鲍朗
- 作品数：148 被引量：266H指数：8
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌Clp蛋白酶复合体研究进展被引量：1
- 2015年
- Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌蛋白质的代谢调控过程中发挥着极其重要的作用,维持结核分枝杆菌感染宿主后的正常生存和繁殖的功能。对Clp蛋白酶复合体的组成、作用机制及其生物学功能等方面的最新研究进展进行综述。
- 袁晋宁鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白质代谢
- 赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体的构建及在COS7细胞中融合表达的研究
- 2009年
- 从赖型钩端螺旋体017株全基因组中通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)分别扩增出脂蛋白32(LipL32)和溶血素-X(HlyX)基因,应用重叠延伸PCR技术(Gene splicing by overlap extension PCR,SOEPCR)获得LipL32-HlyX融合基因。以pcDNA3.1为载体,LipL32-HlyX为目的基因,双酶切构建重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经双酶切、PCR及测序鉴定证实重组质粒构建成功。脂质体转染法将构建成功的重组质粒转染COS7细胞,RT-PCR扩增出约2000bp的目的基因,Western blotting分析发现在75KD处出现特异性的阳性条带。结果证实赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体能在哺乳动物细胞中表达,为钩体DNA疫苗的研究和开发奠定了基础。
- 黄毕鲍朗钟琪张会东张英
- 关键词：钩端螺旋体真核表达
- 赖型钩端螺旋体外膜蛋白Loa22诱导细胞凋亡Ca^(2+)信号通路机制
- 2010年
- 吴秉婷孙湛李道坤鲍朗
- 关键词：赖型钩端螺旋体细胞凋亡细胞内游离钙成熟肽流式细胞仪检测钙调素
- 先天性多数牙齿缺失家系PAX9基因两个新突变功能的初步研究被引量：3
- 2005年
- 目的对成对盒基因(pairedboxgene,PAX)PAX9两个新突变109(InsG)及139(C→T)分子生物学功能及与先天性多数牙齿缺失的发病机理进行初步探讨。方法分别以先天性多数牙齿缺失家系A[109(InsG)]、家系B[139(C→T)]中患者及健康成员基因组DNA为模板,PCR扩增PAX9基因DNA结合域序列(paireddomain,PD),构建原核表达质粒GST,进一步在大肠杆菌中诱导表达,纯化表达产物,分离制备PAX9PD蛋白。凝胶迁移试验检测PAX9PD蛋白与靶DNA(CD192和Pax6CON)结合活性。结果野生型PAX9PD蛋白与靶DNA结合,109(InsG)及139(C→T)突变的PAX9PD蛋白皆失去与靶DNA结合能力。结论109(InsG)及139(C→T)突变造成PAX9基因DNA结合域功能丧失,可能是导致多数牙齿先天性缺失的原因。
- 赵计林陈扬熙鲍朗吴拓江周力
- 关键词：家系疾病基因突变
- 表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的免疫功能研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌在动物体内的免疫功能。方法用表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞增殖实验检测重组耻垢分枝杆菌的免疫原性,利用流式细胞术分析小鼠T淋巴细胞亚群比例的变化,通过病理学切片观察重组耻垢分枝杆菌在动物体内的毒力。结果重组耻垢分枝杆菌诱导的脾淋巴细胞增殖反应、CD4+T细胞比例均明显高于对照组;重组耻垢分枝杆菌不会导致脏器的器质性病变。结论表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌免疫原性显著增强,且毒力无明显改变,有望成为一种新型的结核病疫苗。
- 李岩鲍朗李娅莎
- 关键词：ESAT-6小鼠耻垢分枝杆菌
- 致病钩端螺旋体特异消减片段的序列测定与分析被引量：1
- 2004年
- 对24个已鉴定的赖型致病钩端螺旋体特异消减片段进行DNA序列测定和生物信息学分析.结果显示,片段两端皆含有AluⅠ酶切位点,片段大小为149～1506bp,平均480bp,GC含量平均为36 63%.其中6个序列无任何同源匹配序列,提示可能来自新基因;18个同源序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关,与生化代谢修饰相关的酶.在Genbank中登记其中20个序列,序列号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.这些基于生物信息学的功能预测,将有助于在此基础上进行相关的基因克隆鉴定、表达分析及功能验证.
- 胡昌华鲍朗毕小君
- 关键词：钩端螺旋体生物信息学
- 莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建被引量：2
- 1999年
- 从莱姆病螺旋体染色体编码８３ｋｄ抗原蛋白（Ｐ８３）基因序列中选择编码近Ｃ端１５９个氨基酸的基因序列作为扩增的靶序列，自行设计并合成一对寡核苷酸引物，以莱姆病螺旋体Ｂ３１株基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约４７７ｂｐ的扩增片段，再把该片段与质粒载体ｐＢＫ－ＣＭＶ进行重组，经鉴定得到重组质粒ｐＢＸ１。重组质粒ｐＢＸ１可同时在真核和原核细胞中表达，其表达产物可用来制备莱姆病血清学诊断用的标准抗原；该重组质粒也可用来制备用于对莱姆病螺旋体进行分类鉴定的核酸探针。
- 鲍朗谢勇恩
- 关键词：莱姆病PCR扩增
- 赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究
- 2008年
- 目的构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性。方法从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性。将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性。结果扩增出816bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带。经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高。结论成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应。
- 黄毕鲍朗钟琪商正玲张会东王中平
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白LIPL32细胞毒性
- 赖型钩端螺旋体Loa22重组质粒的蛋白表达和对巨噬细胞的毒性作用被引量：3
- 2008年
- 目的对赖型钩端螺旋体Loa22基因进行表达和功能研究。方法构建赖型钩端螺旋体Loa22成熟肽重组质粒,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting检测目标蛋白表达情况。经亲和层析获得目标蛋白并作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、四氮唑复合物(XTT)吸光度值和细胞凋亡率以评价其细胞毒性。结果成功构建Loa22成熟肽原核表达质粒,通过鉴定并纯化得到Loa22成熟肽,该蛋白使培养ANA-1细胞上清液中LDH活力升高,XTT吸光度值下降,细胞凋亡率增加。结论Loa22对ANA-1具有明显的毒性效性,该基因可能是致病钩体的一个重要毒力相关基因。
- 张英鲍朗朱海龙黄毕章乐张会东
- 关键词：钩端螺旋体巨噬细胞细胞毒性
- 结核病免疫应答中自噬现象的分子机制和意义被引量：4
- 2012年
- 越来越多的证据表明，自噬是结核免疫反应的重要组成部分。自噬可以杀灭结核分枝杆菌、调节促炎细胞因子的分泌、增加抗原递呈功能。自噬与其他抗菌途径如维生素D3、炎性体、泛素系统存在协同作用。另一方面，结核分枝杆菌可以调控巨噬细胞的自噬。目前，自噬已成为临床重要的诊疗靶点。其能诱导自噬的药物，可以作为佐剂治疗耐药性结核；能有效诱导自噬的疫苗，可能提供更好的免疫保护作用。
- 黄丹丹鲍朗
- 关键词：自噬结核分枝杆菌
