目的构建野生型和突变型PSD-95(postsynaptic density protein95)的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞系中表达。方法采用RT-PCR扩增大鼠PSD-95的cDNA,以PSD-95-GW1为模板,以PCR扩增PSD-95序列的突变体Myc-ΔSG(-SH3-GK)和Myc-ΔG(-GK),分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)。以脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的蛋白表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型/突变型PSD-95基因完全正确;免疫印迹法检测表明,转染的重组质粒能在COS-7细胞中高效表达。结论构建的PSD-95-pcDNA3.1(+)、Myc-ΔSG-pcDNA3.1(+)和Myc-ΔG-pcDNA3.1(+)重组载体在COS-7细胞系中高效地表达,为深入研究PSD-95在缺血性脑损伤中的作用及机制打下基础。
PSD-95(postsynaptic density protein 95)是在兴奋性突触后密集区中纯化鉴定出的一种脚手架蛋白。通过PDZ(1-3)、SH3和GK结构域,PSD-95募集多种信号分子,在谷氨酸受体的信号整合和转导中具有关键性作用。PSD-95的功能异常与多种神经精神疾病密切相关,是多种重大脑病防治的新的药物作用靶点。
