现直径3cm的胰腺假性囊肿,1例术后2个月并发感染中毒性休克和多器官功能衰竭,除此外无明确并发症,并发症发生率33.3%。目前5例患者健康存活,无胰腺炎复发及慢性胰腺炎出现,治愈率83.3%。1例2个月时死于感染中毒性休克、多脏器功能衰竭,死亡率16.7%。结论肝移植术中对胰腺的骚扰是并急性胰腺炎的主要因素,诊治关键在于早期预防、早期诊断及早期正规治疗。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静李来邦陈娟
- 关键词：肝移植急性胰腺炎
- 肝移植受体术后真菌感染的针对性预防治疗
- 2010年
- 虽然肝移植术后真菌感染的预防治疗已被广泛研究和实施，但对于预防治疗患者的筛选、药物的选择和疗程，目前尚未达成统一的共识。近年来随着医疗技术的提高、人口老龄化的加快、各种肿瘤患者介入性诊疗措施和免疫抑制宿主的增加，临床上真菌感染呈现出不断增多的趋势，流行病学也发生了相应的变化。
- 李超王胤佳周志刚李志伟马继韬陈娟
- 关键词：肝移植术后真菌感染肝移植受体免疫抑制宿主肿瘤患者
- 应用SRY原位杂交技术检测肝脏干细胞移植肝内种植情况被引量：2
- 2012年
- 背景:以往干细胞种植后的定植示踪技术有磁探针标记、荧光示踪标记法、慢病毒感染荧光标记法及性别交叉Y染色体原位杂交检测法,各有优缺点。目的:应用SRY原位杂交技术观察受体来源肝脏干细胞(肝卵圆细胞)在移植肝内的定植情况。方法:二袖套法建立大鼠原位肝移植模型。供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠,设受体大鼠60只,肝卵圆细胞为Lewis大鼠来源的雄性细胞,移植中供肝种植肝卵圆细胞悬液。应用SRY原位杂交染色技术观察受体来源的雄性肝卵圆细胞在雌性移植肝内的定植情况。结果与结论:经门静脉和肝动脉注射种植的肝卵圆细胞及其分化细胞主要定植在移植肝内中央静脉及汇管区周围,应用SRY原位杂交染色技术可以有效观察到受体来源肝脏干细胞在移植肝内的定植情况。
- 李铸陈娟李学华刘志恒刘桂杰张学利高延超孙会东纪丕友张金良李立
- 关键词：肝脏干细胞细胞种植
- DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立:技术改良分析被引量：9
- 2011年
- 背景:国际上研究肝移植免疫耐受的基础动物模型是大鼠肝移植急性排斥反应模型,国际上公认的肝移植急性排斥反应模型鼠种配对方式为DA至Lewis大鼠、DA至BN大鼠及BN至Lewis大鼠,但由于鼠种缺乏和操作技术有待成熟的原因,国内较少引用以上鼠种配对方式进行该模型的建立。目的:课题组在大量SD大鼠肝移植模型建立训练的基础上,采用DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,摸索DA至Lewis大鼠肝移植急排模型建立技巧和经验。方法:通过改良二袖套法,以雄性DA大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植动物模型60只,受体大鼠术前1d和术后1周内饲喂治疗剂量的他克莫司,1周后半量递减并停药,记录移植手术时间,观察受体大鼠的术后生存状况、手术成功率及生存期,分别于术后7,14,21,28d处死受体大鼠,获取肝组织标本,苏木精-伊红染色,观察肝脏大体和镜下的病理学变化,进行急性排斥反应评分。结果与结论:供肝冷缺血时间30～60min,供体手术时间(18.5±4.0)min,供肝修整时间(7±3)min,受体手术时间(35.0±7.3)min,无肝期为(13.0±3.0)min,手术成功率为98%,1周存活率为91.6%。术后2周随着他克莫司撤药,受体大鼠迅速发生急性排斥反应,于术后14～28d死亡,平均生存时间为(20.85±0.71)d,中位生存时间为21d。实验建立DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应动物模型需要以大量SD大鼠肝移植训练为基础进行,通过对二袖套法技术的改良和围手术期短期应用他克莫司有助于该模型的稳定建立。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静刘滇生李来邦陈娟
- 关键词：急性排斥反应LEWIS大鼠原位肝移植术他克莫司
- 乙型肝炎免疫球蛋白个体化剂量协同核苷类抗病毒药降低肝移植乙型肝炎复发率被引量：2
- 2010年
- 背景:如何有效地防治肝移植后的乙型肝炎复发目前尚无统一的治疗方案。目的:评价阿德福韦酯、恩替卡韦联合不同剂量乙型肝炎免疫球蛋白等方案对肝移植后乙型肝炎复发的防治效果。方法:回顾性分析117例乙型肝炎相关性肝硬化行肝移植患者的临床资料,采用3种乙型肝炎复发防治方案,按时间先后分为5组:A组为阿德福韦酯+小剂量抗乙型肝炎免疫球蛋白的短期方案组,B组为阿德福韦酯+大剂量乙型肝炎免疫球蛋白的中长期方案组,B+组为A组中疗效较差改用方案B组,C组为恩替卡韦+适量乙型肝炎免疫球蛋白的个体化治疗方案组,C+组为A、B、B+组中疗效较差改用方案C组。比较各组患者肝移植后乙型肝炎病毒累积有效抑制率及强效抑制率的差异,随访≥2年。结果与结论:C组、C+组、B组、B+组的乙型肝炎累积有效抑制率及强效抑制率均显著高于A组(P<0.05),C组、C+组疗效分别优于B组及B+组(P<0.05)。提示肝移植后乙型肝炎复发的防治是一个长期乃至终生的过程,适量乙型肝炎免疫球蛋白加抗病毒药的个体化方案更有利于防治乙型肝炎复发。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静李来邦刘滇生吴淑媛陈娟
- 关键词：乙型肝炎免疫球蛋白肝移植乙型肝炎病毒复发
- 他克莫司撤药诱发大鼠肝移植急性排斥反应的病理学观察与分析被引量：4
- 2010年
- 目的建立大鼠肝移植急性排斥反应动物模型,观察大鼠肝移植术后他克莫司撤药诱发受体急性排斥反应的肝脏动态病理学变化,为临床肝移植术后他克莫司停药或者用药不规律所致急性排斥反应的预测和评估提供理论依据。方法通过Kamada二袖套法,建立雄性DA大鼠至Lewis大鼠的原位肝移植模型60例。受体大鼠术前1 d和术后7 d内饲喂治疗剂量的他克莫司,之后半量递减至停药。分别于术后7、14、21及28 d处死部分受体大鼠,获取肝组织标本,观察受体大鼠肝脏大体和镜下的动态病理学改变,并进行排斥活动指数评分,同时观察受体大鼠的术后生存时间。结果受体大鼠术后7 d内由于受他克莫司的保护,肝脏未出现典型的急性排斥反应表现,至术后14 d由于他克莫司的减量及撤出,迅速发生肝脏的急性排斥反应,术后14、21及28 d排斥活动指数评分分别为(3.7±0.9)分(、6.3±0.9)分和(8.1±0.7)分。受体术后生存时间为(20.85±0.71)d,中位生存期为21 d。结论通过围手术期短期饲喂治疗剂量他克莫司并逐渐减量至撤药诱发肝移植大鼠急性排斥反应模型术后的急性排斥反应,动态观察该实验条件下排斥反应发生的时限和严重程度,对临床肝移植术后类似情况下所发生的急性排斥反应具有一定的预测价值和严重程度评估价值。
- 李铸李立冉江华张升宁刘静刘滇生李来邦陈娟
- 关键词：原位肝移植术急性排斥反应他克莫司
- 血型不相容肝移植新型策略临床的应用被引量：6
- 2011年
- 目的探讨血型不相容肝移植新型策略运用的疗效。方法回顾性分析血型不相容同种异体原位肝移植4例临床资料,4例均为成人ABO血型不相容肝移植,3例AB型供给O型,1例AB型RH(+)供给A型RH(-)。采用术前设定的围术期新策略预防急性排斥反应,包括四联免疫抑制剂、选择性血浆置换、术后输注免疫球蛋白和前列腺素E1、术中切脾、降阶梯策略预防及治疗术后感染。结果 1例患者术后第3天发生抗体介导的超急性排异反应,经血浆置换联合甲基强的松龙冲击治疗治愈;2例发生急性肾功衰,经床旁血液净化治愈;所有患者术后均发生感染并治愈,全部存活出院,随诊2～10个月,肝肾功正常。结论采用四联免疫抑制剂﹑术中切出脾脏﹑选择性血浆置换,输注免疫球蛋白及脂质体前列腺素E1及降阶梯抗感染治疗新策略,也许是提高跨血型肝移植成功率的有效办法之一。
- 李志伟李超马继韬陈娟王胤佳周志刚梁爱君
- 关键词：肝移植ABO血型系统RH-HR血型系统
- 受体来源肝卵圆细胞在移植肝内种植后的增殖与分化
- 2011年
- 背景:肝卵圆细胞移植后对受损肝脏具有修复作用。目的:观察受体来源肝卵圆细胞对受体大鼠术后生存期及肝功能的影响。方法:采用二袖套法建立大鼠原位肝移植模型,供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠。造模后随机分为对照组(不进行细胞移植)、实验组(移植过程中供肝经门静脉和肝动脉注射受体来源肝卵圆细胞1×109L-1)。结果与结论:实验组术后撤他克莫司后的中位生存期和累积生存率均优于对照组(P<0.05),移植肝肝细胞受损情况弱于对照组(P<0.05),移植肝合成和排泄功能明显好于对照组(P<0.05)。表明在移植肝脏内种植受体来源肝卵圆细胞可有效改善移植肝功能,并且明显延长受体生存时间,提高累积生存率,该结果可能与受体来源肝卵圆细胞在移植肝内增殖分化,修复受损肝脏和减轻急性排斥反应有关。
- 李铸陈娟李学华刘志恒刘桂杰张学利高延超孙会东纪丕友李立张金良
- 关键词：肝卵圆细胞肝移植肝功能
