王中平
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究
- 2008年
- 目的构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性。方法从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性。将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性。结果扩增出816bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带。经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高。结论成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应。
- 黄毕鲍朗钟琪商正玲张会东王中平
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白LIPL32细胞毒性
- 赖型钩端螺旋体毒力基因mviN的克隆表达及功能研究
- 钩端螺旋体/(Leptospira/)是系统发育进化上结构和遗传特征都较特殊的一类微生物，它所导致的钩端螺旋体病是在世界范围内流行的人兽共患自然疫源性疾病。问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株全基因组测序于2003年...
- 王中平
- 关键词：钩端螺旋体细胞增殖细胞凋亡率
- 文献传递
- 赖型钩端螺旋体毒力基因mviN的克隆表达及其功能研究
- 王中平
- 问号钩端螺旋体毒力基因mviN的表达及细胞毒性作用研究
- 2007年
- 目的克隆表达问号钩端螺旋体毒力基因mviN并观察表达产物对血管内皮细胞ECV304及肺上皮细胞A549的毒性作用。方法将mviN基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-mviN,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-MviN融合蛋白,并作亲和层析纯化。以XTT法检测毒力蛋白Trx-MviN对ECV304及A549细胞增殖的抑制作用,同时以流式细胞术检测其作用于ECV304及A549后的细胞凋亡率。结果成功构建了重组质粒pET-mviN并高效表达出Trx-MviN融合蛋白;毒力蛋白Trx-MviN作用于ECV304及A549后,与对照组相比较,其细胞增殖被显著抑制(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论重组质粒pET-mviN高效表达出Trx-MviN融合蛋白,纯化后的融合蛋白Trx-MviN对ECV304及A549具有细胞毒性作用。
- 王中平鲍朗张会东商正玲钟琪郝牧朱海龙
- 关键词：钩端螺旋体毒力细胞凋亡率
- 赖型钩端螺旋体溶血素HlyX基因的克隆、表达及其细胞毒效应被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆、表达HlyX基因并研究其细胞毒性效应。方法:从赖型钩端螺旋体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化E.coliJM109,诱导表达HlyX;将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western blotting鉴定其免疫原性;将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测ECV304细胞乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮(NO)的释放量研究目的蛋白的细胞毒性效应。结果:扩增出1179bp的目的基因HlyX,重组质粒经双酶切、PCR鉴定,测序结果表明重组质粒构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白约64kD,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1∶64000;Western blotting鉴定在目的蛋白的位置处有特异性阳性条带。经过HlyX融合蛋白作用的ECV304细胞LDH和NO释放量明显高于对照组(P<0.01)。结论:HlyX能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有毒性效应。
- 黄毕鲍朗钟琪商正玲王中平
- 关键词：钩端螺旋体属溶血素类细胞毒性
